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鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析
1
作者 王圣文 张丹 +2 位作者 邬雨倩 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 2024年第1期137-146,共10页
载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物... 载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位
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猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定
2
作者 张丹 卢舒婷 +8 位作者 卢辰赫 王子仪 徐丽华 陈伊玄 王圣文 金子安 倪成章 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期424-434,共11页
为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以... 为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以纯化的重组N蛋白为免疫原制备兔多克隆抗血清(多抗血清),再通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting, WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)等多种方法对兔多抗血清进行反应性鉴定。结果显示:经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)和低温诱导,成功表达出分子量约为100 kDa的可溶性重组N蛋白,在非变性条件下亲和纯化获得的重组N蛋白质量浓度达到1.4 mg/mL;N蛋白兔多抗血清的ELISA效价可达1×10^(6),与真核表达的重组蛋白Flag-N以及FCoV感染细胞中的N蛋白均具有良好的WB和IFA反应性。交叉反应性结果显示:该多克隆抗体能与α属冠状病毒中不同亚型的FCoV以及犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的N蛋白发生反应,但不与β属冠状病毒中的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2, SARS-CoV-2)和γ属冠状病毒中的传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)的N蛋白发生反应。综上所述,以pCold TF原核系统表达的可溶性重组N蛋白具有良好的免疫原性,以该蛋白制备的FCoV N蛋白兔多抗血清能识别多种来自不同物种的α属冠状病毒N蛋白,但与β、γ属冠状病毒N蛋白没有交叉反应性,这为进一步研究FCoV复制机制以及开发高效的抗原和抗体检测技术奠定了基础。 展开更多
关键词 猫冠状病毒 核衣壳蛋白 可溶性表达 多克隆抗体 交叉反应性
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猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位
3
作者 王子仪 金子安 +5 位作者 卢辰赫 乔治 王圣文 颜焰 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期744-754,共11页
冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronaviru... 冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50—550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上。在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白。在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白。采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象。Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础。 展开更多
关键词 猫冠状病毒 非结构蛋白3 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位
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不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白可溶性表达及免疫反应性比较
4
作者 冯梦珂 王星博 +3 位作者 林璐璐 崔明仙 颜焰 周继勇 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期873-880,共8页
本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a... 本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a分别表达去除信号肽和跨膜区的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白,利用镍-氨三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和层析法分别纯化源自pET28a和pCold-TF表达载体的包涵体和可溶性CD2v蛋白,并用间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法比较纯化蛋白的免疫反应性。结果显示,pCold-TF载体以表达可溶性蛋白为主,pMAL-C6T载体同时表达包涵体和可溶性蛋白,而其他载体主要表达包涵体蛋白。临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清检测数据显示,可溶性蛋白的免疫反应性显著优于包涵体蛋白(P<0.05)。pCold-TF载体的触发因子(trigger factor,TF)标签可促进CD2v蛋白的可溶性表达,其表达蛋白的免疫反应性优于包涵体蛋白。本研究结果为CD2v蛋白的免疫原性研究奠定了基础,亦为其他重要抗原的可溶性表达提供了思路。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 原核表达 可溶性表达 免疫反应性
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HSP90AB1与IBV S1蛋白互作调节病毒吸附的研究
5
作者 张焕东 方承秀 +3 位作者 林翠 董伟仁 周继勇 廖敏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期983-990,共8页
前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种... 前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种IBV毒株的S1蛋白发生互作,Gst-pull-down试验证明,HSP90AB1与M41株S1蛋白的互作属于直接互作。进一步的免疫沉淀试验表明,细胞膜HSP90AB1与内源性S1蛋白同样具有互作关系。进一步研究发现过表达HSP90AB1会促进IBV Beaudette对Vero细胞的吸附,而敲低HSP90AB1则抑制病毒吸附H1299细胞;使用商品化的HSP90AB1家兔单克隆抗体预处理Vero细胞则抑制了病毒的吸附;用HSP90AB1蛋白阻断结合位点使病毒吸附细胞的能力显著降低。以上结果表明,HSP90AB1对IBV吸附细胞具有正调节作用,其可能是IBV入侵细胞的一个关键宿主因子。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 热休克蛋白HSP90AB1 S1蛋白 病毒吸附
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禽传染性支气管炎病毒S2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定
6
作者 李忠斐 周建卫 +4 位作者 张焕东 彭莉 颜焰 周继勇 廖敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期942-950,共9页
为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类... 为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类鉴定结果显示4株MAb的重链均为Ig G1,轻链均为κ。采用间接ELISA法检测上清及腹水效价,结果显示MAb细胞上清效价均不低于1∶12 800,腹水效价均不低于1∶51 200。采用western blot检测制备的S2蛋白MAb与IBV感染鸡胚尿囊液后天然表达的S2蛋白的反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测IBV感染非洲绿猴肾细胞(Vero)后天然表达的S2蛋白的反应原性。Western blot结果显示,感染IBV的鸡胚尿囊液中出现了90 ku左右的特异性条带;IFA结果显示,感染IBV的Vero细胞中出现绿色荧光。以上结果表明,制备的S2蛋白MAb能够与天然表达的S2蛋白反应,反应原性较强。利用间接ELISA检测MAb与S2蛋白的亲和力,结果显示4株MAb对S2蛋白均有良好的亲和力。利用一系列表达部分重叠的重组S2片段并经western blot鉴定4株MAb识别的抗原表位,结果显示,1A7、4F12、4A7 MAb识别的抗原表位是^(69)VQINCLQYVCGSSLECRKLFQQ^(90),4D1MAb识别的抗原表位是^(175)YKKCTAGPLGTLKDLI^(190)。采用IFA检测MAb的中和活性,结果显示,4株MAb均不具有中和活性。通过western blot检测MAb的反应谱,结果显示,MAb均能够与所选不同基因型(GI-1、GI-7、GI-13、GI-19、GI-22、GI-23) IBV发生特异性反应,表明制备的MAb反应谱较广。本研究为进一步探究IBV S2蛋白的功能及病毒致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 S2蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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猪圆环病毒2型感染的血清学分析 被引量：59
7
作者 周继勇 陈庆新 +6 位作者 叶菊秀 朱家新 郑肖娟 商绍彬 陈亭飞 母安雄 周恩民 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-3,共3页
应用间接免疫荧光技术 ,测定了浙江省内 4 4个猪场 2 0 0 0～ 2 0 0 2年间的 2 0 39个血清样本 ,对不同地区、年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示 ,浙江省 4 4个猪场均有猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染 ,猪场的感染率为 10 ... 应用间接免疫荧光技术 ,测定了浙江省内 4 4个猪场 2 0 0 0～ 2 0 0 2年间的 2 0 39个血清样本 ,对不同地区、年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示 ,浙江省 4 4个猪场均有猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染 ,猪场的感染率为 10 0 % ,全省猪的 PCV2感染的平均血清阳性率为 5 8.31% ,其中种猪感染的血清阳性率为 5 9.38% ,断奶后猪感染的血清阳性率为 5 6 .6 5 %。长白种猪感染的血清阳性率为 4 4 .83%、长白仔猪感染的血清阳性率为 6 4 .2 8% ,明显高于大约克和杜洛克种猪和仔猪的感染率。 PCV2感染的血清阳性率高的种猪和仔猪群 ,其 PRRSV和 Pr V的抗体阳性率低。这些结果说明 ,PCV2在猪群中的感染非常普遍 ,不同品种猪对 PCV2的易感性不同 。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 血清学 间接免疫荧光试验 断奶仔猪 多系统衰竭综合征
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浙江地区传染性法氏囊病毒变异株分离及鉴定 被引量：10
8
作者 周继勇 叶伟成 于涟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期567-573,共7页
　７ 株鸡传染性法氏囊病的法氏囊组织直接在鸡胚成纤维细胞盲传２ ～１５ 代后，均能不同程度产生细胞病变效应（ ＣＰＥ） ，并通过病毒血清中和试验、动物回归试验、电镜观察、琼脂免疫扩散试验，理化特性测定等试验证实七株病原为... 　７ 株鸡传染性法氏囊病的法氏囊组织直接在鸡胚成纤维细胞盲传２ ～１５ 代后，均能不同程度产生细胞病变效应（ ＣＰＥ） ，并通过病毒血清中和试验、动物回归试验、电镜观察、琼脂免疫扩散试验，理化特性测定等试验证实七株病原为传染性法氏囊病病毒。在此基础上将７ 个浙江地区的ＩＢＤＶ 野毒株、１ 个四川地区的ＩＢＤＶ 野毒株和２ 个疫苗毒株经病毒—血清交叉中和试验获得了抗原性不同的五个亚型毒株或变异株。根据交叉中和试验所得的Ｒ 值，应用聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系，显示传染性法氏囊病病毒的变异存在地或性差异。 展开更多
关键词 IBD 鉴定 法氏囊病 IBDV 分离 鸡
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传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达 被引量：6
9
作者 周继勇 丁红梅 +1 位作者 程丽琴 沈行燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期450-455,共6页
核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片... 核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %～ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %～ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4 展开更多
关键词 禽病毒 传染性支气管炎病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 E.COLI 表达
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不同组织嗜性传染性支气管炎病毒核衣壳基因的遗传变异性分析 被引量：5
10
作者 周继勇 张德勇 +2 位作者 丁红梅 程丽琴 陈吉刚 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期59-63,共5页
根据GenBank发表的传染性支气管炎病毒 (infectiousbronchitisvirus,IBV)Beaudette毒株核衣壳 (nucleocap sid ,N)基因序列设计一对特异性引物 ,利用RT -PCR方法分别扩增了疫苗毒株IBV -H5 2、嗜腺胃ZJ971株、嗜肾IBV -X和N株的N基因OR... 根据GenBank发表的传染性支气管炎病毒 (infectiousbronchitisvirus,IBV)Beaudette毒株核衣壳 (nucleocap sid ,N)基因序列设计一对特异性引物 ,利用RT -PCR方法分别扩增了疫苗毒株IBV -H5 2、嗜腺胃ZJ971株、嗜肾IBV -X和N株的N基因ORF ,并克隆到质粒载体 pBluescriptSK( +) ,测序后用PCgene和DNAStar软件分析。结果显示 :4株IBV的N基因均含有一个长 12 30bp的ORF ,编码一由 40 9个氨基酸残基组成的N蛋白。嗜肾IBV -X和N毒株的N基因存在HindⅢ酶切位点。与来自GenBank的另外 8株IBV比较 ,ZJ971株与它们的N蛋白的核苷酸及氨基酸序列同源性分别在 88 2 %～ 98 6 %和 91 2 %～ 97 8% ;N株则分别为 86 6 %～ 87 4%和90 5 %～ 91 5 % ;X株分别为 86 3%～ 87 4%和 90 0 %～ 91 5 % ;H5 2分别为 90 4%～ 98 3 %和 92 0 %～98 0 %。ZJ971株、N和X株的N基因的突变特点是散在的点突变。嗜腺胃ZJ971株核衣壳蛋白的氨基酸序列的最显著的遗传变异特征是H111D、S117A、V14 2 L、P171A和E4 0 1D ;嗜肾IBV -X和N株核衣壳蛋白的氨基酸序列的最显著的遗传变异特征是A4 6S、A4 8P、L189R、N190 S、E2 2 0 D、I2 2 3A、V2 3 6Y、S2 37K、K2 4 0 Q、Q2 86R、T2 99K、R30 1E、E33 4 D、V33 5E、V336P和T351S。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 核衣壳蛋白基因 克隆 变异
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鸡传染性腺胃炎病原分离和初步鉴定 被引量：16
11
作者 周继勇 于涟 +2 位作者 洪健 叶伟成 张志育 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1998年第6期637-641,共5页
从１９９７年在浙江省建德市发生的一种新的以腺胃肿大为特症的鸡传染病病例中收集的腺胃组织（ＺＪ９７１）为鸡胚接种材料，感染鸡胚第１代可达３３．３％的死亡率，第３代达７５％的死亡率并出现规律性死亡，自第６代开始死亡率达１... 从１９９７年在浙江省建德市发生的一种新的以腺胃肿大为特症的鸡传染病病例中收集的腺胃组织（ＺＪ９７１）为鸡胚接种材料，感染鸡胚第１代可达３３．３％的死亡率，第３代达７５％的死亡率并出现规律性死亡，自第６代开始死亡率达１００％．鸡胚尿囊液经１％胰酶处理后可凝集鸡和鼠的红细胞，电镜观察可见直径９０～１９０ｎｍ的带囊膜和突起的冠状病毒粒子，中和试验结果显示低滴度的ＺＪ９７１可被ＩＢＶ－Ｈ５２和Ｔ株血清中和，ＺＪ９７１对酸、碱、热、乙醚和氯仿敏感，对反复冻融不敏感．这表明，从腺胃病变型鸡群中分离的ＺＪ９７１毒株是冠状病毒科的一个成员． 展开更多
关键词 鸡 传染性腺胃炎 冠状病毒 分离 鉴定
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鸡肾型传染性支气管炎病毒分离及鉴定 被引量：13
12
作者 周继勇 于涟 +2 位作者 马有智 李双茂 钱凯先 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1998年第3期303-307,共5页
从浙江省内大型商品代鸡场和专业户鸡场出现的以肾肿大为主要特征的呼吸道疾病病鸡中分离到六株病毒，易感雏鸡．接种３ｄ后出现一过性呼吸道症状，感染鸡死亡集中在感染后１４～１８ｄ，病死鸡出现肾肿大、苍白呈花斑状、大量尿酸盐沉... 从浙江省内大型商品代鸡场和专业户鸡场出现的以肾肿大为主要特征的呼吸道疾病病鸡中分离到六株病毒，易感雏鸡．接种３ｄ后出现一过性呼吸道症状，感染鸡死亡集中在感染后１４～１８ｄ，病死鸡出现肾肿大、苍白呈花斑状、大量尿酸盐沉积．鸡胚感染后出现死亡和产生侏儒胚，鸡胚尿囊液不凝集红细胞，电镜观察可见约１２０ｎｍ的病毒粒子．分离病原在鸡胚中可干扰新城疫病毒Ｌａｓｏｔａ株的繁殖．上述试验证实分离毒株为鸡肾型传染性支气管炎病毒． 展开更多
关键词 传染性支气管炎 病毒 鉴定 肾型 鸡病
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鸡白细胞介素-2基因在Pichia methanolica酵母中的表达 被引量：3
13
作者 周继勇 陈吉刚 +2 位作者 王金勇 张德勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期419-423,共5页
鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达... 鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达菌株(pMETαA/rchIL-2).经SDS-PAGE、Western印迹测定,证实chIL-2基因在P.methanolica中表达成功,rchIL-2的分子量约为16kDa,其表达量占分泌总蛋白的35%. 展开更多
关键词 鸡白细胞介素-2 基因表达 Pichia-methanolica酵母 细胞因子
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实验性雏鸭隐孢子虫病病理学研究 被引量：7
14
作者 周继勇 黎晓敏 +3 位作者 聂奎 唐发书 曾子建 李安兴 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第1期67-73,共7页
30只10日龄无隐孢子虫感染的雏鸭口腔和气管内接种隐孢子虫卵囊,于接种后不同时期观察临床症状和扑杀,进行病理组织学和电镜观察。结果表明:隐孢子虫仅寄生于雏鸭呼吸系统、法氏囊皱褶粘膜上皮细胞的游离面和法氏囊固有层内淋巴滤泡的... 30只10日龄无隐孢子虫感染的雏鸭口腔和气管内接种隐孢子虫卵囊,于接种后不同时期观察临床症状和扑杀,进行病理组织学和电镜观察。结果表明:隐孢子虫仅寄生于雏鸭呼吸系统、法氏囊皱褶粘膜上皮细胞的游离面和法氏囊固有层内淋巴滤泡的皮质和髓质交界处未分化上皮细胞表面,引起上皮细胞大量增殖、坏死、剥脱及真性细胞浸润,导致雏鸭细胞增生性气管炎、支气管肺炎和法氏囊炎。 展开更多
关键词 雏鸭 隐孢子虫病 病理组织学
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两系超级杂交稻Y两优1号母本直播制种技术 被引量：4
15
作者 周继勇 肖层林 +4 位作者 刘爱民 肖为一 易图华 青先国 刘建兵 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2010年第1期28-30,共3页
2008和2009年连续2a在湖南绥宁县武阳制种基地进行两系超级杂交水稻Y两优1号(Y58S/9311)母本直播制种14hm2,平均单产2.93t/hm2,最高单产4.2t/hm2,种子纯度99%以上。提出了该组合母本直播制种优质高产的配套技术。
关键词 两系超级杂交水稻 Y两优1号 母本直播 制种技术
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传染性法氏囊病毒的抗原及分子特征(英文) 被引量：2
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作者 周继勇 叶菊秀 +3 位作者 叶伟成 陈庆新 郑肖娟 郭军庆 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期37-45,共9页
用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2～14代后适应细胞并... 用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2～14代后适应细胞并产生细胞病变.细胞适应的IBDV毒株的理化和形态特征与经典传染性法氏囊病毒株一致.除IBDV-HZ1、HZ2属经典IBDV血清型外,IBDV-JD1、JD2和NB毒株分属不同的血清亚型.人工感染实验结果显示,分离的IBDV毒株产生与野外病例相似的临床症状和病变,出现法氏囊滤泡髓质的淋巴细胞变性、坏死和消失.基因组序列分析显示,IBDV-NB毒株A片段由3 264个核苷酸组成,编码由145个氨基酸残基组成的VP5和由1 012个氨基酸残基组成的多聚蛋白.与来自GenBank的IBDV Ⅰ型毒株比较,NB毒株A片段编码的多聚蛋白与JD1毒株的同源性最高,达99.5%,VP2与JD1、CEF94、D78的同源性为99.8%,VP3与JD1的同源性为99.2%,VP4与JD1的同源性为100%,VP5与JD1,HZ2,P2,CEF94,CT,Cu-1和D78毒株的同源性为99.3%.NB毒株VP2蛋白的第253、280、284位氨基酸残基与IBDV变异毒株和经典毒株一致,但不同于IBDV超强毒株.这些结果暗示IBDV的抗原表位是构象依赖性表位,IBDV血清亚型的形成与IBDV弱毒疫苗病毒株密切相关. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 理化特性 血清亚型 基因组A片段
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传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的遗传稳定性与免疫原性 被引量：13
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作者 周继勇 李建荣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期317-320,共4页
将传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) JD1 、JD2 、NB变异毒株直接适应于鸡胚成纤维细胞上致弱。 3个毒株2 1代和 3 5～ 3 8代细胞毒分别连续回归鸡体 5代。结果表明 ,IBDV JD1 株 2 1～ 3 5代、JD2 株 3 7代、NB株 3 8代细胞毒对雏鸡已基本... 将传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) JD1 、JD2 、NB变异毒株直接适应于鸡胚成纤维细胞上致弱。 3个毒株2 1代和 3 5～ 3 8代细胞毒分别连续回归鸡体 5代。结果表明 ,IBDV JD1 株 2 1～ 3 5代、JD2 株 3 7代、NB株 3 8代细胞毒对雏鸡已基本失去致病力 ,是毒力相对稳定的弱毒株。 IBDV JD1 、JD2 、NB变异株弱毒以 3 0 0 0TCID5 0 、50 0 0 TCID5 0 、1 0 0 0 0 TCID5 0 、1 50 0 0 TCID5 0 4个不同免疫剂量免疫 SPF鸡后的攻毒试验结果表明 ,JD1 、NB毒株的免疫效果明显优于 B87、Bursine3毒株疫苗 ,具有优良的免疫原性。JD1 、NB毒株的最佳免疫剂量分别为 50 0 0 TCID5 0 、3 0 0 0 TCID5 0 。抗体消长规律表明 ,JD1 株疫苗一次免疫后的有效保护期为 2 1 4d,最低有效中和抗体保护效价为 1∶ 4 0 71。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 变异株 免疫原性
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浙江地区传染性法氏囊病病毒野毒株的血清亚型分析 被引量：12
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作者 周继勇 于涟 李双茂 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第1期53-55,共3页
７个浙江地区的ＩＢＤＶ野毒株、１个四川地区的ＩＢＤＶ野毒株和２个疫苗毒株经病毒血清交叉中和试验获得了抗原性不同的五个亚型毒株或变异株。根据交叉中和试验所得的Ｒ值，应用聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系，显示传... ７个浙江地区的ＩＢＤＶ野毒株、１个四川地区的ＩＢＤＶ野毒株和２个疫苗毒株经病毒血清交叉中和试验获得了抗原性不同的五个亚型毒株或变异株。根据交叉中和试验所得的Ｒ值，应用聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系，显示传染性法氏囊病病毒的变异存在地域性差异。 展开更多
关键词 法氏囊病病毒 血清亚型 聚类分析
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中国地方品种鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析(英文) 被引量：2
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作者 周继勇 陈吉刚 +1 位作者 王金勇 JIMMY K WANG 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期384-389,共6页
鸡白细胞介素 2 (chIL 2 )是近年来新发现的一类细胞因子 .根据Sundick等发表的鸡IL 2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法分别扩增和克隆了我国仙居鸡、丝羽乌骨鸡两个地方品种和艾维... 鸡白细胞介素 2 (chIL 2 )是近年来新发现的一类细胞因子 .根据Sundick等发表的鸡IL 2基因序列设计一对特异性引物 ,从ConA体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法分别扩增和克隆了我国仙居鸡、丝羽乌骨鸡两个地方品种和艾维茵商品肉鸡IL 2cDNA .仙居鸡、丝羽乌骨鸡和艾维茵商品肉鸡IL 2基因的编码区均由 42 9nt组成 ,编码一个由 143个氨基酸组成的前体蛋白 .基因 5′端含有 17个核苷酸 ,3′端含有 2 85个核苷酸组成的非编码区 ,3′ UTR中含有 5个重复的“ATTTA”序列 .编码蛋白氨基酸与来自GenBank的Kestrel、Obese和SC品系的来杭鸡比较 ,氨基酸的突变主要发生在 2 8～ 3 2位 .而这一区域仙居鸡和丝羽乌骨鸡的编码氨基酸序列与Kestrel来杭鸡相同 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡相同 .基因系统进化树分析表明 ,仙居鸡、丝羽乌骨鸡和Kestrel来杭鸡具有很近的亲缘关系 ,艾维茵商品肉鸡与Obese和SC来杭鸡具有很近的亲缘关系 .中国的药用鸡品种———丝羽乌骨鸡在非常保守的 13 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 基因 克隆 遗传进化 系统进化 鸡 品种
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广东省粮食高产创建活动实践与成效 被引量：3
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作者 周继勇 林青山 +1 位作者 胡学应 邹永春 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期222-224,共3页
对2008—2011年广东省粮食高产创建活动进行综述,包括组织措施、管理措施、技术措施等方面;总结了粮食高产创建的成效,从全省粮食单产和总产、农业生产方式转变和农民收入等方面进行说明;对下一步深入推进广东粮食高产创建、进一步提高... 对2008—2011年广东省粮食高产创建活动进行综述,包括组织措施、管理措施、技术措施等方面;总结了粮食高产创建的成效,从全省粮食单产和总产、农业生产方式转变和农民收入等方面进行说明;对下一步深入推进广东粮食高产创建、进一步提高水稻单产水平提出了加大资金投入力度、完善高产创建机制、创新创建思路的建议。 展开更多
关键词 粮食 高产创建 实践 成效
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