甲藻染色体在非细胞体系核重建过程中核小体的组装 被引量：1

1

作者 刘晓玲 陶伟 +2 位作者 高云飞 卢智刚 翟中和 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第12期1224-1228,共5页

利用纯化的原始真核生物寇氏隐甲藻 (CrypthecodiniumcohniiE .)染色体 ,使之与非洲爪蟾 (XenopuslaevisL .)S期卵提取物温育 ,发现甲藻染色体经历了一系列去凝集、再凝集的形态变化 ,最后形成类似典型高等真核生物的间期核结构。小球... 利用纯化的原始真核生物寇氏隐甲藻 (CrypthecodiniumcohniiE .)染色体 ,使之与非洲爪蟾 (XenopuslaevisL .)S期卵提取物温育 ,发现甲藻染色体经历了一系列去凝集、再凝集的形态变化 ,最后形成类似典型高等真核生物的间期核结构。小球菌核酸酶酶切分析表明 ,不具备组蛋白和核小体结构的甲藻染色体在非洲爪蟾卵提取物中进行了核小体装配 ,此过程与DNA序列本身、核膜以及核纤层蛋白 (Lamin)是否存在无关 ,但部分拓扑异构酶Ⅱ (TopoⅡ )参与了这个过程 ,说明核小体的组装并非为核重建所必需 ,决定染色体高级结构的因素并不在DNA本身 。 展开更多

关键词 甲藻 染色体 非细胞体系 核重建 核小体装配

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洋葱染色体螺旋与放射环结构的电镜观察

2

作者 陶伟 刘晓玲 +2 位作者 赵允 卢智刚 翟中和 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期795-801,共7页

染色体经DNA特异染色后 ,观察到其最高层次结构是螺旋的 ,而次级结构存在着放射环结构 ,即由直径为 2 5～ 30nm的DNA纤丝放射状折叠排列成约 2 50nm左右的染色单体丝 ;染色单体丝进一步螺旋形成中期染色体结构。这些观察结果和染色体的... 染色体经DNA特异染色后 ,观察到其最高层次结构是螺旋的 ,而次级结构存在着放射环结构 ,即由直径为 2 5～ 30nm的DNA纤丝放射状折叠排列成约 2 50nm左右的染色单体丝 ;染色单体丝进一步螺旋形成中期染色体结构。这些观察结果和染色体的螺旋与放射环共存模型非常相似。这个模型应更接近于洋葱染色体真实结构。 展开更多

关键词 DNA特异染色 放射环结构 洋葱 染色体 螺旋结构

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增强型青色荧光蛋白慢病毒表达载体的构建

3

作者 曹鸿国 卢智刚 +2 位作者 罗敏 袁克湖 邓宏魁 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期836-839,共4页

目的:通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白(ECFP)慢病毒表达载体。方法与结果:根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基... 目的:通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白(ECFP)慢病毒表达载体。方法与结果:根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基因片段,将其与载体连接,得到ECFP慢病毒表达载体pLentiLox3.7-ECFP,测序结果证实经过多点突变扩增的ECFP片段基因序列完全正确;磷酸钙介导pLentiLox3.7-ECFP在293T细胞中表达,48h后在荧光显微镜下观察到青色荧光蛋白。结论:通过多点突变的方法得到了ECFP慢病毒表达载体。 展开更多

关键词 慢病毒载体 绿色荧光蛋白 青色荧光蛋白 点突变

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H_2O_2诱导Neuro-2a细胞死亡机理的研究 被引量：2

4

作者 张震 杨巍 +2 位作者 朱山 卢智刚 翟中和 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期35-43,共9页

细胞内线粒体呼吸链过程中的电子漏和神经细胞代谢的酶类如单胺氧化酶(MAO)等可产生活性氧物质(ROS)如H_2O_2等。ROS对细胞有毒性作用,导致细胞死亡,在许多疾病特别是神经退行性疾病中具有重要作用。我们用H_2o_2诱导N-2a神经母细胞瘤细... 细胞内线粒体呼吸链过程中的电子漏和神经细胞代谢的酶类如单胺氧化酶(MAO)等可产生活性氧物质(ROS)如H_2O_2等。ROS对细胞有毒性作用,导致细胞死亡,在许多疾病特别是神经退行性疾病中具有重要作用。我们用H_2o_2诱导N-2a神经母细胞瘤细胞,利用光镜、荧光显微镜、透射电镜观察了诱导的N-2a细胞的死亡,结果表明其死亡形式不同于典型的细胞凋亡,而类似于Ⅱ型神经细胞编程性死亡,死亡细胞染色质呈团块状凝集,细胞核膜仍保持完整。DNA不降解形成ladder,且不需要caspase-3,1的活性,但是H_2O_2诱导的Neuro-2a细胞死亡可以被Bcl-X_L,抑制。我们的结果可以说明,ROS介导的细胞毒性作用是导致Ⅱ型神经细胞编程性死亡的一个原因。 展开更多

关键词 神经细胞 H2O2 过氧化氢 Neuro-2a细胞 死亡机理

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Caspase-3细胞定位信号的检测与分析 被引量：1

5

作者 卢智勇 卢智刚 曾昭淳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期543-548,共6页

Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一... Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一系列含caspase-3不同区段的截短突变体,与GFP融合表达,观察它们在细胞中的定位,以鉴定caspase-3分子中所含的核输出信号（nuclear export signal,NES）和核定位信号NLS（nuclear localization signal,NLS）.结果发现,caspase-3分子中不存在明显的NLS,但存在一个明显的NES,该NES定位在caspase-3小亚基的C端,包括220-245位氨基酸残基. 展开更多

关键词 胱天蛋白酶3 核输出信号 核定位信号

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针对核质运输的高通量小分子筛选方法

6

作者 罗敏 张全仓 卢智刚 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期927-934,共8页

核质运输是真核细胞的重大基本生命活动。核质运输小分子抑制剂不仅可以广泛应用并促进核质运输相关的基础研究,同时也为相关疾病、尤其是病毒性疾病的药物开发提供有利线索。然而,目前针对核质运输的商业化小分子仅有Leptomycin B一种... 核质运输是真核细胞的重大基本生命活动。核质运输小分子抑制剂不仅可以广泛应用并促进核质运输相关的基础研究,同时也为相关疾病、尤其是病毒性疾病的药物开发提供有利线索。然而,目前针对核质运输的商业化小分子仅有Leptomycin B一种。建立一个针对整个核质运输通路的小分子筛选平台,将有利于筛选与获得多种干扰核质运输的小分子。文章利用NZGFP和CZGFP可以重组为具有荧光GFP的特性,构建NZGFP-NES和CZGFP-NLS,将NZGFP和CZGFP分别定位在细胞质与细胞核中;当核内运或核外运通路被干扰,NZGFP和CZGFP定位发生改变并聚集重组为具有荧光的GFP。该方法可以有效检测核外运小分子抑制剂LeptomycinB的作用,为针对整个核质运输通路的高通量小分子筛选提供了一个有效平台。 展开更多

关键词 核质运输 高通量筛选方法 NZGFP/CZGFP LeptomycinB

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免疫抑制性受体LILRB2促进新型冠状病毒刺突蛋白介导的炎症过程 被引量：1

7

作者 杨文倩 陈迟琪 +4 位作者 赵路 曹力元 夏一秋 卢智刚 郑俊克 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1188-1196,共9页

目的·探究免疫抑制性受体白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2,LILRB2)在新型冠状(新冠)病毒感染所导致的免疫细胞炎症因子释放中的作用及机制,为新冠病毒肺炎治疗... 目的·探究免疫抑制性受体白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2,LILRB2)在新型冠状(新冠)病毒感染所导致的免疫细胞炎症因子释放中的作用及机制,为新冠病毒肺炎治疗提供潜在靶点。方法·收集包含刺突蛋白胞外段(S-ECD)的细胞上清液,分别使用Western blotting及流式细胞术检测上清液中蛋白表达情况及活性;通过流式细胞术及免疫共沉淀技术检测该上清液中S-ECD与LILRB2的结合;用刺突蛋白处理人单核细胞系THP1或人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),24 h后收集细胞,使用实时定量PCR技术检测相关炎症因子基因mRNA水平改变,同时使用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)及IL-1β含量;将si LILRB2通过Lipofectamine 3000试剂转染至人外周血CD33~+髓系细胞中,24 h后使用流式细胞术检测基因干扰效果;在对照组及LILRB2敲低的CD33~+髓系细胞中加入刺突蛋白培养24 h,使用酶联免疫吸附试剂盒检测细胞培养液中IL-6的含量变化。结果·实验成功构建可分泌具有生物活性的新冠病毒S-ECD的293T细胞转染体系;免疫共沉淀实验显示刺突蛋白与LILRB2蛋白存在相互作用,且流式细胞术结果提示刺突蛋白胞外段能够与细胞表面的LILRB2结合;与对照组相比,经刺突蛋白处理24 h的THP1细胞中IL-6、IL-8、精氨酸酶(arginase 1)及IL-2基因表达水平均有明显上调(均P<0.05);PBMC经刺突蛋白处理24 h后,IL-6、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、IL-8、IL-10及IL-1β的mRNA水平均显著上升(均P<0.05);酶联免疫吸附实验结果显示,在PBMC培养液中加入刺突蛋白能够提高上清液中IL-6及IL-1β的浓度(均P<0.05);使用S-ECD或刺突蛋白处理CD33~+髓系细胞,IL-1β及IL-6含量随之升高(均P<0.05);并且过表达LILRB2的THP1细胞经刺突蛋白刺激后展现了更强的IL-6分泌能力(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,2条siRNA均能敲低CD33~+髓系细胞中的LILRB2,且si LILRB2-1敲除效果更好;LILRB2缺失后,刺突蛋白则不能促进CD33~+髓系细胞的IL-6分泌。结论·新冠病毒刺突蛋白通过与细胞表面分子LILRB2结合,引起髓系细胞释放IL-6、IL-1β等炎症因子,导致患者出现细胞因子释放综合征。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 刺突蛋白 白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2 炎症因子 髓系细胞

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奖金分配方案

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作者 陈玉凤 卢智刚 《人力资源管理》 2010年第10期51-51,共1页

指导思想 以邓小平理论和＂三个代表＂重要思想及党的十七大精神为指导,认真践行科学发展观,坚持以人为本的管理理念,从推进改革发展、构建和谐医院的高度出发,本着按劳分配、按岗定酬、绩效挂钩的基本精神,通过综合考量、两级核算、... 指导思想 以邓小平理论和＂三个代表＂重要思想及党的十七大精神为指导,认真践行科学发展观,坚持以人为本的管理理念,从推进改革发展、构建和谐医院的高度出发,本着按劳分配、按岗定酬、绩效挂钩的基本精神,通过综合考量、两级核算、统筹兼顾,建立起公平合理、运作规范,重实绩、重贡献,向关键岗位、技术骨干和优秀人才倾斜的劳动分配激励机制,以充分调动全院职工的工作积极性,不断提高医院的科学管理水平和整体服务能力,从而更好地为全县人民的医疗保健事业和县域经济发展服务。 展开更多

关键词 分配方案 党的十七大精神 奖金 分配激励机制 科学管理水平 经济发展服务 和谐医院 邓小平理论

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爪蟾卵提取物中凋亡特异核酸酶抑制物的鉴定 被引量：2

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作者 卢智刚 杨巍 +3 位作者 曹圻 陶伟 胡建成 翟中和 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第11期926-930,共5页

细胞色素ｃ加至非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵提取物Ｓ－１５０中，能诱导外源细胞核发生凋亡．诱导过程中，爪蟾凋亡特异核酸酶ＸＡＤ被激活，在核小体间切割染色质，形成ＤＮＡ梯（ｌａｄｄｅｒ）．实验表明，正常卵提... 细胞色素ｃ加至非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵提取物Ｓ－１５０中，能诱导外源细胞核发生凋亡．诱导过程中，爪蟾凋亡特异核酸酶ＸＡＤ被激活，在核小体间切割染色质，形成ＤＮＡ梯（ｌａｄｄｅｒ）．实验表明，正常卵提取物中大量存在凋亡特异核酸酶ＸＡＤ抑制因子ＩＸＡＤ，抑制ＸＡＤ的核酸酶活性；ＩＸＡＤ分子量约４０ｋｕ，正常状态下以二聚体形式或与ＸＡＤ形成复合体存在；凋亡过程中ＩＸＡＤ被降解，导致ＸＡＤ被释放激活．Ｗｅｓｔｅｒｎ检测和交叉抑制实验显示ＩＸＡＤ与ＤＦＦ４５在结构与功能上可能同源．实验结果进一步证明凋亡途径在进化上的保守性． 展开更多

关键词 非洲爪蟾 细胞凋亡 IXAD DNA梯 核酸酶抑制物 核酸酶活性 卵提取物

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诱导凋亡的非洲爪蟾卵提取物中激活的DNase特性及其鉴定 被引量：5

10

作者 朱山 蒋争凡 +2 位作者 张博 卢智刚 翟中和 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第4期413-418,共6页

dATP和细胞色素c加入非洲爪蟾 (Xenopuslaevis)卵提取物 ,可诱导其转化为非细胞凋亡体系 .伴随诱导过程 ,卵提取物表现出凋亡特异的DNase活性 .诱导的酶活性依赖Mg2 + 的存在 ,并被Zn2 + 抑制 .in gel核酸酶试验表明 ,卵提取物中 2 7ku... dATP和细胞色素c加入非洲爪蟾 (Xenopuslaevis)卵提取物 ,可诱导其转化为非细胞凋亡体系 .伴随诱导过程 ,卵提取物表现出凋亡特异的DNase活性 .诱导的酶活性依赖Mg2 + 的存在 ,并被Zn2 + 抑制 .in gel核酸酶试验表明 ,卵提取物中 2 7ku核酸酶与诱导的凋亡特异的DNase特性一致 .与大多数依赖Ca2 + /Mg2 +的DNase不同 ,2 7ku核酸酶可能是一新的DNase. 展开更多

关键词 细胞凋亡 DNASE 非细胞体系 非洲爪蟾 卵提取物

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p53的过量表达能迅速诱导NIH3T3细胞衰老 被引量：4

11

作者 胡建成 雷颖 +2 位作者 洪夏 卢智刚 翟中和 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第21期2306-2310,共5页

将温度敏感型p53(p53Val135)基因导入NIH3T3细胞进行过量表达, 发现在温度敏感型p53的活性温度(32℃)下培养, NIH3T3细胞迅速表现出与衰老相关的形态特征和生化特性. 这可能是p53过量表达激活了NIH3T3细胞内在的衰老机制从而诱导细胞进... 将温度敏感型p53(p53Val135)基因导入NIH3T3细胞进行过量表达, 发现在温度敏感型p53的活性温度(32℃)下培养, NIH3T3细胞迅速表现出与衰老相关的形态特征和生化特性. 这可能是p53过量表达激活了NIH3T3细胞内在的衰老机制从而诱导细胞进入衰老状态. 展开更多

关键词 P53 NIH3T3 衰老 细胞培养 畸变

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Ras类原癌基因产物Ran GTPase在细胞增殖调控中的作用 被引量：4

12

作者 蒋青 卢智刚 张传茂 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期308-314,共7页

Ran是一种大量分布于细胞核内的GTP酶，是Ras类原癌基因大家族中的一员．Ran的功能多种多样，有许多证据表明Ran及其结合蛋白参与调控细胞周期中的多个过程。目前比较确认的功能主要包括：通过调节核质物质转运而调控细胞周期调控因子... Ran是一种大量分布于细胞核内的GTP酶，是Ras类原癌基因大家族中的一员．Ran的功能多种多样，有许多证据表明Ran及其结合蛋白参与调控细胞周期中的多个过程。目前比较确认的功能主要包括：通过调节核质物质转运而调控细胞周期调控因子的定位、调控核膜装配、调控DNA复制、调控纺锤体组装等。此外，还有资料显示Ran参与细胞核结构的维持、mRNA转录和剪接、RNA由核内向胞质中转运等．本文主要对Ran调控核膜装配、DNA复制、纺锤体组装等机理进行评述． 展开更多

关键词 RAN GTPase酶 细胞周期 DNA复制 核膜装配 纺锤体组装 细胞增殖调控因子 原癌基因

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角蛋白在诱导细胞凋亡的爪蟾卵提取物中发生特异降解 被引量：1

13

作者 朱山 卢智刚 +1 位作者 孙英丽 翟中和 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第11期1149-1153,共5页

细胞色素 ｃ加入非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵提取物 Ｓ－１５０，激活爪蟾凋亡特异蛋白酶ＸＣＰＰ３２，诱导非细胞体系凋亡．伴随凋亡诱导过程，卵提取物Ｓ－１５０表现出一定的变化，其蛋白组成，特别是骨架蛋白变化... 细胞色素 ｃ加入非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵提取物 Ｓ－１５０，激活爪蟾凋亡特异蛋白酶ＸＣＰＰ３２，诱导非细胞体系凋亡．伴随凋亡诱导过程，卵提取物Ｓ－１５０表现出一定的变化，其蛋白组成，特别是骨架蛋白变化明显． Ｗｅｓｔｅｒｎ检测证明爪蟾卵提取物中４２ ｋｕ酸性角蛋白被ＸＣＰＰ３２特异降解．酸性角蛋白的降解在凋亡过程中可能具有重要作用． 展开更多

关键词 细胞凋亡 角蛋白 非洲爪蟾卵提取物 细胞色素C

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