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秦岭链霉菌的原生质体再生与诱变育种 被引量：7
1
作者 卞小莹 吴文君 +1 位作者 王群利 方丽萍 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期929-933,共5页
在秦岭链霉菌(Streptomyces qinlingensis sp.nov.)的菌种改良中,应用原生质体再生并结合物理化学诱变能够得到产量较高、稳定性较好的菌株。筛选实验表明:秦岭链霉菌原生质体再生菌株R-72、诱变菌株NTG-1和H30-7对枯草芽孢杆菌的抗菌... 在秦岭链霉菌(Streptomyces qinlingensis sp.nov.)的菌种改良中,应用原生质体再生并结合物理化学诱变能够得到产量较高、稳定性较好的菌株。筛选实验表明:秦岭链霉菌原生质体再生菌株R-72、诱变菌株NTG-1和H30-7对枯草芽孢杆菌的抗菌活性均提高了20%以上,并且连续培养10代,其遗传性状均比较稳定。进一步的生测实验表明菌株R-72、NTG-1和H30-7对5种病原细菌和5种植物病原真菌的抗菌活性相比原始菌株有显著提高。 展开更多
关键词 秦岭链霉菌 原生质体再生 原生质体诱变 筛选
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土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选 被引量：12
2
作者 王群利 师宝君 +1 位作者 卞小莹 姬志勤 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期41-46,共6页
以常见植物病原真菌和细菌为指示菌,从分离的422株放线菌中筛选出28株可代谢抗细菌活性物质的菌株,其中N331、N393菌株发酵液对供试12种真菌有显著的抑制作用。离体条件下,N331、N393菌株发酵液对供试真菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)均... 以常见植物病原真菌和细菌为指示菌,从分离的422株放线菌中筛选出28株可代谢抗细菌活性物质的菌株,其中N331、N393菌株发酵液对供试12种真菌有显著的抑制作用。离体条件下,N331、N393菌株发酵液对供试真菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)均小于15 mL/L;对玉米弯孢病菌、棉花枯萎病菌、小麦根腐病菌、黄瓜霜霉病菌孢子萌发的EC50亦小于15 mL/L。盆栽试验结果表明,N331、N393菌株发酵原液对黄瓜霜霉病的保护效果分别为97.4%和85.6%,治疗效果分别为83.3%和59.3%。 展开更多
关键词 放线菌 抗菌活性 筛选
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利用异源表达挖掘纤维堆囊菌So0157-2的新型天然产物 被引量：1
3
作者 周海波 申琪瑶 +4 位作者 陈汉娜 王宗杰 李越中 张友明 卞小莹 《合成生物学》 CSCD 2021年第5期837-849,共13页
黏细菌是天然产物的重要来源。纤维堆囊菌So0157-2是抗癌药物埃博霉素的产生菌,并且是已知基因组最大的原核生物。生物信息学分析发现该菌一共含有35个次级代谢产物生物合成基因簇,除了已知的埃博霉素基因簇和其他两个萜类化合物生物合... 黏细菌是天然产物的重要来源。纤维堆囊菌So0157-2是抗癌药物埃博霉素的产生菌,并且是已知基因组最大的原核生物。生物信息学分析发现该菌一共含有35个次级代谢产物生物合成基因簇,除了已知的埃博霉素基因簇和其他两个萜类化合物生物合成基因簇与已知基因簇的相似度为100%之外,其他基因簇与已知化合物基因簇相似度均较低,其中包括17个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)、非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)及其杂合的基因簇。由于纤维堆囊菌So0157-2生长缓慢、培养困难且难以在本源菌中进行遗传改造。因此,将其生物合成基因簇转移到简单宿主中,利用异源表达策略是挖掘该菌中新颖天然产物的一个有效途径。本文利用直接克隆技术从纤维堆囊菌So0157-2基因组DNA中克隆了1个包含NRPS和PKS结构域的基因簇BGC18,将其转移至伯克氏菌DSM 7029中进行异源表达。通过液质联用分析,色谱柱靶向分离纯化,进而通过NMR结构鉴定和Marfey反应确定了3个化合物分别为Cyclo(N-Me-L-Leu-L-Val)(1)、Cyclo(N-Me-L-Leu-LLeu)(2)、Cyclo(N-Me-L-Leu-L-Ile)(3)。化合物结构的多样性来源于第1个腺苷化结构域对底物识别的宽泛性(Val/Leu/Ile)。生物合成途径分析推测由于缺少硫醇化结构域导致PKS模块被跳过,从而只获得了NRPS指导合成的环二肽产物1~3,这可能是细菌中一种实现化合物多样性的方式。本论文以基因簇直接克隆与异源表达相结合的策略,成功实现了一个来源于纤维堆囊菌So0157-2中的NRPS-PKS杂合基因簇的异源表达,分离并鉴定了3个该基因簇对应的表达产物。本研究为后续从该菌株中挖掘更多活性天然产物奠定了技术基础,也为其他难培养菌株的次级代谢产物的挖掘提供了思路。 展开更多
关键词 异源表达 纤维堆囊菌 基因组挖掘 非核糖体肽 二酮哌嗪
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WAP-8294A类抗生素及其高效合成的研究进展
4
作者 白先平 陈汉娜 +2 位作者 钟林 王邢艳 卞小莹 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期417-425,共9页
WAP-8294A是从Lysobacter sp.发酵液中分离得到的环状脂肽类抗生素。其主要产物WAP-8294A2(lotilibcin)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有强抑制活性,该类化合物通过选择性识别存在于革兰阳性细菌细胞质膜中的甲基萘醌(MK),破坏细... WAP-8294A是从Lysobacter sp.发酵液中分离得到的环状脂肽类抗生素。其主要产物WAP-8294A2(lotilibcin)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有强抑制活性,该类化合物通过选择性识别存在于革兰阳性细菌细胞质膜中的甲基萘醌(MK),破坏细胞膜来杀死细胞,但其低产量限制了工业化生产。本文综述了近年来WAP-8294A类抗生素的研究进展,重点介绍了该类化合物的起源及生物合成;活性靶点及其构效关系;产量提高策略。为后续探索WAP-8294A类抗生素大规模生产的最适条件及设计其高活性衍生物奠定基础。 展开更多
关键词 WAP-8294A类抗生素 Lysobacter sp. 生物合成 产量
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一株产灵菌红素黏质沙雷氏菌的分离鉴定及其基因组分析
5
作者 张雨欣 王美燕 +4 位作者 李殿怡 司军 卞小莹 牛国清 刘蓉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4290-4307,共18页
【目的】对甘蓝根际微生物进行分离,从中选择具有优良性状的菌株,对其次级代谢产物合成能力进行评估,为甘蓝根际微生物资源的发掘利用奠定基础。【方法】采集重庆市武隆区仙女山镇仙女山村甘蓝根,分离培养根际微生物菌株,从中选择一株... 【目的】对甘蓝根际微生物进行分离,从中选择具有优良性状的菌株,对其次级代谢产物合成能力进行评估,为甘蓝根际微生物资源的发掘利用奠定基础。【方法】采集重庆市武隆区仙女山镇仙女山村甘蓝根,分离培养根际微生物菌株,从中选择一株黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),利用PacBio RS II平台和Illumina HiSeq平台完成全基因组测序,通过antiSMASH分析评估其合成次级代谢产物的潜力,采用Red/ET重组工程技术克隆目的基因簇并进行异源表达。【结果】从甘蓝根际分离鉴定到一株产灵菌红素的黏质沙雷氏菌,对其进行基因组测序及分析发现,基因组含有11个次级代谢产物生物合成基因簇,其中9个基因簇与已知化合物编码基因簇相似性较低,说明该菌具有产生多种新型次级代谢产物的潜力;HPLC分析和高分辨质谱检测鉴定了灵菌红素;克隆了灵菌红素生物合成基因簇,并在大肠杆菌中实现了异源表达;选择4种大肠杆菌常用启动子驱动灵菌红素基因簇的表达,发现rpoS启动子具有较好的效果。【结论】本研究从甘蓝根际分离得到一株产灵菌红素的黏质沙雷氏菌,完成了全基因组测序和分析,从中克隆得到灵菌红素生物合成基因簇,并成功在大肠杆菌中异源表达。 展开更多
关键词 甘蓝 黏质沙雷氏菌 灵菌红素 基因组分析 生物合成基因簇 异源表达
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枯草芽孢杆菌中bacilosarcin B对美人鱼发光杆菌的抑菌机理
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作者 唐海峰 戴昀峰 +6 位作者 扶洋帆 邹一明 高占 盘赛昆 王文彬 杨杰 卞小莹 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期419-432,共14页
【背景】美人鱼发光杆菌(Photobacteriumdamselae)是一种海洋条件致病菌,能够引起多种海洋生物和人类疾病。因此,探究美人鱼发光杆菌的生物防治技术具有重要意义。【目的】探究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中bacilosarcin B对美人... 【背景】美人鱼发光杆菌(Photobacteriumdamselae)是一种海洋条件致病菌,能够引起多种海洋生物和人类疾病。因此,探究美人鱼发光杆菌的生物防治技术具有重要意义。【目的】探究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中bacilosarcin B对美人鱼发光杆菌的抑菌活性及其可能的抑菌机理。【方法】利用高效液相色谱法从枯草芽孢杆菌fmb60发酵液中制备bacilosarcin B,采用分光光度法测定bacilosarcinB对多种致病菌的最小抑菌浓度及其对美人鱼发光杆菌的时间-抑菌曲线。测定bacilosarcin B对美人鱼发光杆菌生物被膜、胞外核酸、蛋白质和胞内碱性磷酸酶含量的影响,结合荧光显微镜、扫描电镜和透射电镜检测美人鱼发光杆菌细胞膜通透性和细胞壁完整性,并研究bacilosarcin B对细菌运动能力和胞内DNA的作用。【结果】Bacilosarcin B对美人鱼发光杆菌最小抑菌浓度为8μg/mL。抑菌机理研究表明bacilosarcin B通过破坏细菌细胞壁和细胞膜的完整性使细胞膜通透性增强,造成细胞内成分渗出。此外,bacilosarcinB还可与胞内DNA结合,且结合方式与溴化乙锭(ethidium bromide,EB)插入DNA结构类似。【结论】Bacilosarcin B对美人鱼发光杆菌具有显著的抑菌效果,具有研发成新型抑菌剂的潜力,对海洋养殖业的健康发展具有一定的意义。 展开更多
关键词 bacilosarcin B 美人鱼发光杆菌 细胞膜 抑菌机理
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Red/ET同源重组技术及其在微生物基因组挖掘中的应用进展 被引量：5
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作者 郑文韬 张友明 卞小莹 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1735-1746,共12页
Red/ET同源重组技术(Red/ET recombineering)是由来源于大肠杆菌λ噬菌体的蛋白对Redα/Redβ或来源于Rac原噬菌体的蛋白对Rec E/Rec T所介导的基于短同源臂(40–50 bp)的同源重组技术,能对宿主DNA序列进行快速、高效、精确的修饰和操... Red/ET同源重组技术(Red/ET recombineering)是由来源于大肠杆菌λ噬菌体的蛋白对Redα/Redβ或来源于Rac原噬菌体的蛋白对Rec E/Rec T所介导的基于短同源臂(40–50 bp)的同源重组技术,能对宿主DNA序列进行快速、高效、精确的修饰和操作。本文主要综述了2010年以来Red/ET同源重组技术在大肠杆菌及其他细菌中的研究进展,同时简要介绍了该技术在微生物基因组挖掘,尤其是在微生物基因簇的异源表达领域的应用进展。 展开更多
关键词 Red/ET同源重组技术 直接克隆 遗传工程 基因组挖掘 次级代谢产物 异源表达
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