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CHD5基因慢病毒载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达
被引量:
4
1
作者
赵蕊
吕静野
+3 位作者
严启滔
张宝
郑文岭
马文丽
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013年第4期418-422,共5页
目的构建重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,并检测其在结直肠癌细胞系LOVO中的表达。方法采用PCR扩增技术从CHD5 cDNA克隆中获得CHD5的全长读码框,将CHD5基因导入慢病毒载体TREAutoR3中,酶切,测序验证后,重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5与慢...
目的构建重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,并检测其在结直肠癌细胞系LOVO中的表达。方法采用PCR扩增技术从CHD5 cDNA克隆中获得CHD5的全长读码框,将CHD5基因导入慢病毒载体TREAutoR3中,酶切,测序验证后,重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染结直肠癌细胞系LOVO。通过荧光定量PCR和Western bolt验证CHD5基因在细胞中的转录和表达情况,应用MTT检测CHD5过表达对LOVO细胞增殖的影响。结果成功构建了慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,荧光定量PCR结果显示慢病毒感染LOVO细胞能稳定转录CHD5基因,Western bolt显示感染后LOVO细胞稳定表达CHD5蛋白。感染后的LOVO细胞的增殖受到抑制。结论包装的慢病毒能够成功的感染LOVO细胞,并且CHD5能抑制结直肠癌细胞系LOVO的增殖。
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关键词
CHD5
慢病毒载体
肿瘤
下载PDF
职称材料
5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响
被引量:
3
2
作者
赵蕊
严启滔
+2 位作者
吕静野
黄海丽
马文丽
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013年第8期976-980,共5页
目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连...
目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响。结果 5μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制。结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖。
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关键词
CHD5基因
甲基化
结肠癌细胞
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职称材料
CHD5基因RNAi慢病毒载体的构建及其对结直肠癌细胞生物学功能的影响
被引量:
2
3
作者
赵蕊
吕静野
+1 位作者
黄海丽
严启滔
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期7-11,共5页
目的:研究人类肿瘤相关基因CHD5基因miR-shRNA慢病毒对结直肠癌Lovo细胞的影响。方法:利用软件设计对CHD5基因干扰有效的序列,合成靶序列,退火形成双链DNA,酶切后与载体相连接。将重组慢病毒载体pPRIME-TET-GFP-CHD5与慢病毒包装质粒pCM...
目的:研究人类肿瘤相关基因CHD5基因miR-shRNA慢病毒对结直肠癌Lovo细胞的影响。方法:利用软件设计对CHD5基因干扰有效的序列,合成靶序列,退火形成双链DNA,酶切后与载体相连接。将重组慢病毒载体pPRIME-TET-GFP-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染人类结直肠癌Lovo细胞。通过荧光定量PCR和Western blot验证CHD5基因在细胞中的表达情况,应用MTT检测CHD5低表达对Lovo细胞增殖的影响。结果:成功构建pPRIME-TET-GFP-CHD5重组质粒,经酶切及序列测定正确,包装的病毒滴度为3.1×106TU/ml。用制备的病毒上清感染Lovo细胞后,荧光定量PCR和Western blot分析结果显示该慢病毒可分别在转录和蛋白质水平上抑制Lovo细胞CHD5基因的表达,并使得Lovo细胞增殖失控。结论:成功构建CHD5慢病毒表达载体,表达的慢病毒可有效的感染Lovo细胞,提高Lovo细胞的增殖能力。
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关键词
CHD5
基因
miR-shRNA
RNAI
技术
原文传递
题名
CHD5基因慢病毒载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达
被引量:
4
1
作者
赵蕊
吕静野
严启滔
张宝
郑文岭
马文丽
机构
南方医科大学基因工程研究所
华南基因组研究中心
出处
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013年第4期418-422,共5页
基金
国家青年科学基金(81000226)
广东省医学科研基金(A2011360)
文摘
目的构建重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,并检测其在结直肠癌细胞系LOVO中的表达。方法采用PCR扩增技术从CHD5 cDNA克隆中获得CHD5的全长读码框,将CHD5基因导入慢病毒载体TREAutoR3中,酶切,测序验证后,重组慢病毒载体TREAutoR3-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染结直肠癌细胞系LOVO。通过荧光定量PCR和Western bolt验证CHD5基因在细胞中的转录和表达情况,应用MTT检测CHD5过表达对LOVO细胞增殖的影响。结果成功构建了慢病毒载体TREAutoR3-CHD5,荧光定量PCR结果显示慢病毒感染LOVO细胞能稳定转录CHD5基因,Western bolt显示感染后LOVO细胞稳定表达CHD5蛋白。感染后的LOVO细胞的增殖受到抑制。结论包装的慢病毒能够成功的感染LOVO细胞,并且CHD5能抑制结直肠癌细胞系LOVO的增殖。
关键词
CHD5
慢病毒载体
肿瘤
Keywords
CHD5
lentiviral vector
cancer
分类号
R735.3 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响
被引量:
3
2
作者
赵蕊
严启滔
吕静野
黄海丽
马文丽
机构
南方医科大学基因工程研究所
出处
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013年第8期976-980,共5页
基金
广东省自然科学基金(S2011040005521)
国家青年科学基金(81000226)
+1 种基金
国家青年科学基金(81100383)
广东省医学科学技术研究基金(A2011360)
文摘
目的研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-氮杂胞苷,AZA)对人肿瘤相关基因CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)在结肠癌细胞中的基因转录的诱导作用以及其对细胞增殖的影响。方法 5μmol/L 5-氮杂胞苷分别作用于Lovo和SW480细胞,连续作用72 h后,用荧光定量PCR(qPCR)检测两种结肠癌细胞系中CHD5mRNA的表达,重亚硫酸盐测序(BSP)法分析启动子区的甲基化状况,MTT法分析5-氮杂胞苷对Lovo和SW480细胞增殖的影响。结果 5μmol/L 5-氮杂胞苷处理Lovo和SW480细胞72 h后,Lovo和SW480细胞中CHD5基因的发生了去甲基化,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制。结论 5-氮杂胞苷能够反转CHD5基因的甲基化状态,调控CHD5 mRNA表达,并能有效地抑制结肠癌细胞的增殖。
关键词
CHD5基因
甲基化
结肠癌细胞
Keywords
CHD5 gene
methylation
colon carcinoma
分类号
R735.35 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
CHD5基因RNAi慢病毒载体的构建及其对结直肠癌细胞生物学功能的影响
被引量:
2
3
作者
赵蕊
吕静野
黄海丽
严启滔
机构
南方医科大学基因工程研究所
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期7-11,共5页
基金
国家青年科学基金(81000226)
广东省自然科学基金(S2011040005521)资助项目
文摘
目的:研究人类肿瘤相关基因CHD5基因miR-shRNA慢病毒对结直肠癌Lovo细胞的影响。方法:利用软件设计对CHD5基因干扰有效的序列,合成靶序列,退火形成双链DNA,酶切后与载体相连接。将重组慢病毒载体pPRIME-TET-GFP-CHD5与慢病毒包装质粒pCMV-VSV-G,pRSV-Rev,pMDLg-pRRE共转染293FT细胞,将包装重组慢病毒感染人类结直肠癌Lovo细胞。通过荧光定量PCR和Western blot验证CHD5基因在细胞中的表达情况,应用MTT检测CHD5低表达对Lovo细胞增殖的影响。结果:成功构建pPRIME-TET-GFP-CHD5重组质粒,经酶切及序列测定正确,包装的病毒滴度为3.1×106TU/ml。用制备的病毒上清感染Lovo细胞后,荧光定量PCR和Western blot分析结果显示该慢病毒可分别在转录和蛋白质水平上抑制Lovo细胞CHD5基因的表达,并使得Lovo细胞增殖失控。结论:成功构建CHD5慢病毒表达载体,表达的慢病毒可有效的感染Lovo细胞,提高Lovo细胞的增殖能力。
关键词
CHD5
基因
miR-shRNA
RNAI
技术
Keywords
CHD5 gene miR-shRNA RNAi
分类号
Q2 [生物学—细胞生物学]
Q7 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CHD5基因慢病毒载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达
赵蕊
吕静野
严启滔
张宝
郑文岭
马文丽
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013
4
下载PDF
职称材料
2
5-氮杂胞苷对结肠癌细胞CHD5基因表达及细胞增殖活性的影响
赵蕊
严启滔
吕静野
黄海丽
马文丽
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013
3
下载PDF
职称材料
3
CHD5基因RNAi慢病毒载体的构建及其对结直肠癌细胞生物学功能的影响
赵蕊
吕静野
黄海丽
严启滔
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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