人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物结构分析及活性研究 被引量：2

1

作者 吴洽庆 刘忠荣 +4 位作者 张思仲 马用信 雒蓬轶 王红霞 陈松森 《中国药学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第10期798-801,共4页

目的　确证人干细胞因子基因在大肠杆菌表达产物的正确性。方法　通过蛋白质杂交 ,氨基酸末端序列分析 ,质谱分析及动物体内生物活性的研究 ,对人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物———重组人干细胞因子 (rhSCF)分子进行了鉴定。结果　... 目的　确证人干细胞因子基因在大肠杆菌表达产物的正确性。方法　通过蛋白质杂交 ,氨基酸末端序列分析 ,质谱分析及动物体内生物活性的研究 ,对人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物———重组人干细胞因子 (rhSCF)分子进行了鉴定。结果　大肠杆菌表达产物rhSCFN端 15个氨基酸序列及C端 2个氨基酸序列与理论推测一致 ,产物的相对分子质量为 185 83.75 ,质量肽谱与理论序列的重叠率为 98.2 % ,动物试验亦表明当与粒细胞集落刺激因子 (G CSF)联用具有显著的外周血干(祖 )细胞动员作用。结论　人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物与理论推测完全一致 ,为其中试及临床试验奠定了基础。 展开更多

关键词 人干细胞因子 基因表达 大肠杆菌 鉴定 粒细胞集落刺激因子

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人受精促进肽受体TCP11a蛋白在精细胞和睾丸组织中的定位分布 被引量：2

2

作者 吴洽庆 马用信 +4 位作者 张思仲 于源 孙岩 李德华 关向前 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第2期28-30,共3页

利用PCR扩增人TCP11a基因，将其插入pBV220载体，首次成功在大肠杆菌DHSα中表达，表达产物以包涵体形式存在。通过制备人TGP11a抗体，对人TCP11蛋白在人精细胞和鼠睾丸组织中的分布状态进行了研究，结果证实了人TCP11蛋白在精细胞上的... 利用PCR扩增人TCP11a基因，将其插入pBV220载体，首次成功在大肠杆菌DHSα中表达，表达产物以包涵体形式存在。通过制备人TGP11a抗体，对人TCP11蛋白在人精细胞和鼠睾丸组织中的分布状态进行了研究，结果证实了人TCP11蛋白在精细胞上的分布与鼠TCP11在鼠精子上的分布基本一致；鼠睾丸组织切片显示TCP11蛋白出现在精细胞的表面和细胞质中，证实了我们前期工作的结果。这些结果为我们进一步了解人TCP11基因在人精子发生和发育中的作用提供了信息，也为研究人TCP11蛋白和研制男性避孕疫苗工作打下了基础。 展开更多

关键词 肽受体 TCP11a蛋白 精细胞 睾丸组织 定位分布 表达 抗体 精子

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红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质 被引量：17

3

作者 常丽青 吴传芳 +5 位作者 吕鸿周 刘超 顾莹 陈放 吴洽庆 鲍锦库 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期164-167,共4页

石蒜科植物红花石蒜(Lycoris radiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L.radiata agglutinin,LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,Sephacry... 石蒜科植物红花石蒜(Lycoris radiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L.radiata agglutinin,LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,Sephacryl S-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0.95μg/mL和1.9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低Ⅱ型人类单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50)=5～10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性. 展开更多

关键词 石蒜凝集素(LRA) 纯化 凝集活性 促淋巴细胞有丝分裂活性 抗病毒活性

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棉花凝集素的纯化及性质研究 被引量：9

4

作者 曾仲奎 吴洽庆 鲍锦库 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1995年第3期204-211,共8页

抗枯萎、抗黄萎病的棉种的浸取液，经硫酸铵分级，纤维素柱、亲和层析后，再经分子筛过滤，获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ或ＨＰＬＣ柱上均呈现单一蛋白带的棉花凝集素。该凝集素只凝集兔红细胞，对人Ａ、Ｂ或Ｏ型血细胞均不凝集，... 抗枯萎、抗黄萎病的棉种的浸取液，经硫酸铵分级，纤维素柱、亲和层析后，再经分子筛过滤，获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ或ＨＰＬＣ柱上均呈现单一蛋白带的棉花凝集素。该凝集素只凝集兔红细胞，对人Ａ、Ｂ或Ｏ型血细胞均不凝集，其凝集活性可被半乳糖或猪甲状腺球蛋白等所抑制。棉花凝集素在６５℃加热５ ｍ ｉｎ，即丧失全部凝集活性；它的凝集活性强烈地依赖于Ｃａ２＋ ；Ｍｎ２＋ 对活性也有促进作用，Ｍｇ２＋ 则无作用。经凝胶过滤或ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，凝集素的分子量为６３０００，Ｎ－末端氨基酸为Ｖａｌ。凝集素含有１．５％ 的中性糖，是一种促有丝分裂原，细胞转化率为５０．３％ 。 展开更多

关键词 棉花 凝集素 糖蛋白 提纯

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氨基酸侧链基团的特异性化学修饰对玉帘凝集素凝血活性和促淋巴细胞有丝分裂活性的影响 被引量：1

5

作者 吕辉 龚萌 +4 位作者 顾莹 曾仲奎 陈放 吴洽庆 鲍锦库 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2003年第3期243-245,共3页

石蒜科植物玉帘 (ZephyranthescandidaHerb)的球茎 ,经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE -Sepharose和SephacrylS - 10 0分子筛层析 ,分离纯化出玉帘凝集素 (Z .candidaaggulutination ,ZCA) ,在SDS -PAGE显示单一蛋白带 ,经分子筛... 石蒜科植物玉帘 (ZephyranthescandidaHerb)的球茎 ,经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE -Sepharose和SephacrylS - 10 0分子筛层析 ,分离纯化出玉帘凝集素 (Z .candidaaggulutination ,ZCA) ,在SDS -PAGE显示单一蛋白带 ,经分子筛层析测得相对分子量 (Mr)约为 4 8× 10 3 .采用不同的化学修饰试剂对玉帘凝集素中的不同氨基酸侧链基团进行修饰 .结果表明 :Arg残基的修饰引起兔红细胞凝集活性下降 73% ,Trp残基的修饰引起兔红细胞凝集活性下降 36 % ;Ser/Thr残基的修饰导致促淋巴细胞有丝分裂活性下降 2 9.3% ,细胞分裂比率下降 7.2 % .图 3表 2参 展开更多

关键词 化学修饰 玉帘凝集素 凝血活性 促淋巴细胞有丝分裂活性 糖结合蛋白

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植物凝集素在植物体内的生理作用 被引量：5

6

作者 曾仲奎 吴洽庆 邓忠 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 1993年第3期69-76,共8页

现有研究表明,植物种子中的凝集素是植物体内的储存蛋白;扁豆和稻胚凝集素对胚胎的分裂和分化有促进作用;在豆科植物和根瘤菌之间的共生作用中,凝集素起着高度专一的识别作用;麦胚凝集素在种胚萌发时,起着抗真菌的作用;体外实验也证明... 现有研究表明,植物种子中的凝集素是植物体内的储存蛋白;扁豆和稻胚凝集素对胚胎的分裂和分化有促进作用;在豆科植物和根瘤菌之间的共生作用中,凝集素起着高度专一的识别作用;麦胚凝集素在种胚萌发时,起着抗真菌的作用;体外实验也证明凝集素对危害玉米的主要害虫的发育有阻碍作用;还发现植物凝集素具有酶的活性和酶抑制剂的作用,从而调节植物体的生理活动。 展开更多

关键词 植物凝集素 凝集素 生理作用

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人受精促进肽受体(TCPllc)基因的克隆、表达及选择性剪接

7

作者 马用信 张思仲 +3 位作者 吴洽庆 孙岩 邱为民 许文明 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期122-128,共7页

目的 分离、克隆人受精促进肽受体TCPll基因1个新的转录本TCPllc的全长cDNA,研究其表达的阶段性、组织特异性及TCPll基因3种转录本的剪接方式。方法 运用BLAST方法获得与TCPlla同源的ESTs,以逆转录的人睾丸cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR... 目的 分离、克隆人受精促进肽受体TCPll基因1个新的转录本TCPllc的全长cDNA,研究其表达的阶段性、组织特异性及TCPll基因3种转录本的剪接方式。方法 运用BLAST方法获得与TCPlla同源的ESTs,以逆转录的人睾丸cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR扩增片段克隆入pGEM-T easy载体并测序;采用BLAST、ClustalW及RT-PCR方法分析各转录本的基因组结构及剪接方式;RT-PCR方法分析其组织表达的特异性和阶段性。结果 获得1个新的全长cDNA,它编码440个氨基酸的蛋白质,与TCPlla、b相比,在基因组的5′-端存在复杂的外显子剪接现象。RT-PCR结果显示该转录本在正常睾丸中表达,而其他组织、无精症患者及胎儿睾丸组织中未见该基因表达。结论 从人睾丸组织中分离到人受精促进肽受体TCPll基因1个新的转录本TCPllc, 结合mTcp-11的功能提示,TCPll基因a、b、c这3种转录本对精子发生和人受精过程可能起重要作用。 展开更多

关键词 受精促进肽受体基因 克隆 表达 外显子剪接

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分离纯化猪甲状腺球蛋白的简便方法

8

作者 曾仲奎 吴洽庆 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1993年第3期380-383,共4页

应用硫酸铵分级沉淀,经两次Scphadcx G-100凝胶过滤,从猪甲腺中获得较纯的甲状腺球蛋白。纯化的甲状腺球蛋白经生物活性测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果与标准的猪甲状腺球蛋白性质相一致。

关键词 甲状腺球蛋白 糖蛋白 蛋白 纯化

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荆豆(Ulex europaeus L.)凝集素Ⅰ的细胞表面受体研究

9

作者 曾仲奎 吴洽庆 曾光耀 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1990年第3期336-342,共7页

从Ulex europaeus L.种子中纯化的荆豆凝集素I(UEH I),不仅专一地凝集人O型血细胞,也能凝集牛精细胞,表明这些细胞表面存在有UEH I的受体.应用经FITC或^(125)I标记的UEH I与牛精细胞结合,研究受体在精细胞表面的分布;Glc、Con A、PHA和... 从Ulex europaeus L.种子中纯化的荆豆凝集素I(UEH I),不仅专一地凝集人O型血细胞,也能凝集牛精细胞,表明这些细胞表面存在有UEH I的受体.应用经FITC或^(125)I标记的UEH I与牛精细胞结合,研究受体在精细胞表面的分布;Glc、Con A、PHA和Fuc的浓度对^(125)I-UEH I与O型血细胞结合的影响;O型血细胞和牛精细胞与^(125)I-UEH I的饱和实验,获得饱和结合曲线或竞争性结合曲线,得出各自的Scatchard图,分别计算出O型血细胞和牛精细胞表面的UEH I受体的数目。 展开更多

关键词 牛精细胞 荆豆 凝集素 受体

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葡激酶的研究进展

10

作者 李伯刚 吴洽庆 柴斌威 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 1997年第2期76-80,共5页

本文综述了葡激酶的生化特性、溶栓特性、免疫原性和临床应用方面的研究进展。

关键词 葡激酶 生化特性 溶栓特性 临床应用

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牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定 被引量：5

11

作者 李德华 苟兴华 +4 位作者 胡海洋 徐琦 刘忠荣 吴洽庆 余晓东 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期819-823,共5页

肠激酶(enterokinase,EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线... 肠激酶(enterokinase,EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastorisSMD1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL(recombinant enterokinase light chain,rEKL)纯化、N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、N端15个氨基酸序列与文献报道一致. 展开更多

关键词 肠激酶(enterokinase EK) 甲醇酵母(Pichia pastoris) 高密度发酵

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“一锅双酶”法制备L-天冬氨酸的工艺条件优化 被引量：3

12

作者 刘祥涛 张瑞 +4 位作者 冯进辉 仪宏 吴洽庆 朱敦明 马延和 《生物加工过程》 CAS 2017年第4期45-50,共6页

L-天冬氨酸作为一种大宗氨基酸产品,在医药、食品和化工等方面有着广泛的用途。笔者所在实验室成员前期已经构建1株含有顺丁烯二酸异构酶与L-天冬氨酸氨基裂解酶、且可直接将顺丁烯二酸铵转化成L-天冬氨酸铵的工程菌,对其培养基、发酵... L-天冬氨酸作为一种大宗氨基酸产品,在医药、食品和化工等方面有着广泛的用途。笔者所在实验室成员前期已经构建1株含有顺丁烯二酸异构酶与L-天冬氨酸氨基裂解酶、且可直接将顺丁烯二酸铵转化成L-天冬氨酸铵的工程菌,对其培养基、发酵条件以及制备条件进行优化。得到的优化发酵培养基:蛋白胨20 g/L,酵母浸粉5g/L,Na Cl 1.45 g/L,富马酸10 g/L,NH4NO38 g/L,乳糖6 g/L,氨水调节pH至7.5。最佳发酵培养条件:发酵罐的转速150 r/min,通气量1.5 L/min,最佳的接种量0.5%(体积分数)。通过发酵罐对优化后的培养基进行扩大培养,得出1 L发酵液可以转化1 kg顺丁烯二酸铵,优化后相同培养体积的菌体转化的底物量提高了1倍。为实现"一锅双酶"法制备L-天冬氨酸工艺的规模放大奠定了基础。 展开更多

关键词 “一锅双酶”法 顺丁烯二酸 L-天冬氨酸 发酵工艺优化

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来自Staphylococcus aureus N315的2-脱氧-D-核糖5-磷酸醛缩酶的工程菌构建、表达纯化与性质鉴定 被引量：1

13

作者 韩磊 陈曦 +2 位作者 冯进辉 吴洽庆 朱敦明 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第1期47-53,共7页

利用基因挖掘在数据库中发现一种来自Staphylococcus aureus N315的潜在DERA(SaDERA),将其基因密码子优化后实现了在大肠杆菌中的表达,重组酶经纯化后研究了其催化性质。结果表明:构建的工程菌具有较高的可溶表达量(占总蛋白的70%),通... 利用基因挖掘在数据库中发现一种来自Staphylococcus aureus N315的潜在DERA(SaDERA),将其基因密码子优化后实现了在大肠杆菌中的表达,重组酶经纯化后研究了其催化性质。结果表明:构建的工程菌具有较高的可溶表达量(占总蛋白的70%),通过简单的一步纯化即可得到电泳纯的酶;SaDERA是一种同源二聚体的酶(5.7×104),其最适反应条件是pH 7.7和45℃;SaDERA具有良好的碱耐受性,在pH 11.0、25℃的条件下温浴24 h后仍有93%的残余活力;SaDERA具有良好的乙醛耐受性,在0.3 mol/L乙醛浓度、25℃下,30 min内保持了70%以上的残余活力;乙醛连续自缩合产物被纯化并鉴定,所得产品为两次缩合产物。 展开更多

关键词 2-脱氧-d-核糖5-磷酸醛缩酶 基因挖掘 金黄色葡萄球菌

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米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40中烯酮/烯酯还原酶的异源表达及性质分析

14

作者 张海灵 高秀珍 +5 位作者 陈曦 任杰 冯进辉 张同存 吴洽庆 朱敦明 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第1期41-46,共6页

以米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组DNA为模版,通过PCR扩增其烯酮烯酯还原酶(AspER)基因(asper)后连接到表达载体pET32a(+)上,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶形式表达。通过Ni-NTA亲和色谱层析纯化后,蛋白纯度提高1.9倍,回收率为60.... 以米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组DNA为模版,通过PCR扩增其烯酮烯酯还原酶(AspER)基因(asper)后连接到表达载体pET32a(+)上,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶形式表达。通过Ni-NTA亲和色谱层析纯化后,蛋白纯度提高1.9倍,回收率为60.62%。根据分子筛凝胶层析结果推算,AspER以二聚体形式存在。性质分析表明此酶为依赖于NADPH的氧化还原酶,最适pH为7.0～8.0,最适温度为40℃。对2-环己烯酮Km和kcat值分别为(2.45±0.36)mmol/L和(4.4±0.4)×103s-1。底物谱分析发现AspER对马来酰亚胺及其衍生物有较高的活性,其中对2-甲基马来酰亚胺的转化率和e.e.值均高于99%。 展开更多

关键词 不对称还原 烯酮 烯酯还原酶 古老黄色酶

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重组固氮菌腈水合酶催化3-(4-氯苯基)戊二腈的选择性水解

15

作者 李倩 任杰 +2 位作者 冯进辉 吴洽庆 朱敦明 《生物加工过程》 CAS CSCD 2013年第1期23-28,共6页

通过基因数据挖掘方法(genome mining)获得了来源于固氮菌Herbaspirillum seropedicae SmR1中的腈水合酶基因hsn1。构建了hsn1/pETDuet-1/BL21的大肠杆菌共表达重组菌,经IPTG诱导获得了具有良好催化能力的Co2+依赖型腈水合酶HSN1。利用... 通过基因数据挖掘方法(genome mining)获得了来源于固氮菌Herbaspirillum seropedicae SmR1中的腈水合酶基因hsn1。构建了hsn1/pETDuet-1/BL21的大肠杆菌共表达重组菌,经IPTG诱导获得了具有良好催化能力的Co2+依赖型腈水合酶HSN1。利用全细胞反应研究了HSN1的底物谱,发现HSN1对底物3-(4-氯苯基)戊二腈有良好的区域选择性及一定的对映选择性,它可以选择性地水解1个腈基得到3-(4-氯苯基)-4-氰基丁酰胺,该化合物可通过一步化学反应合成巴氯芬。 展开更多

关键词 3-(4-氯苯基)戊二腈 水合作用 腈水合酶

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人载脂蛋白A5基因的克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备

16

作者 任东升 官家发 +2 位作者 李德华 梁波 吴洽庆 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期95-99,共5页

人载脂蛋白A5(ApoA5)是血浆三酰甘油水平的重要决定因素之一,与心血管疾病密切相关,因此获得高纯度的载脂蛋白A5及其抗体具有重要的意义.本文利用PCR技术,从人肝癌细胞系7721的cDNA中扩增出ApoA5基因,并克隆到pThioHisD载体中导入大肠杆... 人载脂蛋白A5(ApoA5)是血浆三酰甘油水平的重要决定因素之一,与心血管疾病密切相关,因此获得高纯度的载脂蛋白A5及其抗体具有重要的意义.本文利用PCR技术,从人肝癌细胞系7721的cDNA中扩增出ApoA5基因,并克隆到pThioHisD载体中导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达.经优化条件,发酵得到高效表达的融合蛋白.利用融合蛋白上的一段组氨酸序列,用镍离子亲和柱进行纯化,得到纯度大于95%的融合蛋白.使用纯化蛋白免疫新西兰大耳兔,得到多克隆抗体,Western印迹结果显示此多克隆抗体能与ApoA5特异性结合. 展开更多

关键词 载脂蛋白A5 原核表达 发酵 纯化 抗体

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岩豆凝集素分子中色氨酸残基的化学修饰及其荧光光谱研究 被引量：5

17

作者 牟航 周红 +3 位作者 鲍锦库 于源 张仁怀 吴洽庆 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期317-320,共4页

从岩豆 (MillettiadielsianaHarmsexDiels)种子中分离纯化得到的岩豆凝集素 (简称MDL)经链霉蛋白酶水解 ,测得其分子中含有 4个色氨酸 (Trp)残基 .用N 溴代丁二酰亚胺 (NBS)对MDL分子中的色氨酸残基进行化学修饰 ,在无变性剂存在下有 3.... 从岩豆 (MillettiadielsianaHarmsexDiels)种子中分离纯化得到的岩豆凝集素 (简称MDL)经链霉蛋白酶水解 ,测得其分子中含有 4个色氨酸 (Trp)残基 .用N 溴代丁二酰亚胺 (NBS)对MDL分子中的色氨酸残基进行化学修饰 ,在无变性剂存在下有 3.6个Trp残基被修饰 ,在变性条件下可修饰 3.8个Trp残基 .修饰后MDL活性均丧失 ,且甘露糖对MDL活性具有保护作用 .表明Trp残基是MDL凝集活性所必需的基团 ,且位于MDL糖结合部位 .同时采用荧光光谱实验发现 ,随着NBS的加入 ,MDL荧光强度不断减弱 ,但发射谱形状和最大发射波长无大的变化 ,提示Trp残基可能位于MDL分子表面的疏水区内 .图 3参 展开更多

关键词 岩豆 凝集素 色氨酸残基 化学修饰 荧光光谱

全文增补中

发酵中药——拓展中药新药研究开发的新空间 被引量：42

18

作者 李羿 刘忠荣 +2 位作者 吴洽庆 姜远平 万德光 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2004年第2期179-181,184,共4页

发酵中药是现代生物技术和中药研究的完美结合 ,依靠微生物发酵来生产发酵中药近来正逐渐成为研究的热点 ,并为中药的发展开辟了新空间。本文综述了发酵中药的应用历史及现况、作用机理、优势特色和发展方向。

关键词 发酵中药 生物技术 微生物 中药 作用机理

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穿山龙液泡H^+-ATPase c亚基基因片段的克隆 被引量：2

19

作者 何明雄 苟兴华 +5 位作者 张义正 李灵 吴洽庆 陈守春 元乔 刘忠荣 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1258-1262,共5页

利用抑制消减杂交(SSH)和SMART技术,构建了3年生和1年生穿山龙(Dioscoreanipponica)根组织mRNA群体间正向差减cDNA文库.从34个随机测序的cDNA克隆中,发现了1个编码液泡H+-ATPase(V-H+-ATPase)c亚基的克隆,并命名为DnVHAc1(Acces-sion No... 利用抑制消减杂交(SSH)和SMART技术,构建了3年生和1年生穿山龙(Dioscoreanipponica)根组织mRNA群体间正向差减cDNA文库.从34个随机测序的cDNA克隆中,发现了1个编码液泡H+-ATPase(V-H+-ATPase)c亚基的克隆,并命名为DnVHAc1(Acces-sion No:DN792564).序列同源性分析表明,其cDNA序列长486bp,3’端具有PolyA结构,其编码的氨基酸序列(115个氨基酸残基)也与多种植物的液泡H+-ATPase c亚基(16kDa prote-olipids)具有较高同源性,具有3个跨膜疏水结构域,结构域Ⅲ为功能保守的区域,有dicyclo-hexylcarbodimide(DCCD)结合位点,Glu-92在调节液泡H+-ATPase具有重要作用.该研究结果为克隆其全长基因和进一步研究其在薯蓣皂甙次生代谢生物合成中的功能提供了重要的实验基础. 展开更多

关键词 穿山龙 抑制消减杂交 液泡H^+-ATPase C亚基 CDNA克隆 同源性分析

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重组人白细胞介素-11工程菌的发酵条件研究 被引量：2

20

作者 梁波 常峰 +4 位作者 徐琦 吴洽庆 刘忠荣 胡承 王忠彦 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期38-42,共5页

为了探讨发酵条件对大肠杆菌表达人白细胞介素-11融合蛋白的影响，利用正交实验设计，对工程菌的生长条件和人白细胞介素-11融合蛋白表达进行优化。在摇瓶中研究了培养基中的葡萄糖、蛋白胨、酵母抽提物的浓度、pH及摇床转速、装液量、... 为了探讨发酵条件对大肠杆菌表达人白细胞介素-11融合蛋白的影响，利用正交实验设计，对工程菌的生长条件和人白细胞介素-11融合蛋白表达进行优化。在摇瓶中研究了培养基中的葡萄糖、蛋白胨、酵母抽提物的浓度、pH及摇床转速、装液量、接种量等。确定了工程菌生长及表达的培养基和培养条件：葡萄糖10g/L，蛋白胨20g/L，酵母抽提物10g/L，pH7．5，接种量10％，装液量10％。摇床转速220r／min及诱导时间为4～5h。然后在BiofloⅢ-5L发酵罐中以优化的发酵条件进行了3批实验，结果表明：工程菌量达到55g／L（DCW），重组人白细胞介素-11融合蛋白表达量为33％左右，为进行中试研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素-11 发酵条件 正交实验设计

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