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绒山羊曲细精管生殖细胞的长期培养和精子发生过程的观察 被引量:14
1
作者 吴应积 罗奋华 +1 位作者 薛晓先 旭日干 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期411-416,共6页
哺乳动物精子发生过程是生殖生物学的重要研究课题之一.为了开展对山羊精子发生过程的研究,我们首次建立了绒山羊睾丸生殖细胞原代培养方法.原代生殖细胞和支持细胞(Sertolicells)由绒山羊睾丸曲细精管组织块产生,在体外共培养超过三个... 哺乳动物精子发生过程是生殖生物学的重要研究课题之一.为了开展对山羊精子发生过程的研究,我们首次建立了绒山羊睾丸生殖细胞原代培养方法.原代生殖细胞和支持细胞(Sertolicells)由绒山羊睾丸曲细精管组织块产生,在体外共培养超过三个月.在共培养期间,观察到绒山羊的精原干细胞分化为精母细胞和精子细胞的形态变化过程.这一方法的建立为山羊精子发生过程的研究和应用打下了基础.实验结果显示,在没有添加任何生长因子的条件下,绒山羊睾丸生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞.这一结果暗示了组织块和共生的支持细胞为生殖细胞的增生和分化提供了营养因子和调节因子.生成的游离精子细胞最后全部死亡,暗示这一共培养体系不能提供变态过程所需因子. 展开更多
关键词 绒山羊 雄性生殖细胞 共培养 精子发生过程
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药用蛋白质乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展 被引量:2
2
作者 吴应积 张学明 +2 位作者 杨东山 罗奋华 旭日干 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期94-100,共7页
用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的... 用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的转基因动物制作方法。综述了这一技术的优点,概括描述了了乳腺生物反应器表达载体的构建方法,及转基因动物的制作方法。讨论了这些方法的优缺点及技术改进的发展方向,特别是介绍了最近出现的、有研究和应用价值的用精原干细胞制作转基因动物的方法。 展开更多
关键词 乳腺 生物反应器 载体构建 转基因技术
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滑鼠蛇肝线粒体DNA的制备及性质测定
3
作者 吴应积 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1989年第1期116-120,共5页
报导了用蛇肝脏制备线粒体DNA的简便方法。电镜分析结果表明,滑鼠蛇肝mt DNA为环状分子,周长5.23μm。限制性内切酶PstI,BamHI和EcoRI在滑鼠蛇肝mtDNA上分别有2、3和4个点切。根据各酶切片段的大小测得mt DNA的平均分子量为16.91kb或10.... 报导了用蛇肝脏制备线粒体DNA的简便方法。电镜分析结果表明,滑鼠蛇肝mt DNA为环状分子,周长5.23μm。限制性内切酶PstI,BamHI和EcoRI在滑鼠蛇肝mtDNA上分别有2、3和4个点切。根据各酶切片段的大小测得mt DNA的平均分子量为16.91kb或10.85×10~6 dalton。 展开更多
关键词 滑鼠蛇 线粒体DNA 纯化 肝脏
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牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性 被引量:47
4
作者 多曙光 吴应积 +1 位作者 罗奋华 旭日干 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期299-305,共7页
采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;染色体分析结果表明,培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表... 采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;染色体分析结果表明,培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白5和8。该细胞在添加胰岛素、氢化可的松以及羊催乳素的无血清培养液中诱导培养时,用RT-PCR方法检测到了β-酪蛋白基因的转录。这些结果表明,分离培养的细胞是乳腺上皮细胞,这些细胞在诱导培养的条件下能够转录表达β-酪蛋白。 展开更多
关键词 牛乳腺上皮细胞 细胞培养 核型分析 β-酪蛋白转录
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mTOR信号通路与细胞生长调控 被引量:25
5
作者 王志钢 吴应积 旭日干 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期333-342,共10页
mTOR(the mammalian target of rapamycin)是一个进化上十分保守的蛋白激酶,属于PIKK(the phosphatidylinositol kinase-related kinase)超家族,作为Ser/Thr激酶而起作用。它可以汇聚和整合来自于营养、生长因子、能量和环境压力对细胞... mTOR(the mammalian target of rapamycin)是一个进化上十分保守的蛋白激酶,属于PIKK(the phosphatidylinositol kinase-related kinase)超家族,作为Ser/Thr激酶而起作用。它可以汇聚和整合来自于营养、生长因子、能量和环境压力对细胞的刺激信号,进而通过下游效应器(4EBP1和S6Ks)调节细胞生长。mTOR信号通路还影响胚胎干细胞和早期胚胎的发育,并且与肿瘤、肥胖及代谢紊乱等疾病有关。对mTOR信号通路的生理功能、分子组成和调节机制的研究不仅可以深入了解细胞生长调控的机制,而且对于相关疾病的治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 MTOR 信号转导 细胞生长 调控
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山羊精原干细胞的分离纯化及鉴定 被引量:6
6
作者 孔群芳 罗奋华 +3 位作者 萨初拉 包佳婧 刘代艳 吴应积 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1554-1560,共7页
旨在探究1种简便高效分离纯化山羊精原干细胞的方法。采用三步酶消化对4月龄的山羊睾丸进行处理,分离获得单细胞悬液。将细胞依次培养于明胶、大鼠鼠尾胶原和层粘连蛋白涂层的细胞培养皿中,根据各类细胞贴壁能力和贴壁速度不同进行精原... 旨在探究1种简便高效分离纯化山羊精原干细胞的方法。采用三步酶消化对4月龄的山羊睾丸进行处理,分离获得单细胞悬液。将细胞依次培养于明胶、大鼠鼠尾胶原和层粘连蛋白涂层的细胞培养皿中,根据各类细胞贴壁能力和贴壁速度不同进行精原干细胞的富集和纯化,并在各步纯化过程中用精原干细胞特异标记分子PLZF和CDH1进行免疫荧光标记染色鉴定,统计精原干细胞所占的比率,并对获得的细胞进行初步培养和鉴定。每克睾丸中分离出1.36×107个细胞。纯化后每克睾丸组织获得8.7×104个细胞,其中精原干细胞纯度达87.0%。将分离纯化后的细胞在体外培养可形成细胞簇,并表达精原干细胞标记分子CDH1和PLZF。结果表明,通过三步酶消化和差异贴壁方法已经建立起山羊精原干细胞的分离纯化技术。用此技术纯化的山羊精原干细胞(SSCs)能在体外培养增殖,形成细胞簇。 展开更多
关键词 山羊 睾丸 精原干细胞 分离纯化 免疫荧光染色
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绒山羊Scp3基因的克隆及睾丸中第一轮减数分裂的发生 被引量:4
7
作者 侯越 吴应积 +5 位作者 罗奋华 苏慧敏 张学明 张岩 白音巴图 刘陶迪 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期341-344,共4页
联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,Scp3)是雄性生殖细胞减数分裂中联会复合体形成必需的组成部分,在哺乳动物生殖细胞减数分裂中具有重要功能。通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法首次克隆到了绒山羊Scp3基因的编码区片段... 联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,Scp3)是雄性生殖细胞减数分裂中联会复合体形成必需的组成部分,在哺乳动物生殖细胞减数分裂中具有重要功能。通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法首次克隆到了绒山羊Scp3基因的编码区片段。测序结果表明,绒山羊与牛的Scp3基因编码序列同源率达到98%。根据测得的DNA序列,设计引物,用RT-PCR方法分析测定了青春前期绒山羊不同个体中睾丸组织的Scp3的转录表达。结果显示,雄性绒山羊青春前期睾丸发育存在个体差异,已分析的样品第一轮减数分裂发生的时间普遍为73天之后。这一结果为绒山羊的睾丸发育和精子发生过程的相关研究打下了基础。 展开更多
关键词 绒山羊 联会复合体蛋白3 克隆 睾丸发育 减数分裂
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人gdnf基因的克隆及牛β-酪蛋白基因座定位整合载体的构建 被引量:3
8
作者 张学明 罗奋华 +1 位作者 苏慧敏 吴应积 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期113-118,共6页
用分子克隆技术构建人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,用于制备生产人GDNF的牛乳腺生物反应器。打靶载体以牛β-casein基因上游和下游5.7 kb序列为5′和3′同源臂;neo抗性基因为正筛选因子;HSV-tk基因和DsRed2基因为... 用分子克隆技术构建人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,用于制备生产人GDNF的牛乳腺生物反应器。打靶载体以牛β-casein基因上游和下游5.7 kb序列为5′和3′同源臂;neo抗性基因为正筛选因子;HSV-tk基因和DsRed2基因为双负筛选因子;人gdnf基因置于5′同源臂下游,SV40 polyA序列插入到人gdnf基因下游作为人gdnf基因转录终止信号。经PCR、限制性内切酶图谱及DNA测序分析鉴定,结果表明已成功地构建了人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,为研究人gdnf基因在牛β-casein基因座的定点整合及通过体细胞核移植法制备人GDNF牛乳腺生物反应器的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 基因打靶 人胶质细胞源性神经营养因子 牛β-酪蛋白基因座 载体
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抗体分离纯化技术的研究进展 被引量:5
9
作者 侯越 罗奋华 吴应积 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期60-62,共3页
制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体质量的高低,将直接影响试验的成败。抗体的制备有两个途径:一是一般通用的方法,以纯化的抗原免疫动物,获得多克隆抗体;二是应用杂交瘤技术制备单克隆抗体。但不论用何种技术制备... 制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体质量的高低,将直接影响试验的成败。抗体的制备有两个途径:一是一般通用的方法,以纯化的抗原免疫动物,获得多克隆抗体;二是应用杂交瘤技术制备单克隆抗体。但不论用何种技术制备的抗体都需要进行纯化。重要的是根据抗体的性质和来源选择一个合适的分离纯化方法。对当前的纯化方法进行了一个简要的综述。 展开更多
关键词 抗体 分离 纯化
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6天龄与10天龄大鼠的睾丸组织的基因差异表达 被引量:1
10
作者 刘陶迪 罗奋华 +1 位作者 于泊洋 吴应积 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期40-44,共5页
通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12×135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的... 通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12×135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的基因共2420个。这些差异表达的基因中有3154个基因具有基因本体注释,参与了154个生物学通路。进一步分析表明具有8倍以上差异表达的基因有13个,这些基因参与了生物学过程、细胞组分和分子功能等基因本体分类,进一步选择3个差异表达的基因,LOC686076、Cxcl6和Trib3,做了实时定量RT-PCR检测。其结果趋势与芯片数据一致。因此,我们初步认为精原干细胞的发生与增殖在大鼠早期的发育过程中已经有大量的基因参与,是一个多基因协调表达的过程。 展开更多
关键词 大鼠 睾丸组织 精原干细胞 差异表达 基因芯片
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检测生精过程中减数分裂完成的质粒载体的构建 被引量:1
11
作者 于泊洋 罗奋华 +1 位作者 张岩 吴应积 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期202-207,共6页
旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动... 旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动子,期待可以启动红色荧光蛋白基因的表达。经大鼠睾丸共培养细胞转染试验证实,成功构建了含有Gsg2启动子的表达双荧光蛋白质粒载体。 展开更多
关键词 小鼠 Gsg2启动子 CMV启动子 精子发生
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人白介素-3乳腺表达载体的构建 被引量:1
12
作者 多曙光 吴应积 +1 位作者 罗奋华 旭日干 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期540-546,共7页
人白介素-3是一种造血系统和免疫系统调节剂,在治疗造血系统疾病、肿瘤、先天或获得性免疫功能缺陷等方面发挥着重要作用.应用牛乳腺生物反应器生产人白介素-3的研究具有重要的临床应用和经济价值.研究选用具有红色荧光蛋白报告基因(R e... 人白介素-3是一种造血系统和免疫系统调节剂,在治疗造血系统疾病、肿瘤、先天或获得性免疫功能缺陷等方面发挥着重要作用.应用牛乳腺生物反应器生产人白介素-3的研究具有重要的临床应用和经济价值.研究选用具有红色荧光蛋白报告基因(R ed2)和新霉素抗性基因(neor)表达框架的pD sR ed2-1质粒为骨架构建人白介素-3乳腺表达载体.通过PCR方法分别扩增牛β-酪蛋白基因5′端上游调控序列、人IL-3基因以及CM V启动子序列,将它们按先后顺序分别定向克隆于质粒pD sR ed2-1的多克隆位点内,使牛β-酪蛋白基因调控序列位于人IL-3基因的上游,指导人IL-3基因在乳腺组织中特异性表达,而CM V启动子位于红荧光蛋白基因的上游,指导红荧光蛋白基因在所有的组织中非特异性表达.限制性酶切片段分析及部分DNA序列鉴定结果表明,所构建载体结构正确. 展开更多
关键词 载体构建 牛β-酪蛋白基因启动子 人白介素-3基因
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利用转基因植物生产口蹄疫可饲疫苗的研究进展与前景 被引量:1
13
作者 呼格吉乐图 吴应积 旭日干 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期767-772,共6页
从口蹄疫可饲疫苗的研究概况、生产技术要点、优缺点及需要改进的问题几方面阐述了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的研究前景。综述了口蹄疫可饲疫苗的研究进展,介绍了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的技术要点,包括在口蹄疫病毒... 从口蹄疫可饲疫苗的研究概况、生产技术要点、优缺点及需要改进的问题几方面阐述了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的研究前景。综述了口蹄疫可饲疫苗的研究进展,介绍了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的技术要点,包括在口蹄疫病毒遗传转化质粒载体系统中最常用的农杆菌介导法,提出了生产口蹄疫可饲疫苗需要改进的技术问题。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VPI基因 可饲疫苗 转基因植物
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三索线蛇与过树容蛇肝线粒体DNA的纯化与限制酶图谱
14
作者 罗进贤 陈守才 吴应积 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1990年第4期73-81,共9页
用Sepharose 4B凝胶柱过滤和NaCl离心法纯化了三索线蛇及过树容蛇肝线粒体DNA(mtDNA),它们的分子长度分别为17.75kb及19.70kb。分别用EcoRⅠ,XbaⅠ,BamHⅠ及BglⅡ等4种限制酶消化这两种mtDNA,结果表明:EcoRⅠ,XbaⅠ,BamHⅠ和BglⅡ在三... 用Sepharose 4B凝胶柱过滤和NaCl离心法纯化了三索线蛇及过树容蛇肝线粒体DNA(mtDNA),它们的分子长度分别为17.75kb及19.70kb。分别用EcoRⅠ,XbaⅠ,BamHⅠ及BglⅡ等4种限制酶消化这两种mtDNA,结果表明:EcoRⅠ,XbaⅠ,BamHⅠ和BglⅡ在三索线蛇肝mtDNA上分别有1,1,2及3个切点;在过树容蛇肝mtDNA上各有4,1,1和2个切点。根据mtDNA的单酶、双酶和部份酶解片段的分析,建立了三索线蛇及过树容蛇肝mtDNA的限制酶图谱。 展开更多
关键词 MTDNA 三索线蛇 过树容蛇 物理图
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绵羊tnp2基因的克隆及其在体外共培养系统中圆形精子细胞的转录分析 被引量:2
15
作者 白音巴图 罗奋华 +2 位作者 胡甜园 侯越 吴应积 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期262-266,共5页
过渡蛋白2基因(tnp2)是圆形精子细胞特异表达的基因。为了开展绵羊圆形精子细胞标记基因的研究,根据GenBank上已公布的牛的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR和分子克隆方法,克隆了蒙古绵羊tnp2基因cDNA部分编码区序列。DNA序列测定结果与牛... 过渡蛋白2基因(tnp2)是圆形精子细胞特异表达的基因。为了开展绵羊圆形精子细胞标记基因的研究,根据GenBank上已公布的牛的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR和分子克隆方法,克隆了蒙古绵羊tnp2基因cDNA部分编码区序列。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为95.3%。根据绵羊tnp2基因的cDNA序列设计引物,对共培养的四月龄绵羊睾丸生殖细胞进行RT-PCR鉴定。结果显示体外共培养的绵羊睾丸生殖细胞一直到第十周后仍有圆形精子细胞产生。绵羊tnp2基因的cDNA克隆和序列测定为进一步研究绵羊精子发生过程奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊 tnp2基因 克隆 序列分析 圆形精子细胞
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微滴培养技术的新应用 被引量:3
16
作者 霍龙 张岩 吴应积 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期59-62,共4页
微滴培养技术在卵母细胞培养和胚胎早期发育研究中有广泛的应用。近期研究发现这项技术又有新的应用范围。有科学家发现将该技术应用于胚胎干细胞可以实现高效传代,在精原干细胞培养和精子发生相关过程的研究方面也可取得很好效果,同时... 微滴培养技术在卵母细胞培养和胚胎早期发育研究中有广泛的应用。近期研究发现这项技术又有新的应用范围。有科学家发现将该技术应用于胚胎干细胞可以实现高效传代,在精原干细胞培养和精子发生相关过程的研究方面也可取得很好效果,同时,对早期人类胚胎干细胞的分离过程的监控和对精原干细胞生长过程的观察也相对容易。这些研究结果显示,微滴培养技术在这些新领域的研究与常规培养方法相比具有独特的优势。回顾微滴培养技术的主要发展过程,重点探讨微滴培养技术的最新应用及其优点。 展开更多
关键词 微滴培养技术 新应用 体外培养 胚胎干细胞 精原干细胞
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视黄酸在精子发生过程中引发减数分裂的信号通路 被引量:5
17
作者 王珂 吴应积 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期173-177,共5页
视黄酸(RA)是维生素A即视黄醇(ROH)的一类氧化代谢产物,在哺乳动物精子发生过程(如引发减数分裂)中起着重要作用。在哺乳动物睾丸内,RA结合视黄酸受体(RAR),在不同时期、不同类型细胞中调控相应靶基因的转录表达。在特定的时期,通过上... 视黄酸(RA)是维生素A即视黄醇(ROH)的一类氧化代谢产物,在哺乳动物精子发生过程(如引发减数分裂)中起着重要作用。在哺乳动物睾丸内,RA结合视黄酸受体(RAR),在不同时期、不同类型细胞中调控相应靶基因的转录表达。在特定的时期,通过上调促进减数分裂的基因表达并下调抑制减数分裂的基因表达,最终引发精子发生过程中的减数分裂。而哺乳动物精子发生的研究对生殖生物学、发育生物学、生殖工程等方面都具有广阔的应用前景,所以研究RA在哺乳动物精子发生过程中引发减数分裂的信号通路十分有意义。本文介绍了RA信号传递系统及其作用机制,并对RA在精子发生过程中引发减数分裂的信号通路进行了综述。 展开更多
关键词 视黄酸 精子发生 减数分裂 信号通路
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绵羊cdh1基因cDNA全编码区的克隆及序列分析 被引量:1
18
作者 胡甜园 白音巴图 +1 位作者 罗奋华 吴应积 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期96-101,共6页
在哺乳动物成体睾丸中,精子发生的过程开始于未分化的A型精原细胞的干细胞群。目前已有报道在小鼠未分化的A型精原细胞中特异性表达钙依赖性跨膜黏着蛋白基因(cdh1),但绵羊的cdh1基因全序列未见报道。为了更好地研究绵羊精原干细胞的特... 在哺乳动物成体睾丸中,精子发生的过程开始于未分化的A型精原细胞的干细胞群。目前已有报道在小鼠未分化的A型精原细胞中特异性表达钙依赖性跨膜黏着蛋白基因(cdh1),但绵羊的cdh1基因全序列未见报道。为了更好地研究绵羊精原干细胞的特性,根据已报道的其他物种的cdh1基因的cDNA保守区设计引物,从成年蒙古绵羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法克隆了蒙古绵羊cdh1基因cDNA全编码区。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为96.5%,说明该基因在进化上是高度保守的。这为制备绵羊CDH1的抗体奠定了基础,并且为绵羊精原干细胞的分子水平鉴定提供了研究条件。 展开更多
关键词 绵羊 CDH1基因 克隆 序列分析
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绵羊Gfrα1基因的部分cDNA克隆与抗原表位多肽的原核表达
19
作者 刘燕 罗奋华 +3 位作者 包佳婧 刘林洪 单飞彪 吴应积 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1377-1384,共8页
旨在克隆绵羊Gfrα1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs)。本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊Gfrα1基因的编码区大部分片段。结果,克隆得到的绵羊Gfrα1基因的大部分cDNA序列长1 312bp,包括1 311bp的开放阅读框(OR... 旨在克隆绵羊Gfrα1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs)。本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊Gfrα1基因的编码区大部分片段。结果,克隆得到的绵羊Gfrα1基因的大部分cDNA序列长1 312bp,包括1 311bp的开放阅读框(ORF),编码437个氨基酸,与牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相应核苷酸序列的同源性分别为98.5%、91.3%、91.0%、88.9%和88.0%。根据获得的cDNA序列,预测已知片段的抗原表位区,并将抗原表位区序列插入pET-44a(+)载体,经转化得到重组菌,经IPTG诱导表达,并通过亲和柱层析,纯化制备GFRα1抗原表位多肽。Western blot检测发现,经诱导表达的GFRα1抗原表位多肽约为18.2ku,与预测的大小一致。绵羊Gfrα1基因的克隆和表达研究,为进一步制作该基因的多克隆抗体奠定基础,为绵羊SSCs的分子水平鉴定及功能分析提供了研究条件。 展开更多
关键词 绵羊 Gfral基因 克隆 序列分析 原核表达
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绒山羊rsb66基因cDNA全编码区的克隆及序列分析
20
作者 卜祥龙 胡甜园 +2 位作者 罗奋华 王珂 吴应积 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期94-98,共5页
圆形精子细胞是雄性动物精子发生过程中主要的细胞之一。rsb66蛋白在生精细胞的细胞周期调控过程中发挥重要的作用。rsb66特异性地表达于圆形精子细胞中,但绒山羊rsb66基因全序列仍未见报道。为了更好地研究绒山羊圆形精子细胞的特性,... 圆形精子细胞是雄性动物精子发生过程中主要的细胞之一。rsb66蛋白在生精细胞的细胞周期调控过程中发挥重要的作用。rsb66特异性地表达于圆形精子细胞中,但绒山羊rsb66基因全序列仍未见报道。为了更好地研究绒山羊圆形精子细胞的特性,根据已报道的其他物种rsb66基因的cDNA保守区设计引物,从成年绒山羊睾丸中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆方法,克隆得到绒山羊rsb66基因cDNA全编码区。测序结果与牛相应核苷酸序列的同源性为97.0%,说明rsb66基因在进化上是高度保守的。 展开更多
关键词 绒山羊 圆形精子细胞 rsb66基因 克隆 序列分析
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