利用免疫蛋白组学方法,鉴定出链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)江苏分离株HA9801具有免疫反应性的蛋白HM3。应用同源性比对、信号肽预测、跨膜区预测及亚定位预测等生物信息学方法对该蛋白进行分析,结果显示:同源性最高的蛋白...利用免疫蛋白组学方法,鉴定出链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)江苏分离株HA9801具有免疫反应性的蛋白HM3。应用同源性比对、信号肽预测、跨膜区预测及亚定位预测等生物信息学方法对该蛋白进行分析,结果显示:同源性最高的蛋白为屎肠球菌胞外溶解物结合蛋白(41%);蛋白序列中含有信号肽结构;7-24位氨基酸为该蛋白的跨膜区;预测蛋白定位为除胞质外的未定位置。PCR扩增出该蛋白的一段基因定向克隆到表达载体pET-32a(+)中并转化入BL21(DE3)宿主菌。重组菌经IPTG诱导后的SDS-PAGE图谱在46kDa处出现融合蛋白的条带。Westernblot表明,此融合蛋白可被SPF微型猪抗SS2血清所识别,提示该蛋白可作为该菌的亚单位疫苗的候选物。展开更多
[目的]本文旨在研究碳酸酐酶(SCA)对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响,并分析其生物学功能。[方法]以猪链球菌2型野生株SC070731为背景,构建sca缺失株Δsca,通过测定不同条件下的生长曲线和H 2O_(2)应激、小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬与存...[目的]本文旨在研究碳酸酐酶(SCA)对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响,并分析其生物学功能。[方法]以猪链球菌2型野生株SC070731为背景,构建sca缺失株Δsca,通过测定不同条件下的生长曲线和H 2O_(2)应激、小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬与存活、猪全血存活等试验,评价SCA对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响。[结果]与野生株相比,Δsca株在缺乏CO_(2)条件下的生长受到显著抑制,生长12 h A 600值低于0.5;在5%CO_(2)条件下,虽然Δsca株的迟缓期较野生株长,但平台期其恢复到与野生株相同的水平,A 600值均接近1.6;在缺乏CO_(2)条件下,添加NaHCO_(3)可显著刺激Δsca株生长,且与浓度呈正相关;添加不饱和脂肪酸(UFA)油酸或Tween-80、Tween-20等UFA衍生物均可显著促进Δsca株生长。经H 2O_(2)作用20 min后,野生株存活率为99.48%,而Δsca株存活率为74.04%(P<0.01)。吞噬试验表明,RAW264.7对野生株和Δsca株的吞噬率无显著差异;存活试验表明,经抗生素处理3 h后,野生株的存活率为77.98%,而Δsca株在RAW264.7内的存活率显著降低,仅为38.93%(P<0.01)。猪全血存活试验表明,与野生株的存活率(110.02%)相比,Δsca株在猪全血中的存活率为51.39%(P<0.01)。[结论]SCA促进猪链球菌利用CO_(2)和HCO-3,并参与UFA合成,因而有助于猪链球菌的生长及抗氧化应激;该酶促进猪链球菌在猪全血和小鼠巨噬细胞中存活,提示其在猪链球菌致病过程中发挥重要作用。展开更多
文摘利用免疫蛋白组学方法,鉴定出链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)江苏分离株HA9801具有免疫反应性的蛋白HM3。应用同源性比对、信号肽预测、跨膜区预测及亚定位预测等生物信息学方法对该蛋白进行分析,结果显示:同源性最高的蛋白为屎肠球菌胞外溶解物结合蛋白(41%);蛋白序列中含有信号肽结构;7-24位氨基酸为该蛋白的跨膜区;预测蛋白定位为除胞质外的未定位置。PCR扩增出该蛋白的一段基因定向克隆到表达载体pET-32a(+)中并转化入BL21(DE3)宿主菌。重组菌经IPTG诱导后的SDS-PAGE图谱在46kDa处出现融合蛋白的条带。Westernblot表明,此融合蛋白可被SPF微型猪抗SS2血清所识别,提示该蛋白可作为该菌的亚单位疫苗的候选物。
文摘[目的]本文旨在研究碳酸酐酶(SCA)对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响,并分析其生物学功能。[方法]以猪链球菌2型野生株SC070731为背景,构建sca缺失株Δsca,通过测定不同条件下的生长曲线和H 2O_(2)应激、小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬与存活、猪全血存活等试验,评价SCA对猪链球菌生长及抗氧化应激的影响。[结果]与野生株相比,Δsca株在缺乏CO_(2)条件下的生长受到显著抑制,生长12 h A 600值低于0.5;在5%CO_(2)条件下,虽然Δsca株的迟缓期较野生株长,但平台期其恢复到与野生株相同的水平,A 600值均接近1.6;在缺乏CO_(2)条件下,添加NaHCO_(3)可显著刺激Δsca株生长,且与浓度呈正相关;添加不饱和脂肪酸(UFA)油酸或Tween-80、Tween-20等UFA衍生物均可显著促进Δsca株生长。经H 2O_(2)作用20 min后,野生株存活率为99.48%,而Δsca株存活率为74.04%(P<0.01)。吞噬试验表明,RAW264.7对野生株和Δsca株的吞噬率无显著差异;存活试验表明,经抗生素处理3 h后,野生株的存活率为77.98%,而Δsca株在RAW264.7内的存活率显著降低,仅为38.93%(P<0.01)。猪全血存活试验表明,与野生株的存活率(110.02%)相比,Δsca株在猪全血中的存活率为51.39%(P<0.01)。[结论]SCA促进猪链球菌利用CO_(2)和HCO-3,并参与UFA合成,因而有助于猪链球菌的生长及抗氧化应激;该酶促进猪链球菌在猪全血和小鼠巨噬细胞中存活,提示其在猪链球菌致病过程中发挥重要作用。
