日粮纤维水平对梅山猪血液和肠道免疫指标的影响及其机理初步解析 被引量：2

1

作者 李平会 蒲广 +6 位作者 王中宇 周五朵 牛培培 吴承武 侯黎明 黄瑞华 李平华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4260-4277,共18页

本研究以大白猪为对照,旨在分析不同水平麸皮替代基础日粮对梅山猪血液常规和血液生化、血清免疫球蛋白及大肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)等免疫指标的影响,并进一步从宿主肠道基因和微生物角度初步探究日粮纤维影响梅山猪免疫指标的... 本研究以大白猪为对照,旨在分析不同水平麸皮替代基础日粮对梅山猪血液常规和血液生化、血清免疫球蛋白及大肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)等免疫指标的影响,并进一步从宿主肠道基因和微生物角度初步探究日粮纤维影响梅山猪免疫指标的机理。试验选取梅山猪(初始体重(67.08±1.53)kg)、与梅山猪相同生理阶段的大白猪(初始体重(81.04±1.64)kg)各28头,随机各分成4个处理组,每组7个重复,每个重复1头猪。预试期7 d,试验猪只自由采食基础日粮;正试期28 d,分别饲喂基础日粮(Basal),以及7%、10.5%和14%麸皮替代基础日粮(7%WBR、10.5%WBR和14%WBR)的试验日粮。正试期所有猪自由采食和饮水,试验结束屠宰全部试验猪,采集血液样品进行血常规、血生化和血清免疫球蛋白指标测定;采集盲肠和结肠黏膜样品进行SIgA测定以及结肠黏膜转录组测序;采集结肠内容物进行宏基因组测序。结果表明:1)随日粮麸皮替代水平的升高,梅山猪的嗜酸性粒细胞数、嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞数呈线性降低(P<0.05)。14%WBR组梅山猪的血清球蛋白水平显著高于大白猪(P<0.05);2)随日粮麸皮替代水平的升高,梅山猪的血清免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)呈线性升高(P<0.01),大白猪的血清IgM呈线性升高(P<0.01),且14%WBR组梅山猪的血清IgG的浓度显著高于大白猪(P<0.01)。另外,与Basal组相比,14%WBR组梅山猪的结肠黏膜SIgA浓度极显著升高(P<0.01),而大白猪没有显著变化;3)为初步解析14%WBR组梅山猪的结肠黏膜SIgA浓度升高的机理,一方面选择Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠黏膜进行转录组测序,共鉴别到38个差异表达基因,GO富集到的功能条目和KEGG富集到的信号通路主要与免疫系统相关,调控肠道SIgA产生的基因CD4分子(CD4)和CC趋化因子受体9(CCR9)的表达量在14%WBR组显著提高(P<0.05)。另一方面选择Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠内容物进行宏基因组测序,LEFSe分析发现14%WBR组显著富集到2个科水平微生物、1个属水平微生物和5个种水平微生物。相关性分析揭示,种水平差异微生物与调控肠道SIgA产生的宿主黏膜基因CD4和CCR9不存在直接互作关系(P>0.05),但Sutterella sp.、Clostridium sp.CAG:138、Clostridium sp.CAG:762和Nitrospira sp.与血清IgG呈显著正相关,Clostridium sp.CAG:138和Nitrospira sp.与结肠黏膜SIgA呈显著正相关。对Basal组和14%WBR组梅山猪的结肠微生物进行KEGG功能注释,发现14%WBR组IgA产生的肠道免疫网络功能通路(intestinal immune network for IgA production)的相对丰度显著高于Basal组(P<0.05)。综上可知,用麸皮替代部分基础日粮可以降低梅山猪机体的炎症水平,增强梅山猪的体液免疫和促进结肠健康,并且14%麸皮替代基础日粮对梅山猪的有益作用优于大白猪。同时本文还发现日粮纤维对梅山猪结肠黏膜SIgA的影响可能是通过上调结肠黏膜CD4和CCR9基因的表达和影响肠道微生物的组成,从而增强IgA产生的肠道免疫网络功能通路,改善肠道屏障功能,促进机体健康。 展开更多

关键词 麸皮 猪 免疫 微生物

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番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭肠黏膜组织结构及肠道免疫细胞的影响 被引量：8

2

作者 吴异健 姜慧慧 +7 位作者 黄丽娜 朱二鹏 周五朵 王全溪 吴晓平 李健 吴宝成 黄一帆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期431-437,458,共8页

为探究番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染对雏番鸭肠黏膜免疫的影响,本研究将100只1日龄MDRV抗原抗体阴性雏番鸭随机分为二组:空白对照组(NCG)和MDRV同居感染组(CIG),利用人工感染发病的20只番鸭对GIC组番鸭进行同居感染。NCG和CIG组番鸭分别于... 为探究番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染对雏番鸭肠黏膜免疫的影响,本研究将100只1日龄MDRV抗原抗体阴性雏番鸭随机分为二组:空白对照组(NCG)和MDRV同居感染组(CIG),利用人工感染发病的20只番鸭对GIC组番鸭进行同居感染。NCG和CIG组番鸭分别于后者同居感染1 d、3 d、6 d、10 d、15 d、21 d后采集其十二指肠、空肠、回肠样品进行肠道形态结构(绒毛高度、宽度、V/C值、肠壁厚度、绒毛表面积)的观察及免疫相关细胞(上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞)的检测。结果显示:与NCG相比,CIG番鸭肠道绒毛高度下降、宽度变窄,排列稀疏,V/C值降低,绒毛表面积下降,肠壁厚度变薄,上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞数量下降,尤其是同居感染6 d以后其各项检查指标均与NCG差异极显著(p<0.01)。表明MDRV可导致肠道消化吸收功能障碍和黏膜免疫抑制。该研究结果进一步充实MDRV感染的致病机制。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 肠道形态结构 黏膜免疫相关细胞 肠黏膜屏障 肠黏膜免疫

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日粮纤维水平对不同猪种肠道物理屏障和微生物的影响 被引量：10

3

作者 王欢 李平华 +7 位作者 牛清 杜陶然 蒲广 范丽娟 牛培培 吴承武 周五朵 黄瑞华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期639-647,共9页

为研究日粮纤维水平对不同品种猪肠道形态、通透性和微生物的影响,按照2×4双因子设计,选择体质量约40 kg的健康二花脸猪和与二花脸猪相同生理阶段约65 kg的大白猪各24头随机分为4个处理组,分别饲喂基础日粮和7%、14%、21%麸皮替代... 为研究日粮纤维水平对不同品种猪肠道形态、通透性和微生物的影响,按照2×4双因子设计,选择体质量约40 kg的健康二花脸猪和与二花脸猪相同生理阶段约65 kg的大白猪各24头随机分为4个处理组,分别饲喂基础日粮和7%、14%、21%麸皮替代基础日粮,每组6个重复,使用奥饲本全自动生产性能测定系统进行饲喂,每个重复1头猪。正试期28 d,试验结束时采集血液样品,分离血清用于血清内毒素、二胺氧化酶(DAO)和D-乳酸含量测定;屠宰采集盲肠和结肠中段样品进行形态学观察,采集空肠和结肠黏膜进行微生物16S rRNA基因拷贝数测定。结果表明:猪品种对血清内毒素含量、D-乳酸含量、空肠双歧杆菌丰度、盲肠隐窝深度、盲肠肠壁厚度、结肠肠壁厚度、结肠肌层厚度、结肠大肠杆菌和结肠乳酸杆菌丰度有显著影响(P<0.05)。日粮麸皮水平对血清DAO含量、D-乳酸含量和结肠大肠杆菌丰度有显著影响(P<0.05)。二花脸猪,与基础日粮对照相比,7%和14%麸皮替代日粮处理的D-乳酸含量显著升高(P<0.05),21%麸皮替代日粮处理的DAO含量显著升高(P<0.05),7%麸皮替代日粮处理的盲肠肌层厚度显著升高(P<0.05),21%麸皮替代日粮处理的盲肠肠壁厚度显著降低(P<0.05),7%麸皮替代日粮处理的结肠乳酸杆菌丰度显著升高(P<0.05),14%麸皮替代日粮处理的结肠大肠杆菌丰度显著降低(P<0.05)。大白猪,与基础日粮对照相比,14%麸皮替代日粮处理的DAO含量显著升高(P<0.05),14%和21%麸皮替代日粮处理的盲肠肠壁厚度显著增加(P<0.05),7%麸皮替代日粮处理的空肠双歧杆菌丰度显著降低(P<0.05),14%麸皮替代日粮处理的空肠双歧杆菌和结肠乳酸杆菌丰度显著降低(P<0.05)。综上所述,大白猪和二花脸猪在大肠形态、肠道通透性、空肠双歧杆菌丰度、结肠大肠杆菌丰度和结肠乳酸杆菌丰度等方面存在差异,日粮麸皮水平影响结肠大肠杆菌丰度。7%麸皮替代水平增大二花脸猪肠道通透性,但增加盲肠肌层厚度以适应纤维的消化,并增加结肠乳酸杆菌丰度促进肠道健康。14%麸皮替代水平会导致大白猪肠道通透性增大,盲肠肠壁增厚,空肠双歧杆菌和结肠乳酸杆菌丰度降低。 展开更多

关键词 二花脸猪 大白猪 日粮纤维 麸皮 肠道通透性 肠道形态 肠道微生物

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MDRV P10基因的克隆、分析及蛋白质结构预测 被引量：2

4

作者 蔡一龙 庄育彬 +3 位作者 周五朵 王全溪 邱晓东 吴宝成 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第6期606-611,共6页

参考Gen Bank中番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)S4基因序列,设计合成一对非结构蛋白P10基因的特异性引物,以MDRV-YB株病毒RNA为模板进行RT-PCR扩增,并将目的基因克隆到PGEM-T载体,提取质粒测序.对测序结果进行遗传进化树分... 参考Gen Bank中番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)S4基因序列,设计合成一对非结构蛋白P10基因的特异性引物,以MDRV-YB株病毒RNA为模板进行RT-PCR扩增,并将目的基因克隆到PGEM-T载体,提取质粒测序.对测序结果进行遗传进化树分析和生物信息学软件预测、分析蛋白质结构和功能.结果表明,MDRV-YB株病毒的P10蛋白基因开放阅读框(ORF)全长为288 bp,编码95个氨基酸.核苷酸比对结果表明,与标准株法国MDRV-89026株同源性为95%,而与ARV-S1133株氨基酸同源性仅为21.9%.运用Prot Param tool软件对番鸭呼肠孤病毒的P10蛋白分析结果表明,该蛋白分子质量为10.7 ku,不稳定系数为52.37,不存在信号肽和糖基化位点,有4个丝氨酸和1个络氨酸的磷酸化位点.此外,MDRV的P10蛋白为疏水性蛋白,但不存在跨膜区,这与禽呼肠孤病毒(Avian reo virus,ARV)的P10蛋白具有较大差异.二级结构分析表明,MDRV-YB株的P10蛋白与ARV-S1133株P10蛋白相比,α-螺旋和无规则卷曲减少,β-折叠则增加.因此,MDRV-YB株的非结构蛋白P10不仅在基因水平上发生了较大的变异,而且在蛋白质性质与结构上也发生了较大的变异,其与该病毒毒力的增强可能存在一定的关系. 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 P10 基因克隆 蛋白质预测与分析

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鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1

5

作者 袁晓琴 陈仕怡 +5 位作者 刘梦茜 李春燕 许丽惠 周五朵 吴异健 王全溪 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期151-156,共6页

为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG... 为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。 展开更多

关键词 鸡真核生物翻译起始因子2α 原核表达 多克隆抗体

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鸡PERK的原核表达及多克隆抗体的制备

6

作者 袁晓琴 刘梦茜 +5 位作者 李春燕 陈仕怡 许丽惠 周五朵 吴异健 王全溪 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第4期428-433,共6页

根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1 500 bp的一段基因(15~1 515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱... 根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1 500 bp的一段基因(15~1 515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱导表达条件,纯化重组蛋白后免疫兔并制备多克隆抗体.PCR鉴定、酶切鉴定和测序结果表明,pET-32a(+)-PERK重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳鉴定结果表明,重组蛋白在1.0 mmol·L-1IPTG、25℃下诱导9 h时的表达量最大.蛋白纯化结果表明,100 mmol·L-1咪唑洗脱液可较好地洗脱重组蛋白,获得较多的纯化蛋白.免疫结束后,抗体效价检测结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶32 000,可以与重组蛋白特异结合. 展开更多

关键词 鸡蛋白激酶R样内质网激酶(PERK) 原核表达 多克隆抗体

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放养土鸡非典型新城疫的病因分析及防控对策 被引量：1

7

作者 高婷 周五朵 吴异健 《福建畜牧兽医》 2015年第6期25-28,共4页

低发病率、低死亡率、高淘汰率、散发性的非典型新城疫是放养土鸡的主要疫病之一,其流行病学、临床症状、剖检病变等不同于传统典型新城疫,易被误诊,给土鸡养殖业造成巨大的经济损失。文中对放养土鸡非典型新城疫的流行特点、成因及防... 低发病率、低死亡率、高淘汰率、散发性的非典型新城疫是放养土鸡的主要疫病之一,其流行病学、临床症状、剖检病变等不同于传统典型新城疫,易被误诊,给土鸡养殖业造成巨大的经济损失。文中对放养土鸡非典型新城疫的流行特点、成因及防控措施等进行概述,以期为土鸡养殖业者提供参考。 展开更多

关键词 放养土鸡 非典型鸡新城疫 发病原因 综合防控

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不同毒力番鸭呼肠孤病毒双重PCR鉴别方法的建立

8

作者 周五朵 朱二鹏 +4 位作者 蔡一龙 温亚萍 吴异健 吴宝成 王全溪 《中国家禽》 北大核心 2014年第6期14-17,共4页

自2001年我国出现番鸭感染呼肠孤病毒(MDRV)报道以来,本课题组从病鸭体内分离到2株在临床上致病力差别很大的病毒毒株,并分别命名为YJL株和YB株。本研究根据这2株病毒基因特点,分别针对YB株P10蛋白基因和YJL株P17蛋白基因设计2对特异性... 自2001年我国出现番鸭感染呼肠孤病毒(MDRV)报道以来,本课题组从病鸭体内分离到2株在临床上致病力差别很大的病毒毒株,并分别命名为YJL株和YB株。本研究根据这2株病毒基因特点,分别针对YB株P10蛋白基因和YJL株P17蛋白基因设计2对特异性引物,通过条件优化建立了鉴别2个毒株的双重PCR。结果显示:该方法可同时扩增出YB 288 bp、YJL 441 bp长度的特异性片段,而对其他番鸭病病原无扩增结果;该方法最佳反应条件为95℃5 min,94℃1 min,55℃45 s,72℃1 min,30个循环,72℃延伸10 min;该方法最低能检出10 pg YB和YJL株RNA模板;使用单重PCR和多重PCR方法对60份临床病料检测验证,两者符合率为100%。结果表明该方法特异性、敏感性和重复性良好,具有快速、准确的特点,可用于这2种不同毒力毒株的鉴别。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 双重PCR 鉴别

原文传递

利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用 被引量：9

9

作者 余深翼 赵金荣 +3 位作者 郑玲红 朱二鹏 周五朵 吴宝成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期762-770,共9页

旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,... 旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序。CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46%~58%;测序结果进一步证实目的基因敲除成功。本试验成功构建大肠杆菌aroA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas 9系统 大肠杆菌 aroA基因 敲除 同源修复

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日粮纤维水平对梅山猪生长性能、纤维表观消化率及肠道微生物区系的影响 被引量：4

10

作者 蒲广 侯黎明 +7 位作者 刘根盛 李平会 许会英 牛培培 俞俊 周五朵 李平华 黄瑞华 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2021年第S01期262-267,共6页

试验旨在研究日粮纤维水平对梅山猪生长性能、纤维表观消化率及肠道微生物区系的影响。选用54头体重(31.24±0.59)kg的健康梅山育肥阉公猪,随机分为基础日粮组、7%麸皮替代组(麸皮替代7%基础日粮)、14%麸皮替代组(麸皮替代14%基础日... 试验旨在研究日粮纤维水平对梅山猪生长性能、纤维表观消化率及肠道微生物区系的影响。选用54头体重(31.24±0.59)kg的健康梅山育肥阉公猪,随机分为基础日粮组、7%麸皮替代组(麸皮替代7%基础日粮)、14%麸皮替代组(麸皮替代14%基础日粮),每组6个重复(即每栏),每栏3头猪。预试期7 d,正试期28 d。结果表明:14%麸皮替代组梅山猪终末体重、平均日采食量以及粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观全肠道消化率低于对照组(P<0.050),而7%麸皮替代组与基础日粮组无显著差异;随麸皮替代水平的升高,梅山猪粪便微生物丰度下降(Chao和Ace,线性P<0.05;Sobs,线性P<0.10),并且14%麸皮替代组的Unclassified_c__Clostridia、UCG-008、UCG-009、Fibrobacter、Cellul osilyticum、Lachnospiraceae_XPB1014_group、Papillibacter、Bacteroides、dgA-11_gut_group、norank_f__norank_o__Bradymonadales、norank_f__norank_o__WCHB1-41、norank_f__p-251-o5、norank_f__norank_o__norank_c__norank_p__WPS-2、norank_f__p-2534-18B5_gut_group和Akkermansia的相对丰度低于基础日粮组(P<0.050)。综上所述,用7%麸皮替代基础日粮时,梅山猪对粗蛋白质、能量的表观消化率显著降低,但其生长性能、各类纤维消化表观率以及肠道微生物区系未受到显著影响。因此,在梅山育肥猪饲养中用7%麸皮替代基础日粮是可行的。 展开更多

关键词 梅山猪 生长性能 表观全肠道消化率 微生物多样性 纤维水平 麸皮

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鸡传染性法氏囊病病毒DK株VP2基因序列分析及其对SPF雏鸡的致病力 被引量：3

11

作者 雷赟赟 林绍青 +5 位作者 刘秉珲 于高博 武琦 周五朵 黄宝钦 吴异健 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期414-417,共4页

为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3... 为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3ELD50剂量感染SFP雏鸡出现典型IBD的临床症状、剖检和组织学病变;实验鸡发病率为100%,致死率为44.4%;DK株VP2基因序列与参考株的同源性为93.1%~97.0%、氨基酸序列同源性为93.6%~97.5%,其基因序列和氨基酸序列均与Cu-1wt参考株(经典株)同源性最高;DK株VP2氨基酸序列的七肽区SASWSGS及249Q、253Q、279D、284A、290M、313V、330S氨基酸位点均与强毒株的氨基酸位点一致;但其222P、256V、299N3个氨基酸不符合IBDV超强毒株的特征;而其第222、249位氨基酸为P和Q,与抗原变异株(vIBDV)的T和K也不相同。结果表明:IBDVDK株为中等偏强毒力病毒。本研究为IBD的防控提供参考依据。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因 克隆 序列分析

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红灯笼猪种质资源鉴定及其特异性基因位点挖掘 被引量：1

12

作者 刘晨曦 侯黎明 +6 位作者 周五朵 徐燕 程跃强 陈珉 金松 李平华 黄瑞华 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第5期26-33,共8页

红灯笼猪是优质的江苏省地方畜禽资源。为探明红灯笼猪种质特异性,解析其种质特性背后的关键基因位点,本试验选取了包括红灯笼猪、米猪和淮猪在内的45个欧亚猪种1228头猪的基因组数据,通过邻接系统发育树、遗传距离、遗传分化系数、祖... 红灯笼猪是优质的江苏省地方畜禽资源。为探明红灯笼猪种质特异性,解析其种质特性背后的关键基因位点,本试验选取了包括红灯笼猪、米猪和淮猪在内的45个欧亚猪种1228头猪的基因组数据,通过邻接系统发育树、遗传距离、遗传分化系数、祖先血统组成K分析(K postulated ancestral populations)以及位点特异性分枝长度(locus-specific branch length,LSBL)分析等进行整合分析。结果显示:红灯笼猪在邻接系统发育树分析中独立成簇,没有与其他猪种交叉。在遗传距离和遗传分化系数分析中,红灯笼猪与其他猪种,包括淮猪和米猪,都保持较远的遗传距离和遗传分化,这种差异甚至超过了梅山和二花脸等现有确认的地方猪种间差异。此外,在祖先血统组成分析中,红灯笼猪在K=39时,形成了独立的祖先血统组成,此时的二花脸和米猪仍共享同一个祖先血统,表明红灯笼猪进化路线特异。最后通过将红灯笼猪、米猪和淮猪进行LSBL分析,结果发现相关位点所注释到的基因主要富集在生长代谢、抗病性和神经发育等功能上,表明红灯笼猪在种质形成过程中,相关性状受到选择。本试验确定了红灯笼猪的品种独立性,初步解析了红灯笼猪种质的遗传机制,为进一步保护和利用这一珍贵猪种奠定了理论基础。 展开更多

关键词 红灯笼猪 品种鉴定 种质特性

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MDRV-YB株σNS蛋白结构与功能的生物信息学分析

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作者 李安菊 林绍青 +5 位作者 郑玲红 孙彤 朱二鹏 周五朵 吴异健 吴宝成 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期177-181,294,共6页

为了获取番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株σNS蛋白结构与功能的相关生物学信息,试验通过克隆测序获取MDRV-YB株σNS基因序列,并运用相关生物信息学软件对σNS蛋白结构与功能进行生物信息学分析。结果表明:MDRV-YB株σNS蛋白的编码区大小为1 10... 为了获取番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株σNS蛋白结构与功能的相关生物学信息,试验通过克隆测序获取MDRV-YB株σNS基因序列,并运用相关生物信息学软件对σNS蛋白结构与功能进行生物信息学分析。结果表明:MDRV-YB株σNS蛋白的编码区大小为1 104 bp,编码367个氨基酸,为亲水性不稳定蛋白,具有4个N-糖基化位点、3个O-糖基化位点、28个磷酸化位点,但不含潜在的信号肽序列;二级结构分析显示,α-螺旋结构、β-折叠结构、β-转角结构、无规卷曲的氨基酸残基分别占40.2%、42.1%、8.97%和8.97%;推导氨基酸序列的遗传进化树分析显示,MDRVYB株与传统型MDRV的遗传进化关系较近,与新型MDRV及鸡源呼肠孤病毒(CRV)遗传进化关系较远。说明σNS蛋白作为非结构蛋白参与病毒的复制过程,且具有较高的保守性。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒(MDRV) σNS蛋白 基因克隆 序列测定 结构与功能 生物信息

原文传递

猴头菇多糖对MDRV感染番鸭血清中细胞因子及激素水平的影响 被引量：5

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作者 郑玲红 吴异健 +6 位作者 廖加磊 蔡栋灵 张英扬 朱二鹏 周五朵 吴宝成 黄一帆 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期249-256,共8页

为研究猴头菇多糖(HPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染番鸭血清中的细胞因子及激素的影响,以探讨HPS对MDRV感染雏番鸭所致免疫抑制免疫调节作用。本试验借助已建立的MDRV自然感染模型进行HPS防治MDRV感染的试验,采用放射免疫测定方法检测... 为研究猴头菇多糖(HPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染番鸭血清中的细胞因子及激素的影响,以探讨HPS对MDRV感染雏番鸭所致免疫抑制免疫调节作用。本试验借助已建立的MDRV自然感染模型进行HPS防治MDRV感染的试验,采用放射免疫测定方法检测试验番鸭血清中部分细胞因子和激素含量的动态变化。结果显示,MDRV感染能抑制番鸭机体分泌IL-1、IL-2、IL-4、生长激素(GH)、促肾上腺皮质激素(ACTH),在感染中后期促进试验番鸭机体分泌糖皮质激素(GC),引起免疫应答下降或停止;HPS预防用药可以促进MDRV感染番鸭分泌IL-1、IL-2和IL-4;维持ACTH含量的相对稳定,抑制MDRV感染番鸭GC含量的急剧升高,促进GH的分泌,调节神经-内分泌-免疫系统。研究表明,HPS预防用药可通过调节MDRV感染番鸭部分细胞因子和激素的分泌量,参与机体免疫调节的过程,缓解MDRV感染番鸭的临床症状及病理变化,降低死亡率,促进免疫抑制番鸭的康复,为HPS在临床上防治MDRV的研究提供理论依据。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 猴头菇多糖 细胞因子 激素

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福建地方鸡B亚群禽白血病病毒的分离鉴定 被引量：3

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作者 赵金荣 曾宇坤 +5 位作者 朱二鹏 周五朵 吴异健 胡万荣 吴宝成 吴晓平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期769-774,共6页

在对福建某地方鸡群进行禽白血病流行病学调查的基础上,对疑似病例进行p27抗原检测,取阳性血清接种DF-1细胞分离病毒。采用PCR及间接免疫荧光试验鉴定其亚群并对其gp85基因进行序列分析。结果显示,分离株FJ15HT0的B亚群特异性PCR检测呈... 在对福建某地方鸡群进行禽白血病流行病学调查的基础上,对疑似病例进行p27抗原检测,取阳性血清接种DF-1细胞分离病毒。采用PCR及间接免疫荧光试验鉴定其亚群并对其gp85基因进行序列分析。结果显示,分离株FJ15HT0的B亚群特异性PCR检测呈阳性;IFA显示感染该毒株的DF1细胞中可检测到p27抗原,而未检测到J亚群特异性囊膜蛋白的表达;对该毒株gp85序列进行分析,发现与多株ALV-B参考毒株氨基酸序列的同源性为91.6%～98.8%,其中与GX10LS01株同源性最高为98.8%,与A、C、D、E亚群同源性在69.4%～84.2%,与J亚群同源性仅为36%～38%。该研究首次分离并鉴定河田鸡群中ALV-B,为后续的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 地方鸡群 B亚群ALV 分离鉴定

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番鸭源传染性支气管炎病毒PTFY株的分离鉴定 被引量：2

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作者 吴晓平 潘书磊 +3 位作者 周五朵 吴异健 黄一帆 吴宝成 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期203-209,共7页

为弄清楚2009年7月某种番鸭养殖场产蛋高峰期番鸭产蛋率、孵化率降低,蛋质量下降的原因,选择无呼吸道症状,死亡率低,剖检可见卵巢肿大充血的番鸭。为确诊该病例,进行病原体的分离与鉴定。取病番鸭卵巢组织,通过鸡胚接种实验、脂溶剂敏... 为弄清楚2009年7月某种番鸭养殖场产蛋高峰期番鸭产蛋率、孵化率降低,蛋质量下降的原因,选择无呼吸道症状,死亡率低,剖检可见卵巢肿大充血的番鸭。为确诊该病例,进行病原体的分离与鉴定。取病番鸭卵巢组织,通过鸡胚接种实验、脂溶剂敏感实验、新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）干扰试验、电镜观察和动物接种实验进行病毒分离和鉴定。结果表明：接种鸡胚可导致侏儒胚,该毒株对于脂溶剂敏感,胰酶处理后具血凝性,可干扰NDV复制,电镜下可见典型冠状病毒形态,接种雏鸡可致呼吸道症状,针对N基因部分序列的扩增与分析可见该毒株与传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus,IBV）参考毒株相应核苷酸序列同源性为84.7%~99%,鉴定所分离毒株PTFY株为IBV,证实IBV对番鸭具有致病性。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 番鸭 分离鉴定

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番鸭呼肠孤病毒YB株μB蛋白的原核表达与生物信息学分析 被引量：2

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作者 陈强 张英扬 +7 位作者 蔡栋灵 刘珍妮 骆钰 林绍青 李鸿文 周五朵 朱二鹏 吴异健 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期605-615,共11页

为研究番鸭呼肠孤病毒YB株（MDRV-YB株）μB蛋白基因与其他多株参考毒株之间的遗传进化关系以及对该序列的结构功能预测和进行蛋白的原核表达,本试验通过RT-PCR方法从MDRV中特异性扩增μB基因,并构建重组质粒pET-YB-μB,经测序获得其完... 为研究番鸭呼肠孤病毒YB株（MDRV-YB株）μB蛋白基因与其他多株参考毒株之间的遗传进化关系以及对该序列的结构功能预测和进行蛋白的原核表达,本试验通过RT-PCR方法从MDRV中特异性扩增μB基因,并构建重组质粒pET-YB-μB,经测序获得其完整的CDS区;通过DNAstar等软件对MDRVYB株μB基因进行生物学信息分析,预测其编码蛋白的结构功能;重组质粒转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达μB融合蛋白。结果显示,μB蛋白基因CDS区全长2031 bp,共编码676个氨基酸;μB蛋白分子式为C3217H5105N879O1014S27,不存在信号肽,可能含有4个N-糖基化位点、85个磷酸化位点,二级结构中α螺旋结构、β螺旋结构、β转角结构和无规卷曲的氨基酸残基分别占27.6%,53.3%,10%和9.1%;在核苷酸同源性方面MDRV-YB株μB基因与番鸭呼肠孤病毒ZJ2000M株同源性高达99.8%,与其他多株鸡源呼肠孤病毒、鸭源呼肠孤病毒和鹅源呼肠孤病毒同源性都很低,仅为67.3%~69.6%;进化树分析结果显示,MDRV-YB株与MW9710株处于最近的分支;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,经IPTG诱导,重组质粒pET-YB-μB成功表达了大小约为99.1 ku的μB融合蛋白,并且该蛋白反应原性良好。本试验结果为MDRV的遗传进化和μB蛋白功能的研究奠定了基础,为进一步研究MDRV的致病机制提供了数据支撑。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 μB基因 原核表达 生物信息学分析

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番鸭呼肠孤病毒感染诱导细胞自噬的研究 被引量：1

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作者 吴异健 崔龙萍 +6 位作者 黄诗杭 王全溪 吴晓平 周五朵 朱二鹏 黄一帆 吴宝成 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期205-210,共6页

本研究通过透射电镜观察自噬体的形态学结构,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞自噬相关蛋白LC3II和磷酸化mTOR(p-mTOR)表达量的动态变化趋势,探索番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染对细胞自噬的影响。结果显示,MDRV-YB株感染的DF-1细胞中可... 本研究通过透射电镜观察自噬体的形态学结构,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞自噬相关蛋白LC3II和磷酸化mTOR(p-mTOR)表达量的动态变化趋势,探索番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染对细胞自噬的影响。结果显示,MDRV-YB株感染的DF-1细胞中可见典型的包裹胞浆成分的双层膜结构;MDRV感染番鸭成纤维细胞(MDFs)和DF-1细胞后0~60h内,其LC3II表达量均呈现先升高后降低的趋势,且均在感染后36h达到最大值,其p-mTOR表达量均呈现先降低后回升的趋势,且分别在感染后36h和24h达到最低值;灭活MDRV组细胞未见LC3II表达。结果表明MDRV能够诱导感染的MDFs和DF-1细胞持续较长时间细胞自噬,而灭活的MDRV不能引起细胞自噬。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 细胞自噬 LC3Ⅱ 蛋白免疫印迹(Western blot) 透射电镜

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一例八哥犬双侧腹股沟疝的诊断与治疗

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作者 高婷 周五朵 +1 位作者 汪燕秋 吴异健 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2015年第11期93-94,236,共3页

腹股沟疝是宠物临床疾病中较为常见的外科疾病之一。随着社会经济的发展，人民生活水平的提高，宠物数量也呈现持续上升的趋势，腹股沟疝的病例也随之增多。腹股沟疝是指腹腔内脏器通过腹股沟区的缺损向体表突出所形成的疝，俗称“疝气”。

关键词 双侧腹股沟疝 治疗 诊断 八哥 外科疾病 临床疾病 社会经济 犬

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番鸭呼肠孤病毒σNS蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：7

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作者 朱二鹏 崔龙萍 +5 位作者 吕小婷 余深翼 周五朵 吴异健 吴晓平 吴宝成 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期474-480,共7页

为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株σNS蛋白的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了σNS基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-YB-σNS。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功高效表达出分子质量约为58ku的融合... 为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株σNS蛋白的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了σNS基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-YB-σNS。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功高效表达出分子质量约为58ku的融合蛋白。该融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在,表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度、诱导温度分别为4h、1mmol/L和37℃。通过对包涵体和可溶性蛋白进行尿素洗涤纯化和(或)Ni 2+柱亲和层析纯化,得到了高纯度的重组蛋白。分别对纯化前、后的重组蛋白进行Western-blot分析,结果显示两者均可以与MDRV阳性血清发生特异性反应,表明它们具备良好的反应原性。将纯化后的可溶性σNS蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶32 000。上述研究结果为后续MDRVσNS蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 σNS蛋白 原核表达 纯化 多克隆抗体

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