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贯叶金丝桃素在神经精神疾病中的作用机制研究
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作者 张铮 陈清杰 吴宁华 《医药前沿》 2023年第16期34-37,共4页
贯叶金丝桃素是中药贯叶金丝桃的重要活性成分,除了抗抑郁效果,贯叶金丝桃素在其他神经精神疾病中具有潜在的治疗作用。本文从其对神经递质、TRPC6、细胞因子影响等方面对现阶段贯叶金丝桃素在神经精神疾病中的作用机制进行归纳和阐述,... 贯叶金丝桃素是中药贯叶金丝桃的重要活性成分,除了抗抑郁效果,贯叶金丝桃素在其他神经精神疾病中具有潜在的治疗作用。本文从其对神经递质、TRPC6、细胞因子影响等方面对现阶段贯叶金丝桃素在神经精神疾病中的作用机制进行归纳和阐述,为进一步深入研究奠定基础。 展开更多
关键词 贯叶金丝桃素 神经精神疾病 神经递质 TRPC6 细胞因子
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小檗碱抑制JAK2/STAT3信号通路改善糖尿病大鼠前额叶皮层神经元损伤
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作者 万彬彬 张月 +3 位作者 何昂 袁雨渟 吴宁华 陈清杰 《湖北科技学院学报(医学版)》 2023年第4期292-297,共6页
目的探讨小檗碱(BBR)通过介导JAK2/STAT3信号通路对糖尿病大鼠前额叶皮层神经元损伤的作用。方法将48只8周龄的雄性Wistar大鼠分为对照组(Nor组)、糖尿病组(DM组)、小檗碱治疗组(BBR组)、二甲双胍治疗组(Met组)4组。DM模型通过给予高脂... 目的探讨小檗碱(BBR)通过介导JAK2/STAT3信号通路对糖尿病大鼠前额叶皮层神经元损伤的作用。方法将48只8周龄的雄性Wistar大鼠分为对照组(Nor组)、糖尿病组(DM组)、小檗碱治疗组(BBR组)、二甲双胍治疗组(Met组)4组。DM模型通过给予高脂高糖饲料并联合尾静脉注射链脲佐菌素(25mg/kg)诱导造模,之后将小檗碱187.75mg/(kg·d)和二甲双胍184mg/(kg·d)以灌胃方式给药治疗,连续给药6周。取材后通过HE染色观察各组大鼠前额叶皮层区神经元形态的变化;通过免疫组化观察各组大鼠前额叶皮层区小胶质细胞的活化程度;通过Western blot法检测各组大鼠前额叶皮层中p JAK2/JAK2与p STAT3/STAT3的蛋白表达水平;通过免疫荧光检测各组大鼠前额叶皮层区Caspase 3的蛋白表达水平。结果与Nor组相比,DM组大鼠的前额叶皮层区神经元发生了变性,小胶质细胞过度活化,Iba 1蛋白表达水平明显升高,JAK2/STAT3信号通路显著激活和Caspase 3蛋白荧光强度明显增强;经BBR和Met治疗后,糖尿病大鼠的前额叶皮层区神经元均有不同程度的改善,小胶质细胞的活化程度、Iba 1蛋白的表达水平、JAK2/STAT3信号通路激活程度和Caspase 3蛋白荧光强度均明显降低。结论小檗碱可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路来降低小胶质细胞的活化程度,从而减少炎症反应和细胞凋亡,最终改善糖尿病大鼠前额叶皮层中神经元损伤。 展开更多
关键词 糖尿病 小檗碱 JAK2/STAT3 神经元损伤
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中草药中拟除虫菊酯类农药残留的顶空-固相微萃取方法考察 被引量:8
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作者 吴宁华 杨敏 +2 位作者 雷咪 李金 张林碧 《湖北中医药大学学报》 2012年第3期35-37,共3页
目的优化顶空-固相微萃取-气相色谱法测定中草药中拟除虫菊酯类农药残留的条件。方法样品经丙酮超声提取,顶空固相微萃取净化、富集后,采用气相色谱-电子捕获检测器检测;对影响顶空-固相微萃取的主要因素如萃取涂层类型、萃取温度及时... 目的优化顶空-固相微萃取-气相色谱法测定中草药中拟除虫菊酯类农药残留的条件。方法样品经丙酮超声提取,顶空固相微萃取净化、富集后,采用气相色谱-电子捕获检测器检测;对影响顶空-固相微萃取的主要因素如萃取涂层类型、萃取温度及时间等进行条件试验。结果选择聚二甲基硅氧烷(PDMS 100μm)固相微萃取萃取头,萃取溶剂为丙酮-水(1∶4),加入0.5 g氯化钠,95℃顶空萃取40 min;色谱柱为DB-608。结论前处理方法简便、快速,几乎不使用有机溶剂,适用于中草药中拟除虫菊酯类农药残留检测。 展开更多
关键词 拟除虫菊酯农药 中草药 固相微萃取 残留分析
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巴哼鬼师卜鬼仪式及其音声研究——以广西融水白云乡城卡屯为例 被引量:1
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作者 吴宁华 吴云龙 《歌海》 2011年第4期4-10,共7页
巴哼人是瑶族的一个支系,普遍崇拜天地龙神和逝者灵魂。因此,在日常生产、生活中遇到问题便会请当地的鬼师来沟通人神,藉此消灾、祈福。"卜鬼"是在生产、生活中如遇不测、灾祸或疾病,由鬼师来完成的仪式行为。该仪式的音声、... 巴哼人是瑶族的一个支系,普遍崇拜天地龙神和逝者灵魂。因此,在日常生产、生活中遇到问题便会请当地的鬼师来沟通人神,藉此消灾、祈福。"卜鬼"是在生产、生活中如遇不测、灾祸或疾病,由鬼师来完成的仪式行为。该仪式的音声、音乐结构和鬼师沟通人神所处的象征性位置,深刻体现了巴哼人透过灵魂世界的解读来理解时空意义的方式。 展开更多
关键词 巴哼人 鬼师 卜鬼 音声
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HPLC法同时测定野豌豆中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量 被引量:5
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作者 陈清杰 杨洁 +1 位作者 甘露珍 吴宁华 《中国药师》 CAS 2015年第5期861-862,共2页
目的:建立野豌豆药材中芦丁、金丝桃苷和槲皮素三个活性成分的HPLC含量测定方法。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1‰磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.8 ml·min-1,检测... 目的:建立野豌豆药材中芦丁、金丝桃苷和槲皮素三个活性成分的HPLC含量测定方法。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1‰磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.8 ml·min-1,检测波长:370 nm,柱温:30℃。结果:芦丁、金丝桃苷和槲皮素的线性范围分别为4.090~130.940μg ·ml-1(r=0.9999)、4.600~147.200μg ·ml-1(r=0.9999)和0.810~25.780μg·ml-1(r =0.9998);平均回收率分别为103.45%(RSD=1.25%)、98.96%(RSD=1.77%)和102.88%(RSD=0.84%)(n=6)。结论:本方法稳定,重复性好,操作简单,可用于野豌豆药材的质量控制。 展开更多
关键词 野豌豆 高效液相色谱法 质量控制 黄酮
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人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达 被引量:3
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作者 程小款 杜恺 +2 位作者 衡凤燕 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 1995年第5期326-332,共7页
删除人白细胞介素-2受体α链cDNA中编码胞质内13个氨基酸及跨膜区19个氨基酸残基的DNA片段后,接上人工合成的终止寡核苷酸片段,改建后的cDNA与真核表达载体pRc/CMV重组成质粒pCMV/rsIL2R。用电打... 删除人白细胞介素-2受体α链cDNA中编码胞质内13个氨基酸及跨膜区19个氨基酸残基的DNA片段后,接上人工合成的终止寡核苷酸片段,改建后的cDNA与真核表达载体pRc/CMV重组成质粒pCMV/rsIL2R。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染CHO细胞,经G418筛出表达Neo基因的克隆20株,通过mRNA狭缝杂交及ELISA检测,有5株能稳定表达分泌型α链mRNA及蛋白,其中4株细胞培养上清中的IL2Rα链的含量达1400U/ml以上。 展开更多
关键词 白细胞介素2 受体 重组克隆 真核基因表达
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染色质免疫沉淀技术及其在基因表达调控研究中的初步应用 被引量:1
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作者 张勇 程小款 +1 位作者 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期52-55,共4页
目的验证抑癌基因表达产物p53蛋白在体内是否结合于p21WAF1/CIP1基因的启动子区,并检测p53蛋白对热休克蛋白hsp90β基因启动子区的结合情况。方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)及PCR技术检测特异基因调节序列,Western印迹分析p53蛋白。结果... 目的验证抑癌基因表达产物p53蛋白在体内是否结合于p21WAF1/CIP1基因的启动子区,并检测p53蛋白对热休克蛋白hsp90β基因启动子区的结合情况。方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)及PCR技术检测特异基因调节序列,Western印迹分析p53蛋白。结果在p53抗体免疫沉淀的DNA片段中含有p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区p53蛋白结合序列,免疫沉淀样品中含有p53蛋白。结论p53蛋白在体内结合于p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区,参与两基因的表达调控。 展开更多
关键词 染色质免疫沉淀 hsp90β P53 P21^WAF1/CIP1
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野生型p53对热休克蛋白90β基因表达的调控作用 被引量:2
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作者 张业 崔玉坤 +1 位作者 吴宁华 沈珝琲 《基础医学与临床》 CSCD 2000年第3期76-79,共4页
为了阐明野生型p53分热休克蛋白90β(hsp90β)基因表达调控中的作用,我们利用野生型p53的表达质粒转染Jurkat细胞,发现野生型p53可以剂量依赖方式抑制hsp90β基因的启动子活性,并且证实hsp90β基因的表达在mRNA和蛋白水平均明显减少。
关键词 HSP90Β基因 基因表达调控 P53 热休克蛋白
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人胎脑中hSNF5结合蛋白的筛选、克隆及分析 被引量:1
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作者 张怡 杨珺 +1 位作者 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期529-532,共4页
目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定... 目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定核苷酸序列,计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域。结果获得9个阳性克隆。DNA序列分析及同源性比较表明,1个克隆的序列与推导蛋白FLJ20643羧基端的mRNA同源性高达97%,4个克隆与GenBank中可编码蛋白的序列有较高的同源性,其他4个克隆编码的氨基酸顺序与GenBank中的已知序列无同源性。结论在人胎脑cDNA文库中克隆到hSNF5的结合蛋白,这些蛋白质可能通过hSNF5募集染色质重塑复合物以调节其靶基因的转录活性熏及其参与的细胞功能。 展开更多
关键词 hSNF5 酵母双杂交体系 基因调控
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淋巴细胞中热休克蛋白90基因表达双重调控机制的研究 被引量:2
10
作者 王艳林 沈玙琲 吴宁华 《基础医学与临床》 CSCD 1995年第6期23-27,共5页
体外正常生长的Jurkat细胞中有高hsp90α,hsp90β和低hsp70基础性表达。PHA和TPA刺激对hsp90α和hsp90β呈迟缓型表达诱导,对hsp70无此种影响。42℃热休克40min对三种hsp表现为... 体外正常生长的Jurkat细胞中有高hsp90α,hsp90β和低hsp70基础性表达。PHA和TPA刺激对hsp90α和hsp90β呈迟缓型表达诱导,对hsp70无此种影响。42℃热休克40min对三种hsp表现为快速转录活化,但hsp70表达水平的增加明显高于两种hsp90。以富含HSE核心序列的DNA为探针研究细胞内HSF与顺式作用元件的结合活性,发现正常培养或PHA、TPA刺激的Jurkat细胞中的HSF无HSE结合活性,与之相反,热休克时HSF与HSE结合活性明显增加。以上研究结果提示,T淋巴细胞内hsp90表达存在双重调控机制。 展开更多
关键词 淋巴细胞 热休克蛋白 基因表达 应激
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辛夷指纹图谱的顶空固相微萃取气相色谱联用初探 被引量:3
11
作者 陈成 杨敏 +3 位作者 吴宁华 黄传奇 胡敦梅 张林碧 《湖北中医学院学报》 2011年第3期37-38,共2页
目的建立辛夷气相色谱指纹图谱,对顶空-固相微萃取条件进行优化。方法采用顶空-固相微萃取技术直接提取辛夷中的挥发性成分,再进行气相色谱分析。结果采用PDMS/DVB涂层8,0℃时,萃取50min效果较好。结论该方法操作简便,取样量小,无试剂污... 目的建立辛夷气相色谱指纹图谱,对顶空-固相微萃取条件进行优化。方法采用顶空-固相微萃取技术直接提取辛夷中的挥发性成分,再进行气相色谱分析。结果采用PDMS/DVB涂层8,0℃时,萃取50min效果较好。结论该方法操作简便,取样量小,无试剂污染,可用于辛夷中挥发性成分的指纹图谱研究。 展开更多
关键词 顶空固相微萃取 指纹图谱 气相色谱 辛夷
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AMPKα2基因敲除鼠饲养繁殖及基因鉴定 被引量:2
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作者 张飞雪 吴宁华 +2 位作者 汪佳佳 许丹丹 刘秀芬 《湖北科技学院学报(医学版)》 2020年第5期395-397,共3页
目的探讨AMPKα2基因敲除小鼠的饲养繁殖以及子代的鉴定方法,为进一步研究AMPKα2基因在糖尿病心肌病中的作用提供动物模型。方法引进的AMPKα2基因敲除小鼠均为杂合子基因型,2雌1雄同窝进行饲养繁殖,从仔鼠的尾尖提取DNA,用PCR的方法... 目的探讨AMPKα2基因敲除小鼠的饲养繁殖以及子代的鉴定方法,为进一步研究AMPKα2基因在糖尿病心肌病中的作用提供动物模型。方法引进的AMPKα2基因敲除小鼠均为杂合子基因型,2雌1雄同窝进行饲养繁殖,从仔鼠的尾尖提取DNA,用PCR的方法扩增目的基因片段,然后进行核酸电泳判断基因型。结果子代小鼠繁殖成功并获得野生型、敲除杂合子及敲除纯合子3种基因型。然后选用雌雄均为纯合子,按照2∶1合笼进行大量繁殖,获得了一批AMPKα2敲除纯合子基因型小鼠。结论依据正确的饲养繁殖及可靠的基因型鉴定方法,可利用AMPKα2基因杂合子小鼠繁殖出所需数量的纯合子小鼠。 展开更多
关键词 AMPKα2基因 小鼠 饲养繁殖 基因鉴定
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贺州三歧村还盘王愿仪式田野实录及音声阐释 被引量:1
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作者 吴宁华 《歌海》 2010年第3期7-18,22,共13页
还盘王愿仪式是瑶族盘瑶支系祭祀祖先盘王最重要的宗教仪式活动,内容纷繁复杂,场面热闹隆重。通过对广西贺州瑶族还盘王愿仪式的田野实录,并区别局内/外人仪式文本及仪式音声分类的不同,阐释音声在仪式中作为宗教信仰体系存在的意义。
关键词 瑶族 还盘王愿 仪式 音声
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用酵母单杂交系统筛选人IL-2Rα基因NIRS元件结合蛋白的cDNA
14
作者 盛德乔 陆瑜 +2 位作者 李宏帆 吴宁华 沈珝琲 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第3期214-218,共5页
目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和... 目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和βgal活性;测序后分析发现它们分别属于4个不同蛋白的cDNA克隆。其中一个是已知的反式作用因子Ku抗原,另一个是RNA聚合酶Ⅰ的转录终止因子。它们的C末端分别含有SAP和SANTDNA结合结构域。结论在Jurkat细胞中存在与NIRS元件相互作用的结合蛋白,相关的研究正在进行中。 展开更多
关键词 NIRS 结合蛋白 人IL-2 筛选 Ra基因 杂交系统 酵母 白细胞介素2受体 人外周血淋巴细胞 DNA结合结构域 Jurkat细胞 相互作用 HTLV-1 cDNA文库 cDNA克隆 反式作用因子 RNA聚合酶 阳性克隆 Ku抗原 杂交体 gal 假阳性 SAP C末端
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白细胞介素2受体α基因表达中两组近端启动子活性的研究
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作者 程小款 衡凤燕 +2 位作者 刘觉辉 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期40-40,共1页
关键词 启动子 转录调控 白细胞介素2受体α基因 基因表达
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小檗碱对棕榈酸诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响
16
作者 杨茹 覃金红 +2 位作者 刘丹霞 陈清杰 吴宁华 《中国药师》 CAS 2022年第10期1703-1707,共5页
目的:探讨小檗碱对棕榈酸(PA)诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响。方法:在正常培养的H9c2细胞中,采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率;采用ELISA试剂盒检测细胞裂解液中氧化还原指标:丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘... 目的:探讨小檗碱对棕榈酸(PA)诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响。方法:在正常培养的H9c2细胞中,采用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞存活率;采用ELISA试剂盒检测细胞裂解液中氧化还原指标:丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH);采用免疫印迹法Western blot检测细胞内能量感受器磷酸化AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/AMPK及肝激酶B1(LKB1)、沉默调节蛋白1(SIRT1)和成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)的蛋白表达。结果:PA在100μmol·L^(-1)浓度时,处理H9c2细胞24 h以上产生明显细胞毒性,与正常对照组(不含PA)比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。使用5μmol·L^(-1)小檗碱预处理H9c2细胞4 h可以逆转PA对H9c2中MDA、SOD和GSH的影响,同时细胞存活率明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,在给予小檗碱治疗后,p-AMPK/AMPK、LKB1、SIRT 1和FGF-21蛋白的表达水平亦显著增加(P<0.05)。但使用FGF21的干扰RNA(siRNA)后,小檗碱激活AMPK的现象几乎被逆转,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小檗碱可显著改善PA诱导的心肌细胞脂毒性,其机制可能与经典的FGF-21/AMPK信号通路有关。 展开更多
关键词 小檗碱 心肌细胞H9c2 棕榈酸 AMP依赖的蛋白激酶 成纤维细胞生长因子-21
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人hsp90β基因近端上游CpG位点甲基化状态的研究
17
作者 施一江 吴宁华 沈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期632-635,共4页
真核细胞基因组DNA的甲基化主要发生在CpG二核苷酸对的胞嘧啶环上(m5C)[1,2].在真核细胞基因组DNA内,约70%的CpG位点发生了甲基化.CpG位点在基因组DNA内并不是均匀分布的,多数聚集在一些基因的5’... 真核细胞基因组DNA的甲基化主要发生在CpG二核苷酸对的胞嘧啶环上(m5C)[1,2].在真核细胞基因组DNA内,约70%的CpG位点发生了甲基化.CpG位点在基因组DNA内并不是均匀分布的,多数聚集在一些基因的5’端.大量的实验证据表明,真核基因5... 展开更多
关键词 HSP90Β基因 CpG位点 甲基化状态
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人热休克因子原核表达及表达产物的研究
18
作者 王艳林 刘巨洪 +2 位作者 莽锐 程小款 吴宁华 《基础医学与临床》 CSCD 1996年第3期190-196,共7页
利用DNA重组技术构建了人hsp反式作用因子HSF1和HSF2的原核表达质粒pET-11B/HSF1和pET-11B/HSF2。经IPTG诱导,二者在BL21(DE3)pLysS菌株中得到有效表达。利用hsp90β第... 利用DNA重组技术构建了人hsp反式作用因子HSF1和HSF2的原核表达质粒pET-11B/HSF1和pET-11B/HSF2。经IPTG诱导,二者在BL21(DE3)pLysS菌株中得到有效表达。利用hsp90β第一内含子HSE和合成HSE作为探针,对比分析两种表达产物与其特异性顺式作用元件间的结合能力,结果显示,原核表达的HSF具有HSE结合活性,HSF1对HSE的亲和力及结合在HSE上的分子数明显高于HSF2,这种差异可能是两种HSF具有不同转录活化功能的分子基础。 展开更多
关键词 热休克因子 热休克元件 基因表达
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热休克前后人hsp90 β基因DNase I高敏感位点的研究
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作者 施一江 吴宁华 《中日友好医院学报》 1998年第3期243-244,共2页
1材料与方法11材料限制性内切酶SacI、脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonucleaseⅠ,DNaseⅠ)为德国BoehringerMannheim公司产品;Jurkat细胞株、人hsp90β基因组DNA... 1材料与方法11材料限制性内切酶SacI、脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonucleaseⅠ,DNaseⅠ)为德国BoehringerMannheim公司产品;Jurkat细胞株、人hsp90β基因组DNA1102bp/173bp片段由本... 展开更多
关键词 热休克 HSP90Β基因 高敏感位点 DNASEI
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白细胞介素2受体α链基因的体外转录研究
20
作者 沈珝琲 侯忠诚 +4 位作者 莽锐 吴宁华 强伯勤 郑重 刘永明 《自然科学进展(国家重点实验室通讯)》 1994年第5期619-624,共6页
白细胞介素2受体(IL2R)由α,β和γ链所组成,其中γ链不直接与IL2结合,它与组成性表达的β链一起主要参与信号的内传,因此α链的表达成为高亲合力受体是否存在的关键。IL2Rα基因的启动子区包含-58bp和+1bp两个主要转录起始点及它们的上... 白细胞介素2受体(IL2R)由α,β和γ链所组成,其中γ链不直接与IL2结合,它与组成性表达的β链一起主要参与信号的内传,因此α链的表达成为高亲合力受体是否存在的关键。IL2Rα基因的启动子区包含-58bp和+1bp两个主要转录起始点及它们的上游-90bp和-30bp处的两个TATA盒; 展开更多
关键词 白细胞介素2 基因转录 体外
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