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大肠杆菌分泌表达烟酰胺单核苷酸合成途径酶及催化体系优化 被引量：2
1
作者 吴旻晖 梁书利 林影 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第3期75-86,共12页
烟酰胺单核苷酸(NMN)是具有重要医用价值的NAD+前体,通过信号肽PelB实现大肠杆菌BL21(DE3)分泌表达催化NMN合成的烟酰胺磷酸核糖转移酶(Sfnampt)、磷酸核糖焦磷酸激酶(Tkprs)和核糖激酶(Erbks)。对三酶的酶学特性分析显示,Sfnampt、Tkpr... 烟酰胺单核苷酸(NMN)是具有重要医用价值的NAD+前体,通过信号肽PelB实现大肠杆菌BL21(DE3)分泌表达催化NMN合成的烟酰胺磷酸核糖转移酶(Sfnampt)、磷酸核糖焦磷酸激酶(Tkprs)和核糖激酶(Erbks)。对三酶的酶学特性分析显示,Sfnampt、Tkprs和Erbks的最适反应温度分别为45、50和37℃,最适pH值分别为7.5、8.5和5.5。热稳定性分析发现,Sfnampt在35℃热稳定性良好而在40~55℃较差;Tkprs在40~60℃热稳定性良好;Erbks在25~40℃热稳定性良好而在45℃较差。酶动力学分析可知,Sfnampt、Tkprs和Erbks的Vmax分别为0.65μmol/(L·min)、2.37μmol/(L·min)、12.58μmol/(L·min),Km分别为2.87μmol/L、25.48μmol/L和74.13μmol/L,Tkprs、Erbks与已表征的Prs、Rbks相比底物亲和力好。将分泌表达的三酶用于催化合成NMN,温度37℃、pH值8.0为较优催化条件。底物ATP以及酶Sfnampt在反应体系中为关键因素,经底物和酶配比优化后,使用三酶经过7 h催化可获得5.50μmol/L的NMN。该研究在大肠杆菌系统成功实现了NMN合成途径酶的分泌表达,为NMN合成提供了新思路。 展开更多
关键词 烟酰胺单核苷酸 分泌表达 信号肽 大肠杆菌
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烟酰胺磷酸核糖转移酶在大肠杆菌中的表达及催化合成烟酰胺单核苷酸 被引量：6
2
作者 廖一波 吴旻晖 +1 位作者 梁书利 林影 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2021年第2期87-93,182,共8页
烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nicotinamide phosphate ribose transferase,Nampt)是生物酶法合成烟酰胺单核苷酸(Nicotinamide ribotide,NMN)中重要的酶,催化烟酰胺(Nicotinamide,NAM)和磷酸核糖焦磷酸(Phosphoribosyl pyrophosphate,PRPP)合... 烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nicotinamide phosphate ribose transferase,Nampt)是生物酶法合成烟酰胺单核苷酸(Nicotinamide ribotide,NMN)中重要的酶,催化烟酰胺(Nicotinamide,NAM)和磷酸核糖焦磷酸(Phosphoribosyl pyrophosphate,PRPP)合成NMN。本研究将来源Meiothermus ruber的Nampt在大肠杆菌系统进行胞内表达,表达产物经纯化后进行酶学性质分析,并进一步将其用于催化合成NMN。将重组菌株在16℃低温下进行摇瓶水平诱导21 h,收集发酵菌体并进行超声破碎,破碎后上清利用Ni-NTA螯合亲和层析的方法进行纯化,SDS-PAGE结果显示表达与纯化后的产物大小约55 ku,与预期的蛋白分子量相符。重组Nampt的最适反应温度为45℃,最适p H为6。酶动力学分析显示,该酶对底物NAM催化的Km、Vmax、kcat分别是0.39μmol/L、3.20μmol/(mg·min)、1.391/s。使用该酶催化生产NMN,通过反应中补加一次底物PRPP,反应10min产物NMN产量可达30 mg/L。本研究成功表达一个酶学性质和热稳定性优良的Nampt,并将其应用在单酶催化生产NMN时有较高的产量和生产效率,为生物酶法合成NMN的应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 烟酰胺磷酸核糖转移酶 烟酰胺单核苷酸 大肠杆菌
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基于Chernoff上界的多类问题特征选择优化迭代算法 被引量：1
3
作者 吴旻晖 宣国荣 柴佩琪 《计算机应用与软件》 CSCD 2000年第5期26-30,45,共6页
本文提出正态分布条件下面向不同分布的多类问题基于Chernoff上界的特征选择优化迭代算法。该算法由两重迭代组成:首先在设定的原始空间和特征空间Chernoff参数s条件下,通过解矩阵方程的迭代算法求得变换矩阵的最优解;然后,在变换矩阵... 本文提出正态分布条件下面向不同分布的多类问题基于Chernoff上界的特征选择优化迭代算法。该算法由两重迭代组成:首先在设定的原始空间和特征空间Chernoff参数s条件下,通过解矩阵方程的迭代算法求得变换矩阵的最优解;然后,在变换矩阵确定的特征空间中搜索最佳的参数s使错误概率上界最小;最后采用折半法修正设定的Chernoff参数s及其迭代步长。通过分析和实例可见基于Chernoff上界特征选择是面向不同分布的多类问题的最佳特征选择方法。 展开更多
关键词 Chernoff上界 特征选择 迭代算法 模式识别
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创新:重新定义设计
4
作者 吴旻晖 《微型机与应用》 北大核心 2008年第2期33-33,共1页
能获得《e制造》杂志的品牌大奖，我们感到非常高兴。 自1982年欧特克首次推出AutoCAD以来，世界设计领域开始了全新的绘图设计工作。如今，这一创新设计软件整整走过了二十五周年，其间，欧特克不断创新、完善AutoCAD，并将其译为18... 能获得《e制造》杂志的品牌大奖，我们感到非常高兴。 自1982年欧特克首次推出AutoCAD以来，世界设计领域开始了全新的绘图设计工作。如今，这一创新设计软件整整走过了二十五周年，其间，欧特克不断创新、完善AutoCAD，并将其译为18种文字的版本，为全球100多个国家800多万名专业设计人员广泛应用，彻底改变着世界的面貌。 展开更多
关键词 设计工作 创新设计 AUTOCAD 定义 设计人员 世界 绘图 软件
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数字版的“文艺复兴”
5
作者 吴旻晖 《微型机与应用》 北大核心 2007年第10期81-81,共1页
瑞典于今年5月30日在虚拟世界“第二人生”的三维虚拟社区设立了“大使馆”。尽管这个虚拟大使馆不能签发护照或签证，但却有一助于“第二人生”虚拟社区的“居民”获取有关瑞典的各种信息。瑞典外交大臣卡尔·比尔特于当天在位于... 瑞典于今年5月30日在虚拟世界“第二人生”的三维虚拟社区设立了“大使馆”。尽管这个虚拟大使馆不能签发护照或签证，但却有一助于“第二人生”虚拟社区的“居民”获取有关瑞典的各种信息。瑞典外交大臣卡尔·比尔特于当天在位于斯德哥尔摩的瑞典研究所参加了虚拟大使馆的落成剪彩仪式，与一般剪彩仪式不同。 展开更多
关键词 文艺复兴 数字版 虚拟社区 斯德哥尔摩 大使馆 虚拟世界 瑞典 研究所
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创新孕育着产业级的变化
6
作者 吴旻晖 《微型机与应用》 北大核心 2007年第8期94-94,共1页
制造业外包帮助中国在过去20年中实现了经济腾飞,下一个外包将是创意和设计的外包。另外,消费者越来越参与到产品的概念、创意和设计的全过程,如果能够很好地适应并利用这一潮流,将为中国制造业带来新的商业模式。
关键词 中国制造业 产业 创新 商业模式 外包 全过程 消费者 设计
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数字创新助力形成微笑曲线
7
作者 吴旻晖 《微型机与应用》 北大核心 2007年第6期107-107,共1页
2007年6月刊是《e制造》创刊5周年纪念刊,本刊记者深度采访了中国制造行业极具代表性的多位企业CIO和在中国制造行业最有建树的IT企业的领军人物,就信息化实践的回顾与展望、IT如何托举朝阳制造业等话题,完成了一次关于中国制造业与信... 2007年6月刊是《e制造》创刊5周年纪念刊,本刊记者深度采访了中国制造行业极具代表性的多位企业CIO和在中国制造行业最有建树的IT企业的领军人物,就信息化实践的回顾与展望、IT如何托举朝阳制造业等话题,完成了一次关于中国制造业与信息产业的高峰对局。 展开更多
关键词 曲线 制造业信息化 创新 良性发展 研发能力 服务能力 持续性 上升
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数字创新:正在发生的生产力革命
8
作者 吴旻晖 《杭州》 2008年第9期38-39,共2页
人们越来越多地对自己的生活进行设计,但有时候人们对产品功能性的要求是有限的,甚至对太多功能会感觉无力招架而产生排斥,但对美和个性的追求是无限的。所以,将要出现一场把人类社会推向更高文明阶段的创意革命和创新革命,即数字创新。
关键词 数字技术 创新革命 创新技术 全球化 文明阶段 产品功能 多功能 人类社会 设计 文艺复兴
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每个人都是设计师
9
作者 吴旻晖 《工业设计》 2007年第7期10-10,共1页
在今天,当创新的过程中正在发生一种趋势时,一种新商业模式的诞生也将成为可能。以前,消费者在最后阶段,在买东西的时候才能够选择。你到店里买手机,给你几款,你挑一款。但是这几款设计源自一小部分设计师的头脑,他们的水平比较高。
关键词 设计师 设计力量 消费者 再创新 开放式 全过程 商业模式 创意 水平比较 选择
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Bayes分类误差逼近算法
10
作者 吴旻晖 宣国荣 柴佩琪 《模式识别与人工智能》 EI CSCD 北大核心 1998年第2期169-175,共7页
本文提出在正态分布条件下面向不同分布多类问题的Bayes分类误差逼近算法.本算法是基于上界逼近的迭代算法.Bayes错误概率上界的描述通过对最小错误概率的积分域进行分割,对不同积分域采用统计不等式及Taylor展开等方法实现.构造的迭代... 本文提出在正态分布条件下面向不同分布多类问题的Bayes分类误差逼近算法.本算法是基于上界逼近的迭代算法.Bayes错误概率上界的描述通过对最小错误概率的积分域进行分割,对不同积分域采用统计不等式及Taylor展开等方法实现.构造的迭代算法搜索最佳的逼近参数,减小错误概率上界的近似误差,使得上界充分逼近真实的错误概率.该算法由三重迭代组成.通过分层搜索得到错误概率上界最小的参数组.通过分析和实例表明这一迭代算法使得上界型Bayes分类误差成为简便、实用的分析手段. 展开更多
关键词 Chernoff界限 错误概率上界 迭代算法 Bayes误差
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