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转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征 被引量：10
1
作者 牛东东 郝育杰 +13 位作者 荣瑞娟 韦汉福 兰金苹 史佳楠 魏健 李雪姣 杨烁 奚文辉 武鹏程 刘丽娟 吴琳 刘斯奇 尹长城 刘国振 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期2715-2722,共8页
【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入... 【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS蛋白质进行定量分析。提取不同时期、不同部位的水稻总蛋白质,包括苗期的地上部、地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶枕、叶片上部、叶片中部和叶片下部,孕穗期的茎、穗轴、叶鞘、叶枕、叶片、幼穗(长度分别为1、2、10和20 cm),开花期的茎、穗轴、叶鞘、叶片、穗子,成熟期的茎、叶片、授粉后不同时期的种子(分别为授粉后10、20、30和40 d)、乳熟期的胚、胚乳和颖壳、成熟种子的全种子、胚、胚乳和颖壳以及不同时期的叶片和根部材料等。SDS-PAGE分离后用抗体检测其GUS蛋白质的丰度。【结果】筛选获得了高特异性的抗GUS单克隆抗体(编号为#27),用该抗体检测转基因水稻中及重组的GUS蛋白质均呈现特异条带,没有可见的背景信号,用本研究建立的免疫印迹方法对重组GUS蛋白质的检测下限约为4 ng,可检出转基因水稻单粒大米2.5%样品中(约0.6 mg)的GUS蛋白质。在不同时期的转基因水稻叶片中GUS蛋白质的表达丰度基本稳定,而在水稻根部的GUS丰度随生长急剧减少,5叶期根中的表达量不到3叶期的三分之一,到6叶期检测不到GUS蛋白质。在水稻苗期叶片中,GUS蛋白质约占鲜重的0.02‰。另外,除分蘖期以后的根部之外,GUS蛋白质几乎在所有的水稻组织部位中呈组成型表达,只是不同组织中的表达量略有差异,如在孕穗期和开花期的茎及颖壳中的表达量较低。【结论】建立了具有应用价值的对转基因水稻中GUS蛋白质丰度检测的免疫印记方法。该方法特异性高、样品用量少、不依赖于GUS蛋白质的酶活性、测定结果易于在不同实验室间比较。证明了35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中基本呈组成型表达。 展开更多
关键词 水稻 转基因植物 CaMV 35S启动子 GUS蛋白质 免疫印迹
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单毛囊RT-PCR技术在哺乳动物毛囊基因表达研究中的应用
2
作者 奚文辉 张文广 +5 位作者 吴江鸿 李金泉 张燕军 付绍印 赵德超 松杰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期48-49,共2页
为了研究单毛囊RT-PCR技术在哺乳动物的毛发基因表达中的应用,试验以人的毛发为研究对象,利用单毛囊RT-PCR技术体系在1根头发的毛囊相关基因表达中成功地获得目的基因片段,经测序证实为目的基因片段。结果表明:该技术体系在研究毛囊相... 为了研究单毛囊RT-PCR技术在哺乳动物的毛发基因表达中的应用,试验以人的毛发为研究对象,利用单毛囊RT-PCR技术体系在1根头发的毛囊相关基因表达中成功地获得目的基因片段,经测序证实为目的基因片段。结果表明:该技术体系在研究毛囊相关基因的表达中取得了理想的结果。试验体系可以用于活体微创条件下研究毛囊相关基因的表达分析,解决以往研究毛囊基因表达模式时皮肤样品不足的问题,为研究毛囊基因表达提供了新的可行性路线。 展开更多
关键词 单毛囊 RT-PCR技术 基因表达
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基于抗体的水稻蛋白质组学理论与实践
3
作者 刘国振 李莉云 +58 位作者 窦世娟 杨明 李晓明 张剑硕 侯明明 曹英豪 刘丽娟 魏健 郭亚璐 史佳楠 陈悦 王田幸子 范伟 张柳 马金姣 张彤 刘玉晴 燕高伟 徐珊 杨烁 周艳 杜铁民 牛东东 荣瑞娟 黄腾 柴帅杰 郭美岑 缪刘杨 李雪姣 徐文静 关明俐 贾霖 贾盟 曾祥然 高庆华 刘钊 王宪云 刘雨萌 兰金苹 白辉 刘斯奇 尹长城 吴琳 韦汉福 韩宇宁 赵丽英 杨春霞 武鹏程 马晓飞 赵志静 潘秦 郝育杰 陈浩 赵磊 康昊翔 耿广荟 孔令男 史晓儒 奚文辉 《中国科技成果》 2022年第24期10-11,共2页
水稻是最重要的粮食作物之一,不仅是世界上一半以上的人口以水稻作为主粮,也是基础研究的模式植物。项目团队在前人研究的基础上,结合蛋白质研究的需求和发展趋势,凝练提出了“基于抗体的水稻蛋白质组学”概念,十多年来,不断优化技术路... 水稻是最重要的粮食作物之一,不仅是世界上一半以上的人口以水稻作为主粮,也是基础研究的模式植物。项目团队在前人研究的基础上,结合蛋白质研究的需求和发展趋势,凝练提出了“基于抗体的水稻蛋白质组学”概念,十多年来,不断优化技术路线,积极拓展和丰富相关理论并开展实践。1主要创新点1.1首次提出了“基于抗体的水稻蛋白质组学”概念。 展开更多
关键词 蛋白质组学 结合蛋白质 理论与实践 项目团队 主要创新点 开展实践 发展趋势 抗体
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