期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到6篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
弓形虫GRA6-GRA2蛋白表达及检测应用
1
作者 张宁 刘伟 +5 位作者 吴铭洁 夏霖亚 王蕾 殷玉和 石晶 吴丛梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期91-98,共8页
为建立一种敏感性好、特异性强、方便快捷的检测猫弓形虫抗体的方法,本研究通过分子生物学方法、优化合成了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2基因,采用大肠杆菌ER2566表达了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2三种蛋白;表达产物利用His亲和层析柱纯... 为建立一种敏感性好、特异性强、方便快捷的检测猫弓形虫抗体的方法,本研究通过分子生物学方法、优化合成了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2基因,采用大肠杆菌ER2566表达了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2三种蛋白;表达产物利用His亲和层析柱纯化后,经Western blot鉴定三种蛋白表达产物都有较好的抗原特异性;通过ELISA方法进行检测比较,确定GRA6-GRA2蛋白敏感性最高;以GRA6-GRA2蛋白作为标记抗原,制备弓形虫抗体检测试纸条,分别对敏感性对照阳性血清、特异性对照血清进行检测,并与弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清进行对比检测。结果表明:检测敏感性对照阳性血清可检测至1∶256,检测临床常见的猫细小病毒阳性血清、猫杯状病毒阳性血清和猫疱疹病毒阳性血清结果均为阴性;在弓形虫抗体检测试纸条和弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清的对比检测中,阳性率分别为2.42%和2.07%,符合率为99.5%。通过以上结果可知,采用GRA6-GRA2蛋白作为诊断抗原制备的胶体金试纸,具有良好的敏感性和特异性,为弓形虫病的快速诊断提供了切实可行的检测手段。 展开更多
关键词 弓形虫 抗原 GRA6-GRA2蛋白
下载PDF
水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及病毒样颗粒制备 被引量：3
2
作者 吴铭洁 夏霖亚 +4 位作者 王蕾 张宁 罗国良 殷玉和 吴丛梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第2期433-442,共10页
试验旨在制备水貂肠炎病毒(Mink enteritis parvovirus,MEV)可溶性VP2蛋白及其病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。优化并合成MEV VP 2基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),将重组质粒pET-30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转化到宿主菌ER... 试验旨在制备水貂肠炎病毒(Mink enteritis parvovirus,MEV)可溶性VP2蛋白及其病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。优化并合成MEV VP 2基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),将重组质粒pET-30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转化到宿主菌ER2566中,以不同培养温度、L-阿拉伯糖浓度和IPTG浓度进行诱导表达,收集样品进行SDS-PAGE和Western blotting分析。通过硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法对表达产物进行纯化,由SDS-PAGE进行鉴定,透析去除蔗糖,通过动态光散射技术(DLS)和透射电子显微镜(TEM)观察不同组装条件下VLPs的粒径和形态。用制备的MEV VLPs疫苗免疫水貂评价其免疫原性。结果显示,以2 g/L L-阿拉伯糖、0.2 mmol/L IPTG、25℃培养16 h为诱导条件时,VP2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量约为65 ku。经Western blotting鉴定VP2蛋白具有良好的抗原特异性。将此表达产物利用硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法纯化后,纯度可达90%以上。在pH 8.0,150 mmol/L NaCl的透析液中,VP2经自组装可形成与天然MEV形状和粒径相似且具有血凝特性(1∶214)的VLPs。VLPs疫苗免疫水貂21 d后,测得水貂血清中的血凝抑制(HI)抗体水平均相对最高,可达1∶211,说明该VLP疫苗有较好的免疫原性,能有效预防MEV的感染。本试验结果表明,将pET-30a-VP2与pTf16在原核表达系统中共表达,可获得具有高免疫原性的VLPs,为后期MEV VLPs疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 VP2 原核表达 pTf16 病毒样颗粒
下载PDF
新型含有金刚烷苯乙烯结构单元化合物的合成和初步抗肿瘤增殖 被引量：2
3
作者 桂舒雅 熊昊 +5 位作者 林智 夏霖亚 钟启升 李东风 侯瑞斌 夏艳 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期420-425,共6页
以金刚烷苯乙烯为结构单元,设计合成了3个含有亲水性基团的新型小分子(8a、8b和8c),利用核磁共振谱、红外光谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。用1-溴代金刚烷作为原料在Pd/C和K2CO3的作用下发生傅克烷基化反应高产率得到金... 以金刚烷苯乙烯为结构单元,设计合成了3个含有亲水性基团的新型小分子(8a、8b和8c),利用核磁共振谱、红外光谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。用1-溴代金刚烷作为原料在Pd/C和K2CO3的作用下发生傅克烷基化反应高产率得到金刚烷甲苯(2),随后在N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和(三苯基膦烯基)乙酸甲酯过氧化苯甲酰(BPO)的作用下发生溴代反应得到了金刚烷苄基溴的化合物3,苄基溴在酸性条件下氧化生成醛(4),该醛与维蒂希试剂发生Wittig反应得到甲酸甲酯(5),随后发生碱性条件水解得到重要的中间体6。最后该中间体与3个结构不同的苯胺类化合物发生偶联反应生成了3个目标化合物。通过MTS法评价了3个化合物对人肝癌细胞(SMMC7721)、乳腺癌细胞(MCF-7)、宫颈癌细胞(Hela)、肺癌细胞(A549)的增殖抑制活性。结果表明,部分化合物表现出较好的抑制活性。其中,目标化合物8c对人肝癌细胞表现出较好的抗肿瘤活性(IC_(50)=1.6μmol/L或0.73 mg/L),与现有药物阿霉素相当(0.44 mg/L),有望成为潜在的抗肿瘤药物分子。该类化合物可能在靶向抗肿瘤药物研发方面具有较好的研究前景,所合成的金刚烷苯乙烯类衍生物的抗肿瘤活性、靶点及作用机制还有待进一步研究。 展开更多
关键词 金刚烷苯乙烯 合成 抗肿瘤活性 MTS
下载PDF
重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2
4
作者 董雪 徐雨昕 +4 位作者 郭晶 龚忠阔 夏霖亚 殷玉和 吴丛梅 《吉林大学学报（理学版）》 CAS 北大核心 2019年第6期1538-1543,共6页
通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA... 通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV共转染HEK-293F细胞,可显著抑制C6细胞增殖(P<0.01);转染24~144h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达;所得纯化蛋白和标准品一致;纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖(P<0.05~0.01),与标准品抑制效果相似. 展开更多
关键词 密码子优化 VEGF单克隆抗体 纯化 生物活性
下载PDF
4种分子伴侣促进猫细小病毒样颗粒可溶性表达的研究 被引量：1
5
作者 夏霖亚 吴铭洁 +4 位作者 王蕾 张宁 罗国良 吴丛梅 殷玉和 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期19-24,153,共7页
为了研究4种分子伴侣在E.coli表达系统中对猫细小病毒(feline Parvovirus, FPV)VP2蛋白表达及其组装的病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)活性的影响,试验构建重组质粒pET30a-VP2,将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣pKJE7、pK... 为了研究4种分子伴侣在E.coli表达系统中对猫细小病毒(feline Parvovirus, FPV)VP2蛋白表达及其组装的病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)活性的影响,试验构建重组质粒pET30a-VP2,将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣pKJE7、pKJE8、pGro7和pTf16转化至E.coli ER2566感受态细胞中进行共表达,运用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行检测,通过硫酸铵沉淀结合疏水层析柱对表达产物进行纯化,电镜观察VLPs的形态,并采用血凝试验检测其免疫活性。结果表明:重组质粒pET30a-VP2在E.coli表达系统中主要以包涵体形式表达蛋白。4种分子伴侣与重组质粒pET30a-VP2共表达,加入终浓度为2 mg/mL L-阿拉伯糖及0.1 mmol/L IPTG或5 ng/mL四环素的诱导剂,25℃诱导16 h,均能显著提高FPV VP2蛋白的可溶性表达,表达蛋白具有抗原特异性。纯化得到的FPV VP2蛋白在250 mmol/L NaCl(pH值为8.0)条件下可自组装形成均一、直径约为24 nm的VLPs。仅分子伴侣pTf16与重组质粒pET30a-VP2共表达获得的FPV VP2蛋白经透析形成的FPV VLPs正常,无碎片,其血凝效价为219。说明通过将重组质粒pET30a-VP2分别与4种分子伴侣在E.coli表达系统中共表达,4种分子伴侣均可促进FPV VP2蛋白的可溶性表达,成功纯化并获得FPV VLPs。 展开更多
关键词 猫细小病毒 病毒样颗粒 分子伴侣 VP2蛋白 原核表达 可溶性表达
原文传递
重组HPV16 L1衣壳蛋白的表达与层析纯化工艺的优化
6
作者 王蕾 孙琦 +5 位作者 陈放 夏霖亚 张宁 吴铭洁 吴丛梅 殷玉和 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期445-453,共9页
在大肠杆菌系统中表达重组HPV16 L1衣壳蛋白,并采用实验设计(design of experiments,DOE)对重组蛋白的阳离子交换层析纯化工艺参数进行优化,以获得更高的回收率,为产品生产提供指导。首先,构建表达载体pET-30a-16 L1,转化至大肠杆菌BL21... 在大肠杆菌系统中表达重组HPV16 L1衣壳蛋白,并采用实验设计(design of experiments,DOE)对重组蛋白的阳离子交换层析纯化工艺参数进行优化,以获得更高的回收率,为产品生产提供指导。首先,构建表达载体pET-30a-16 L1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,进行诱导表达并应用50 L发酵罐高密度培养工程菌;然后,单因素变量筛选4种阳离子交换层析介质,DOE方法优化上样流速及缓冲液的pH,疏水层析进一步纯化;分析重组HPV16 L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的蛋白纯度、回收率、内毒素、宿主残余蛋白和残余DNA,并进行透射电镜形态观察;最后,HPV16 L1 VLPs免疫小鼠,评价体内所诱导的中和抗体水平。结果显示,筛选并确定pH为8.0的缓冲体系和5 mL/min的上样流速进行POROS^(TM)XS阳离子层析作为蛋白纯化条件,疏水层析进一步纯化;纯化后蛋白浓度为1.0 mg/mL,回收率为46.23%,纯度为97%,内毒素含量小于12.5 EU/mL,宿主残余蛋白为6.00 ng/mL,宿主残余DNA为3.30 ng/mL;小鼠免疫6周后血清的中和抗体滴度Log10平均值为4.01。本研究利用大肠杆菌表达系统成功表达HPV16 VLPs,获得优化后的阳离子交换层析纯化工艺,为VLPs疫苗的研发提供了思路,为DOE在生物工程领域的应用提供依据。 展开更多
关键词 实验设计 蛋白纯化 HPV16 L1
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部