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CHD5基因慢病毒载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达 被引量:4
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作者 赵蕊 吕静野 +3 位作者 严启滔 张宝 郑文岭 马文丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第4期418-422,共5页
目的构建重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,并检测其在结直肠癌细胞系LOVO中的表达。方法采用PCR扩增技术从CHD5 cDNA克隆中获得CHD5的全长读码框,将CHD5基因导入慢病毒载体TREAutoR3中,酶切,测序验证后,重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5与慢... 目的构建重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,并检测其在结直肠癌细胞系LOVO中的表达。方法采用PCR扩增技术从CHD5 cDNA克隆中获得CHD5的全长读码框,将CHD5基因导入慢病毒载体TREAutoR3中,酶切,测序验证后,重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染结直肠癌细胞系LOVO。通过荧光定量PCR和Western bolt验证CHD5基因在细胞中的转录和表达情况,应用MTT检测CHD5过表达对LOVO细胞增殖的影响。结果成功构建了慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,荧光定量PCR结果显示慢病毒感染LOVO细胞能稳定转录CHD5基因,Western bolt显示感染后LOVO细胞稳定表达CHD5蛋白。感染后的LOVO细胞的增殖受到抑制。结论包装的慢病毒能够成功的感染LOVO细胞,并且CHD5能抑制结直肠癌细胞系LOVO的增殖。 展开更多
关键词 CHD5 慢病毒载体 肿瘤
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5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响 被引量:3
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作者 赵蕊 严启滔 +2 位作者 吕静野 黄海丽 马文丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第8期976-980,共5页
目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连... 目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响。结果 5μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制。结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 CHD5基因 甲基化 结肠癌细胞
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CHD5基因RNAi慢病毒载体的构建及其对结直肠癌细胞生物学功能的影响 被引量:2
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作者 赵蕊 吕静野 +1 位作者 黄海丽 严启滔 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期7-11,共5页
目的:研究人类肿瘤相关基因CHD5基因miR-shRNA慢病毒对结直肠癌Lovo细胞的影响。方法:利用软件设计对CHD5基因干扰有效的序列,合成靶序列,退火形成双链DNA,酶切后与载体相连接。将重组慢病毒载体pPRIME-TET-GFP-CHD5与慢病毒包装质粒pCM... 目的:研究人类肿瘤相关基因CHD5基因miR-shRNA慢病毒对结直肠癌Lovo细胞的影响。方法:利用软件设计对CHD5基因干扰有效的序列,合成靶序列,退火形成双链DNA,酶切后与载体相连接。将重组慢病毒载体pPRIME-TET-GFP-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染人类结直肠癌Lovo细胞。通过荧光定量PCR和Western blot验证CHD5基因在细胞中的表达情况,应用MTT检测CHD5低表达对Lovo细胞增殖的影响。结果:成功构建pPRIME-TET-GFP-CHD5重组质粒,经酶切及序列测定正确,包装的病毒滴度为3.1×106TU/ml。用制备的病毒上清感染Lovo细胞后,荧光定量PCR和Western blot分析结果显示该慢病毒可分别在转录和蛋白质水平上抑制Lovo细胞CHD5基因的表达,并使得Lovo细胞增殖失控。结论:成功构建CHD5慢病毒表达载体,表达的慢病毒可有效的感染Lovo细胞,提高Lovo细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 CHD5 基因 miR-shRNA RNAI 技术
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