目的:探讨miRNA-1181(miR-1181)对人胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响以及机制。方法:选取胰腺癌细胞系PANC-1和MIA Pa Ca-2进行实验并构建miR-1181过表达慢病毒载体(miR-1181U),低表达慢病毒载体(miR-1181D)以及空载慢病毒载体(NC),采用...目的:探讨miRNA-1181(miR-1181)对人胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响以及机制。方法:选取胰腺癌细胞系PANC-1和MIA Pa Ca-2进行实验并构建miR-1181过表达慢病毒载体(miR-1181U),低表达慢病毒载体(miR-1181D)以及空载慢病毒载体(NC),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测感染效率;Transwell实验以及划痕实验检测miR-1181对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响,免疫荧光检测miR-1181对细胞骨架的影响,Western bolt检测STAT3的表达;构建si-STAT3并转染miR-1181低表达组(miR-1181D),重复transwell实验验证STAT3是其靶基因。结果:qRT-PCR显示3条不同序列的si-STAT3均能显著下调STAT3的表达;Transwell实验及划痕实验显示上调miR-1181后能显著抑制胰腺癌细胞的侵袭转移(P<0.05),下调miR-1181后能显著促进胰腺癌的侵袭转移(P<0.05);Western blot显示miR-1181U能抑制STAT3的表达,miR-1181D能促进STAT3的表达;免疫荧光显示在PANC-1细胞中过表达miR-1181后,F-肌动蛋白(F-actin)被剪切,呈现低表达,导致其运动结构和极性的缺失,从而迁移能力变弱;si-STAT3以后能减弱miR-1181D组对侵袭转移的促进作用。结论:miR-1181可能通过抑制STAT3来抑制人胰腺癌细胞的侵袭转移能力,有望成为胰腺癌治疗的潜在靶点。展开更多
目的:探讨microRNA-29c对人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2)生物学特性的影响。方法:培养1种人正常胰腺上皮细胞(HPDE)及4种人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2),采用real-time PCR法观察5种细胞系...目的:探讨microRNA-29c对人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2)生物学特性的影响。方法:培养1种人正常胰腺上皮细胞(HPDE)及4种人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2),采用real-time PCR法观察5种细胞系中microRNA-29c的表达差异,以microRNA-29c过表达腺病毒感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为实验组,以空载体感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为阴性对照组,采用细胞划痕实验、Transwell法检测两组细胞体外侵袭能力,Western blot检测两组细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)及E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。结果:real-time-PCR显示各胰腺癌细胞系中microRNA-29c水平明显低于正常胰腺细胞系(P<0.05),细胞划痕实验发现感染腺病毒48 h后实验组PANC-1、MIA Pa Ca-2细胞的迁移距离明显短于阴性对照组(P<0.05),Transwell小室细胞侵袭实验发现实验组PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞侵袭数量明显低于阴性对照组(P<0.05);Western blot蛋白免疫印迹结果显示PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞过表达microRNA-29c后,Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加。结论:microRNA-29c的过表达可有效抑制胰腺癌细胞的体外侵袭与转移,可能与Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加有关,有望成为胰腺癌生物治疗的潜在靶点。展开更多
文摘目的:探讨miRNA-1181(miR-1181)对人胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响以及机制。方法:选取胰腺癌细胞系PANC-1和MIA Pa Ca-2进行实验并构建miR-1181过表达慢病毒载体(miR-1181U),低表达慢病毒载体(miR-1181D)以及空载慢病毒载体(NC),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测感染效率;Transwell实验以及划痕实验检测miR-1181对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响,免疫荧光检测miR-1181对细胞骨架的影响,Western bolt检测STAT3的表达;构建si-STAT3并转染miR-1181低表达组(miR-1181D),重复transwell实验验证STAT3是其靶基因。结果:qRT-PCR显示3条不同序列的si-STAT3均能显著下调STAT3的表达;Transwell实验及划痕实验显示上调miR-1181后能显著抑制胰腺癌细胞的侵袭转移(P<0.05),下调miR-1181后能显著促进胰腺癌的侵袭转移(P<0.05);Western blot显示miR-1181U能抑制STAT3的表达,miR-1181D能促进STAT3的表达;免疫荧光显示在PANC-1细胞中过表达miR-1181后,F-肌动蛋白(F-actin)被剪切,呈现低表达,导致其运动结构和极性的缺失,从而迁移能力变弱;si-STAT3以后能减弱miR-1181D组对侵袭转移的促进作用。结论:miR-1181可能通过抑制STAT3来抑制人胰腺癌细胞的侵袭转移能力,有望成为胰腺癌治疗的潜在靶点。
文摘目的:探讨microRNA-29c对人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2)生物学特性的影响。方法:培养1种人正常胰腺上皮细胞(HPDE)及4种人胰腺癌细胞(As PC-1、Bx PC-3、PANC-1、MIA Pa Ca-2),采用real-time PCR法观察5种细胞系中microRNA-29c的表达差异,以microRNA-29c过表达腺病毒感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为实验组,以空载体感染的PANC-1和MIA Pa Ca2细胞作为阴性对照组,采用细胞划痕实验、Transwell法检测两组细胞体外侵袭能力,Western blot检测两组细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)及E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。结果:real-time-PCR显示各胰腺癌细胞系中microRNA-29c水平明显低于正常胰腺细胞系(P<0.05),细胞划痕实验发现感染腺病毒48 h后实验组PANC-1、MIA Pa Ca-2细胞的迁移距离明显短于阴性对照组(P<0.05),Transwell小室细胞侵袭实验发现实验组PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞侵袭数量明显低于阴性对照组(P<0.05);Western blot蛋白免疫印迹结果显示PANC-1和MIA Pa Ca-2细胞过表达microRNA-29c后,Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加。结论:microRNA-29c的过表达可有效抑制胰腺癌细胞的体外侵袭与转移,可能与Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加有关,有望成为胰腺癌生物治疗的潜在靶点。
