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电针对大鼠肝缺血再灌注损伤保护作用的研究 被引量：1
1
作者 谢明 吕国栋 +1 位作者 蒋洁 温浩 《上海针灸杂志》 CSCD 2023年第4期404-408,共5页
目的观察电针预刺激足三里和阳陵泉穴对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法将24只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为4组,模型组、非穴位组、穴位组和假手术组,每组6只。假手术组大鼠仅开腹腔暴露90 min后即关腹,模型组大鼠进行缺... 目的观察电针预刺激足三里和阳陵泉穴对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法将24只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为4组,模型组、非穴位组、穴位组和假手术组,每组6只。假手术组大鼠仅开腹腔暴露90 min后即关腹,模型组大鼠进行缺血90 min后再灌注处理,穴位组和非穴位组大鼠用电针预刺激30 min后再进行缺血90 min后再灌注处理。分别在再灌注4 h和24 h后,取大鼠肝脏组织进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和组织髓过氧化物酶检测,比较血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、白介素-1β、白介素-6、白介素-10和肿瘤坏死因子-α的水平。结果再灌注4 h和24 h后,穴位组大鼠血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、白介素-1β、白介素-6和肿瘤坏死因子-α水平以及肝组织髓过氧化物酶表达均低于模型组(P<0.05),非穴位组上述指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针预刺激足三里和阳陵泉穴对肝缺血再灌注损伤有一定的保护作用,可在提高肝功能、抑制炎症因子释放和减少中性粒细胞浸润方面发挥作用。 展开更多
关键词 针刺疗法 电针 穴 足三里 穴 阳陵泉 再灌注损伤 肝 大鼠
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毛果芸香碱减轻对乙酰氨基酚所致肝损伤的作用及机制研究
2
作者 麦尔哈巴·麦麦提艾力 许少全 +5 位作者 李婧 刘辉 周润 夏衣旦木·吐尼牙孜 赵金龙 吕国栋 《新疆医科大学学报》 CAS 2024年第3期398-402,共5页
目的 研究毛果芸香碱减轻对乙酰氨基酚(Acetaminophen, APAP)所致肝损伤的作用及机制。方法 采用小鼠腹腔注射APAP建立急性肝损伤模型,将18只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、APAP模型组、毛果芸香碱组,每组6只。毛果芸香碱组小鼠腹腔... 目的 研究毛果芸香碱减轻对乙酰氨基酚(Acetaminophen, APAP)所致肝损伤的作用及机制。方法 采用小鼠腹腔注射APAP建立急性肝损伤模型,将18只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、APAP模型组、毛果芸香碱组,每组6只。毛果芸香碱组小鼠腹腔给药毛果芸香碱(2.5 mg/kg体重)7 d,末次给药1 h后,APAP模型组和毛果芸香碱组腹腔注射APAP(400 mg/kg体重),空白对照组腹腔注射等量生理盐水,APAP注射后12 h处死所有小鼠,采集血液和肝脏等组织样本。血清生化检测仪检测血清肝功指标天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase, AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase, ALT),采用HE染色方法检测肝脏病理评估毛果芸香碱对APAP诱导肝损伤的药效作用;Western blot方法检测肝脏增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases1/2, ERK1/2)蛋白表达,探索肝细胞增殖作用及其可能的机制。结果 与空白对照组比较,APAP模型组小鼠的ALT和AST含量均显著升高(P<0.001),表明APAP模型建立成功;与APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠血清AST含量显著降低(P<0.01),ALT含量无统计学差异(P>0.05)。HE染色病理学结果显示,与空白对照组比较,APAP模型组小鼠肝脏出现肝小叶中心坏死、肝内出血和细胞核消失或固缩;与APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠改善了肝小叶中心坏死、肝内出血和细胞核固缩。Western blot结果显示,与空白对照组和APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠肝脏PCNA蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);与空白对照组和APAP模型组比较,毛果芸香碱组小鼠p-ERK/ERK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 毛果芸香碱能减轻APAP所致肝损伤,其分子机制可能是毛果芸香碱通过激活肝细胞中m3AchR-ERK1/2信号通路进而促进肝细胞增殖来发挥作用。 展开更多
关键词 对乙酰氨基酚 毛果芸香碱 毒蕈碱受体 肝细胞增殖
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细粒棘球绦虫原头蚴和成虫发育调控基因Ras GTPase的克隆及序列分析 被引量：8
3
作者 吕国栋 王俊华 +2 位作者 卢晓梅 温浩 林仁勇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期91-93,共3页
应用RT-PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴和成虫中克隆出Eg Ras GTPase基因,分别命名为Eg Ras-pro(GenBank登录号为EU560397)和Eg Ras-adult(GenBank登录号为EU560398)。生物信息学分析表明两者cDNA长度均为552bp,编码184个氨基酸... 应用RT-PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴和成虫中克隆出Eg Ras GTPase基因,分别命名为Eg Ras-pro(GenBank登录号为EU560397)和Eg Ras-adult(GenBank登录号为EU560398)。生物信息学分析表明两者cDNA长度均为552bp,编码184个氨基酸,等电点(pI)为6.54,彼此间仅有2个碱基和1个氨基酸的差别。同源性比对分析结果显示,Eg Ras-pro和Eg Ras-adult与多房棘球绦虫Ras(EmRas)基因的同源性分别高达98.4%和98.9%;与其他种类的寄生虫、酵母、果蝇及人类的Ras GTPase基因的同源性为53.9%～78.8%。进化树分析发现Eg Ras-pro和EgRas-adult与EmRas和血吸虫Ras(SmRas)相聚集。本研究首次从新疆株细粒棘球绦虫两个发育阶段(原头蚴和成虫)中克隆出Eg Ras GTPase基因,其序列具有较高的保守性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 RAS GTPASE 序列分析
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准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MPAFP5毕赤酵母表达产物的理化性质 被引量：7
4
作者 吕国栋 孙洁 +1 位作者 马纪 张富春 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期821-826,共6页
研究准噶尔小胸鳖甲Microdera punctipennis dzhungarica Kasz抗冻蛋白MPAFP5真核表达产物的功能及理化性质。首先用硫酸铵浓度梯度沉淀初步纯化酵母真核表达产物,然后通过细菌低温保护实验检测抗冻蛋白MPAFP5低温保护功能,同时探讨抗... 研究准噶尔小胸鳖甲Microdera punctipennis dzhungarica Kasz抗冻蛋白MPAFP5真核表达产物的功能及理化性质。首先用硫酸铵浓度梯度沉淀初步纯化酵母真核表达产物,然后通过细菌低温保护实验检测抗冻蛋白MPAFP5低温保护功能,同时探讨抗冻蛋白MPAFP5在酸碱环境和100℃时的稳定性,并通过等电聚焦凝胶电泳检测其等电点。研究表明MPAFP5真核表达产物在低温下能够提高细菌的存活率,能够耐受高温和一定程度的强酸强碱,其等电点约为5.8左右。准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白MPAFP5真核表达产物与赤翅甲抗冻蛋白(DAFP)的比较表明拟步甲类昆虫抗冻蛋白具有相似的理化性质。 展开更多
关键词 准噶尔小胸鳖甲 抗冻蛋白 理化性质 等电点
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细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白的免疫反应性 被引量：2
5
作者 吕国栋 刘涛 +5 位作者 林仁勇 王星 王俊华 任智慧 温浩 卢晓梅 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期107-110,共4页
目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用... 目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析柱(GST-sepharose4B)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性,并用免疫胶体金包虫诊断试剂盒作为对照。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET41a-rAgB构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白rAgB-GST的相对分子质量(Mr)为40800,纯化蛋白含量为78.4%。Westernblotting分析结果显示,重组蛋白rAgB-GST检测细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清的阳性率分别为79.2%(95/120)和51.1%(23/45),但与卫氏并殖吸虫病患者、华支睾吸虫病患者血清以及健康人血清反应均为阴性。rAgB-GST的敏感性和特异性分别为79.2%(95/120)和81.0%(98/121),均略高于免疫胶体金棘球蚴病诊断试剂盒的敏感性(72.8%,75/103)和特异性(76.9%,30/39)。结论重组rAgB-GST蛋白可被细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清识别,有较好的免疫反应性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 重组抗原B 免疫诊断
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细粒棘球绦虫p38蛋白原核表达及其多克隆抗体制备（英文） 被引量：1
6
作者 吕国栋 王红丽 +2 位作者 刘辉 张富春 林仁勇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期27-31,共5页
目的制备细粒棘球绦虫(Eg)p38蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Egp38蛋白的功能提供检测抗体。方法将Egp38蛋白基因序列克隆至原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21株,IPTG诱导蛋白表达,以Ni亲和层析纯化Egp38蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,E... 目的制备细粒棘球绦虫(Eg)p38蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Egp38蛋白的功能提供检测抗体。方法将Egp38蛋白基因序列克隆至原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21株,IPTG诱导蛋白表达,以Ni亲和层析纯化Egp38蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价,Western blotting检测所制备抗体与Eg虫体天然Egp38蛋白的反应性。结果经0.2mmol/L IPTG诱导,表达出约46kDa的Egp38重组蛋白,制备获得效价在2.56×105以上的多克隆抗体,该抗体能够与Egp38重组蛋白和Eg蚴虫体内的Egp38蛋白发生特异性反应。结论成功制备获得兔抗Egp38多克隆抗体,为研究Egp38在Eg与宿主间的交互作用中的功能和作为药物靶标等研究奠定基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 P38 蛋白表达 抗体制备
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迟发性尺神经炎治疗进展 被引量：8
7
作者 吕国栋 梁炳生 《国际骨科学杂志》 2007年第1期15-17,共3页
迟发性尺神经炎是发病率仅次于腕管综合征的外周神经嵌压性疾病,发病原因包括肘管自身解剖结构上存在的潜在卡压因素、外伤及肿物等。迟发性尺神经炎保守治疗和手术干预的适应证及疗效各不相同。尺神经解压后深筋膜瓣下带血管前置术在... 迟发性尺神经炎是发病率仅次于腕管综合征的外周神经嵌压性疾病,发病原因包括肘管自身解剖结构上存在的潜在卡压因素、外伤及肿物等。迟发性尺神经炎保守治疗和手术干预的适应证及疗效各不相同。尺神经解压后深筋膜瓣下带血管前置术在提供柔软的神经床、良好血供、避免复发等方面取得了很好的进展,内镜技术及神经移植亦为该病的治疗提供了新的选择。该文就迟发型尺神经炎的病理、诊断及治疗方面的进展作一综述。 展开更多
关键词 迟发性尺神经炎 肘管综合征 外周神经 应用解剖 治疗
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检测抗冻蛋白生物学活性两种方法的比较 被引量：3
8
作者 吕国栋 马纪 《新疆大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第1期77-80,101,共5页
为了比较两种方法测定昆虫抗冻蛋白生物学活性的优劣．通过抗冻蛋白细菌低温保护实验测定菌液OD500和菌落计数两种方法同时研究洛氏脊漠甲抗冻蛋白对大肠杆菌的低温保护效果，实验表明发现这两种方法所得结果相近，相关系数r=0.82～1．... 为了比较两种方法测定昆虫抗冻蛋白生物学活性的优劣．通过抗冻蛋白细菌低温保护实验测定菌液OD500和菌落计数两种方法同时研究洛氏脊漠甲抗冻蛋白对大肠杆菌的低温保护效果，实验表明发现这两种方法所得结果相近，相关系数r=0.82～1．0，相关性显著（p〈0．05）．菌落计数法的误差小NOD值法，适用于菌落数少的情况，OD值法适用于菌落密度大的情况，两种方法都可用于研究抗冻蛋白低温保护活性. 展开更多
关键词 抗冻蛋白 低温保护活性 菌落记数 OD值测定
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带血供尺神经深筋膜瓣下前置术解剖学研究 被引量：8
9
作者 吕国栋 梁炳生 《国际骨科学杂志》 2008年第1期63-64,共2页
目的为带血供尺神经深筋膜瓣下前置术提供解剖学依据。方法在12侧福尔马林固定的成人尸体上肢标本、8侧新鲜尸体上肢标本上观测尺神经在肘部的血供。结果肘部尺神经血供来源有3个:尺侧上副动脉(SUCA)、尺侧下副动脉(IUCA)和尺侧返动脉后... 目的为带血供尺神经深筋膜瓣下前置术提供解剖学依据。方法在12侧福尔马林固定的成人尸体上肢标本、8侧新鲜尸体上肢标本上观测尺神经在肘部的血供。结果肘部尺神经血供来源有3个:尺侧上副动脉(SUCA)、尺侧下副动脉(IUCA)和尺侧返动脉后支(PURA),与尺神经伴行长度分别约为15.0cm、5.0cm和5.5cm。尺神经于肘部发出关节支和肌支分别为1～3支。结论行尺神经深筋膜瓣下前置术时至少应保留SUCA或IUCA,深筋膜瓣的制作应依据任意皮瓣原则。 展开更多
关键词 尺神经深筋膜瓣下前置术 肘管综合征 解剖学
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大数据下基于跨域多源信息融合的竞争对手识别模型研究——基于新能源汽车行业
10
作者 宋新平 陈梦梦 +1 位作者 吕国栋 申彦 《情报学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期176-188,共13页
大数据下竞争对手识别模式发生了显著转变,催生了新型竞争对手识别研究范式。本文以该新范式为导向,借鉴企业生态位理论与互联网下的顾客价值理论,对传统经典陈明哲竞争分析框架进行拓展,提出了基于大数据下的市场共通性和资源能力优势... 大数据下竞争对手识别模式发生了显著转变,催生了新型竞争对手识别研究范式。本文以该新范式为导向,借鉴企业生态位理论与互联网下的顾客价值理论,对传统经典陈明哲竞争分析框架进行拓展,提出了基于大数据下的市场共通性和资源能力优势度的竞争对手识别指标体系框架。该框架整合了行业与市场双元视角下的财务、专利、产品、客户等多方跨域信息源,使用模糊C均值聚类构建模型,并以新能源汽车行业为例开展仿真实验研究。结果表明,基于跨域多源信息融合的模型可有效提高竞争对手识别的准确性和全面性。 展开更多
关键词 大数据 竞争对手 多源信息融合 综合视角 模糊C均值聚类
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股骨髓内钉远端锁定技术的改良
11
作者 吕国栋 董乐乐 樊建军 《中外医学研究》 2010年第27期39-40,共2页
目的对交锁髓内钉远端锁钉的锁定技术进行探讨，以期能够找到提高锁定成功率并尽量减少射线暴露的有效方法。方法对近年所受之的78例股骨骨折行交锁髓内钉内固定时采用改良技术进行手术操作，并对成功及失败的原因进行回顾分析。结果所... 目的对交锁髓内钉远端锁钉的锁定技术进行探讨，以期能够找到提高锁定成功率并尽量减少射线暴露的有效方法。方法对近年所受之的78例股骨骨折行交锁髓内钉内固定时采用改良技术进行手术操作，并对成功及失败的原因进行回顾分析。结果所有78例患者75例为一次性准确锁入，3例未能一次性顺利锁定。结论本方法操作简单、可靠，对骨质侵入少，不改变主钉及锁钉机构，射线暴露少，无不确定步骤，可有效减少患者在手术台上时间。 展开更多
关键词 带锁髓内钉 内固定 股骨干骨折
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使用获专利前臂牵引器复位Colles骨折的体会
12
作者 吕国栋 柳茂林 《中外医学研究》 2014年第17期136-137,共2页
目的:对一种自制前臂牵引器(专利号:ZL201220161348.5)在Colles骨折手法复位中的辅助牵引作用进行分析。方法:选取2012年4月-2013年8月笔者所在医院收治的56例Colles骨折患者,对其进行牵引器辅助复位治疗并予以观察。结果:56例患者均获... 目的:对一种自制前臂牵引器(专利号:ZL201220161348.5)在Colles骨折手法复位中的辅助牵引作用进行分析。方法:选取2012年4月-2013年8月笔者所在医院收治的56例Colles骨折患者,对其进行牵引器辅助复位治疗并予以观察。结果:56例患者均获得良好复位,满意率为100%。结论:与传统人工牵引相比较,该牵引器提供了更加稳定、可靠的牵引效果,且操作医师体力消耗小。自制前臂牵引器牵引效果肯定,对于Colles骨折的复位能够起到很好的辅助作用。 展开更多
关键词 前臂牵引器 专利 COLLES骨折
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棘球蚴病防治成就及面临的挑战 被引量：70
13
作者 温浩 吐尔干艾力·阿吉 +5 位作者 邵英梅 林仁勇 李海涛 吐尔洪江·吐逊 吕国栋 张文宝 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期466-471,共6页
棘球蚴病已成为影响全球公共卫生的重要传染病,我国为棘球蚴病高发区。在过去的半个多世纪,棘球蚴病的手术和药物治疗、基因组学研究、信号转导通路、棘球蚴对中间宿主肝脏增殖与损伤及疫苗研制方面均取得了长足进展,但在中间宿主的免... 棘球蚴病已成为影响全球公共卫生的重要传染病,我国为棘球蚴病高发区。在过去的半个多世纪,棘球蚴病的手术和药物治疗、基因组学研究、信号转导通路、棘球蚴对中间宿主肝脏增殖与损伤及疫苗研制方面均取得了长足进展,但在中间宿主的免疫诊断和药物治疗,以及终末宿主疫苗的研制方面仍然面临挑战。本文就棘球蚴病的防治在过去取得的成就和目前所面临的挑战作一综述。 展开更多
关键词 棘球蚴病 分子致病机制 疫苗研制 手术治疗 药物治疗
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产前减压辅助盐酸罗哌卡因硬膜外注射在减轻高龄孕产妇分娩疼痛中的应用
14
作者 张静 吕国栋 《河北医药》 CAS 2023年第22期3460-3462,3466,共4页
目的研究产前减压辅助盐酸罗哌卡因硬膜外注射对减轻高龄孕产妇分娩疼痛的效果。方法选取2020年8月至2022年12月进行分娩的高龄孕产妇134例,按红蓝球法分为观察组(n=66)和对照组(n=68)。对照组采用盐酸罗哌卡因硬膜外注射麻醉,观察组在... 目的研究产前减压辅助盐酸罗哌卡因硬膜外注射对减轻高龄孕产妇分娩疼痛的效果。方法选取2020年8月至2022年12月进行分娩的高龄孕产妇134例,按红蓝球法分为观察组(n=66)和对照组(n=68)。对照组采用盐酸罗哌卡因硬膜外注射麻醉,观察组在对照组麻醉方案基础上加以实施产前减压干预措施,对比2组分娩情况[第一、二、三产程疼痛采用数字评估量表(NRS),焦虑、抑郁分别采用汉密尔顿焦虑(HAMA)量表,汉密尔顿抑郁(HAMD)量表,围产期情况,分娩情况,新生儿阿氏(Apgar)评分不良事件]。结果观察组第一、二、三个产程的NRS、HAMA和HAMD评分、早产率、并发症率和剖宫产率低于对照组,总产程和住院时间更短,产后出血量更少,产妇配合度和新生儿Apgar评分更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论采用产前减压辅助盐酸罗哌卡因硬膜外注射方案应用于高龄孕产妇,可对孕产妇分娩进行有效镇痛,对于其焦虑和抑郁情绪有所缓解,孕产妇分娩结局更好,产后恢复速度更快,安全性高,值得临床广泛应用。 展开更多
关键词 产前减压干预 高龄孕产妇 分娩疼痛 盐酸罗哌卡因 硬膜外注射
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Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达 被引量：9
15
作者 刘忠渊 王芸 +3 位作者 吕国栋 王贤磊 张富春 马纪 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1532-1540,共9页
利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,克隆黄粉甲虫(Tenebriomolitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达。同源性分析表明,获得9条新cDNA片段,与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性。重组质粒pGE... 利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,克隆黄粉甲虫(Tenebriomolitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达。同源性分析表明,获得9条新cDNA片段,与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性。重组质粒pGEX-4T-1-tmafp-XJ430,转化E.coliBL21进行原核表达,SDS-PAGE分析结果表明,抗冻蛋白基因以可溶性融合蛋白表达,相对分子量为38kDa。构建真核表达载体pCDNA3-tmafp-XJ430,免疫小鼠,获得的抗血清滴度为1:2000。Westernblotting结果为单一的条带,证明该抗血清具有针对抗冻蛋白TmAFP-XJ430抗原的专一性。 展开更多
关键词 黄粉甲虫 抗冻蛋白 CDNA片段 序列分析 原核表达
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赤翅甲抗冻蛋白基因的原核表达及蛋白生物活性检测 被引量：16
16
作者 刘忠渊 张富春 +1 位作者 王芸 吕国栋 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期179-183,共5页
根据GenBank中序列人工合成赤翅甲 Dendroides canadensis 的抗冻蛋白基因 (afp), 将其克隆到载体 pGEX_4T_1上, 构建融合表达的重组质粒, 转化大肠杆菌 BL21并进行原核表达。通过优化表达的诱导条件和SDS_PAGE检测, 证明人工合成的赤... 根据GenBank中序列人工合成赤翅甲 Dendroides canadensis 的抗冻蛋白基因 (afp), 将其克隆到载体 pGEX_4T_1上, 构建融合表达的重组质粒, 转化大肠杆菌 BL21并进行原核表达。通过优化表达的诱导条件和SDS_PAGE检测, 证明人工合成的赤翅甲抗冻蛋白基因能够特异性地表达, 并以可溶性融合蛋白形式存在, 相对分子质量约为40 kD。抗冻蛋白的生物活性检测表明, 赤翅甲的抗冻融合蛋白能够提高细菌的耐寒能力。 展开更多
关键词 赤翅甲 抗冻蛋白 原核表达 抗冻活性
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细粒棘球蚴egG1Y162抗原基因的克隆及蛋白质序列分析 被引量：15
17
作者 曹春宝 马秀敏 +7 位作者 丁剑冰 贾海英 吾拉木·马木提 张海涛 朱明 马海梅 吕国栋 温浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第12期903-906,共4页
目的克隆细粒棘球蚴egG1Y162基因序列并进行蛋白序列对比分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴提取mRNA,mRNA反转录为cDNA。设计特异引物,以cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后进行序列分析。结... 目的克隆细粒棘球蚴egG1Y162基因序列并进行蛋白序列对比分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴提取mRNA,mRNA反转录为cDNA。设计特异引物,以cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后进行序列分析。结果egG1Y162 cDNA为459bp,编码153个氨基酸;同源性比较表明,egG1Y162 cDNA与emY162同源性为95%,与eg95的同源性为30.61%。结论成功克隆egG1Y162抗原基因,egG1Y162蛋白质氨基酸序列与emY162有很高的相似性,但同其他抗原蛋白质序列存在明显差异,所以egG1Y162是一种新的抗原基因。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 egG1Y162 CDNA 序列分析
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转化生长因子β1刺激改良培养小鼠原代肝星状细胞的活化 被引量：6
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作者 毕晓娟 张传山 +2 位作者 李亮 吕国栋 林仁勇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第51期8234-8240,共7页
背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用... 背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用门静脉穿刺原位灌注肝脏的方法分离肝脏,采用密度梯度离心获得肝星状细胞,利用形态学、免疫荧光染色等方法对原代肝星状细胞进行鉴定;将培养24 h肝星状细胞用质量浓度10μg/L转化生长因子β1刺激48 h,同时设PBS组进行对比。结果与结论:通过原位灌注肝脏并且酶消化的方法可以成功获得小鼠原代肝星状细胞,并且锥虫蓝染色活率为(97.2±0.8)%,免疫荧光染色纯度为(90.4±1.2)%,细胞计数总量约2.5×106/只。实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与PBS组比较,转化生长因子β1刺激组的肝星状细胞平滑肌肌动蛋白α、Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2 mR NA表达水平明显升高(P<0.05)。结果证实,实验采用的改良的培养方法可更高效高质量的获得原代肝星状细胞,转化生长因子β1刺激可导致肝星状细胞活化,分泌致纤维化因子。 展开更多
关键词 组织工程 肝细胞 转化生长因子Β1 组织构建 肝星状细胞 肝纤维化 原代培养 分离 鉴定 胶原蛋白 平滑肌肌动蛋白α 国家自然科学基金
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昆虫抗冻蛋白DAFP的原核表达、纯化和抗血清制备 被引量：5
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作者 王芸 吕国栋 +2 位作者 薛娜 张富春 马纪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期727-730,共4页
目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMA... 目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMAL-p2x中,在大肠杆菌中进行表达。表达的融合蛋白经Glutathione Sepharose4B纯化后,免疫小鼠制备抗DAFP的抗血清,抗体的效价及特异性分别采用ELISA和Western blot进行检测。结果:SDS-PAGE检测表明,人工合成的dafp基因在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为38000的可溶性融合蛋白。以该融合蛋白免疫小鼠所制备的抗体,其ELISA滴度为1∶5000,Western blot证实BL21/pGEX-4T-1-dafp菌和TB1/pMAL-p2x-dafp菌的表达产物可特异性地与该抗体结合。结论:在大肠杆菌中成功地表达了DAFP的融合蛋白并制备出抗融合蛋白的鼠抗血清,为进一步研究DAFP的特性奠定了基础。 展开更多
关键词 昆虫 抗冻蛋白 原核表达 抗血清 蛋白印迹 抗冻蛋白基因 抗血清制备 原核表达载体 纯化 Western
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血清NRP-1、PDGF与子宫内膜异位症患者体外受精-胚胎移植妊娠结局的相关性
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作者 吕国栋 张果果 张静 《临床和实验医学杂志》 2023年第18期1976-1980,共5页
目的研究子宫内膜异位症患者血清神经纤毛蛋白-1(NRP-1)、血小板衍生生长因子(PDGF)水平与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局的相关性。方法回顾性分析2017年6月至2019年10月廊坊市人民医院收治的接受IVF-ET治疗的子宫内膜异位症患者8... 目的研究子宫内膜异位症患者血清神经纤毛蛋白-1(NRP-1)、血小板衍生生长因子(PDGF)水平与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局的相关性。方法回顾性分析2017年6月至2019年10月廊坊市人民医院收治的接受IVF-ET治疗的子宫内膜异位症患者89例作为观察组,根据对患者随访结果,分为妊娠结局良好组(n=53),妊娠结局不良组(n=36)。另选择在廊坊市人民医院体检健康女性82名为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清NRP-1、PDGF水平。Pearson法对分析妊娠结局不良患者血清NRP-1、PDGF、雌二醇、促黄体生成素(LH)、基础卵泡刺激素(FSH)的相关性。利用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清NRP-1、PDGF水平预测子宫内膜异位症患者IVF-ET妊娠结局的价值。结果观察组的血清NRP-1、PDGF水平分别为(27.81±6.47)μg/L、(31.83±7.58)ng/mL,均高于对照组[(18.06±3.91)μg/L、(21.61±4.62)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。妊娠结局不良组的基础FSH、基础雌二醇、基础LH水平分别为(8.83±1.46)mIU/mL、(85.67±17.09)pg/mL、(8.32±1.35)mIU/mL,均高于妊娠结局良好组[(4.63±0.91)mIU/mL、(50.12±11.31)pg/mL、(3.66±0.91)mIU/mL],血清NRP-1、PDGF水平分别为(22.72±5.28)μg/L、(24.98±5.95)ng/mL,均低于妊娠结局良好组[(31.27±7.27)μg/L、(36.49±8.68)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组血清NRP-1与PDGF表达水平呈正相关(P<0.05);妊娠结局不良患者血清NRP-1、PDGF水平均与基础FSH水平、基础雌二醇水平、基础LH水平均呈负相关(P<0.05)。ROC分析显示,NRP-1联合PDGF预测子宫内膜异位症患者患者IVF-ET妊娠结局的AUC为0.942,其敏感度、特异度分别为80.60%、96.20%。结论妊娠结局良好的子宫内膜异位症患者血清NRP-1和PDGF呈高表达,二者与IVF-ET妊娠结局密切相关,NRP-1和PDGF对子宫内膜异位症患者IVF-ET妊娠结局有一定预测价值。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 体外受精-胚胎移植 神经纤毛蛋白-1 血小板衍生生长因子 妊娠结局
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