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枳PtMLP1启动子的克隆和表达分析
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作者 姚利晓 苏娟 +4 位作者 郭兴茹 李凤龙 何永睿 邹修平 陈善春 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2023年第24期4906-4915,共10页
【目的】基因工程是柑橘品种改良的一种重要手段。本研究基于枳根消减文库中主要乳胶蛋白基因PtMLP1片段,克隆根特异启动子序列,为研究外源基因在柑橘根组织的特异表达奠定基础。【方法】同源克隆PtMLP1及启动子序列。利用ExPASy、PSIP... 【目的】基因工程是柑橘品种改良的一种重要手段。本研究基于枳根消减文库中主要乳胶蛋白基因PtMLP1片段,克隆根特异启动子序列,为研究外源基因在柑橘根组织的特异表达奠定基础。【方法】同源克隆PtMLP1及启动子序列。利用ExPASy、PSIPRED、SWISS-MODEL等在线软件对PtMLP1编码蛋白的理化特征、二级结构和三级结构进行生物信息学分析,利用PlantCARE数据库对PtMLP1启动子的顺式作用元件进行预测。实时荧光定量PCR法对PtMLP1在不同树龄枳根和叶中的表达进行分析。构建PtMLP1启动子与GUS标记基因的融合载体,利用根癌农杆菌转化法转化枳上胚轴,GUS染色观察标记基因的表达部位。【结果】枳PtMLP1含2个外显子和1个内含子,开放阅读框长471 bp。PtMLP1蛋白由156个氨基酸组成,分子量17.63 kDa,等电点5.49,含Bet v I功能域。其二级结构含3个α-螺旋和7个β-折叠,三级结构包含一个保守疏水基结合位点和一个富含甘氨酸的回环结构。5′端1666 bp的上游调控序列不仅有TATA-box、CAAT-box等启动子结构的核心元件,还具有多个根组织特异表达元件,以及TGACG-motif、P-box和ABRE等激素应答相关的顺式作用元件。3′端非翻译区具有加尾信号AATAAA。该基因在1月龄苗、6月龄苗、20年生成年枳根中的表达量分别是叶中的46.34、74.82、110.25倍。构建启动子的融合表达载体pBI121-ProPtMLP1::GUS,获得枳转基因植株。PtMLP1启动子驱动GUS在转基因枳幼苗根中特异表达,GUS在3个转基因枳株系的根中表达量分别为叶中表达量的124.78、11.53和7.76倍。【结论】获得柑橘主要乳胶蛋白PtMLP1及启动子序列,该启动子可驱动标记基因在柑橘根组织特异表达。 展开更多
关键词 主要乳胶蛋白 根特异性启动子 GUS
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日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果 被引量:9
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作者 姚利晓 林矫矫 +7 位作者 傅志强 朱传刚 李浩 陆珂 刘金明 石耀军 沈阳 蔡幼民 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1659-1666,共8页
目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研... 目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY902477)长1311bp,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kD,等电点为5.51;其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threoninespecificproteinphosphatase,简称PP)的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPⅤ等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%。(3)成功构建核酸疫苗pCMV-Script/SjPP,免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%,粪便减卵率为31.91%。结论(1)获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。(2)含SjPP基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。 展开更多
关键词 日本血吸虫 东方田鼠 丝/苏氨酸蛋白磷酸酶 核酸疫苗 免疫保护
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柑橘基因工程育种研究策略及其进展 被引量:10
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作者 姚利晓 何永睿 +4 位作者 邹修平 雷天刚 许兰珍 彭爱红 陈善春 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1056-1064,共9页
由于柑橘具有童期长、基因高度杂合、多胚性、远缘杂交不亲和及性器官败育等生物学特性,在很大程度上限制了传统育种的发展,基因工程育种能高效地对植物进行定向改良,将成为柑橘定向改良育种研究工作的重要手段。近十余年来,已成功利用... 由于柑橘具有童期长、基因高度杂合、多胚性、远缘杂交不亲和及性器官败育等生物学特性,在很大程度上限制了传统育种的发展,基因工程育种能高效地对植物进行定向改良,将成为柑橘定向改良育种研究工作的重要手段。近十余年来,已成功利用农杆菌侵染法将外源基因转入到越来越多的柑橘品种,并建立柑橘成年态材料的遗传转化体系和标记基因删除系统。对近年来柑橘成年态材料转化、标记基因的更替和转基因柑橘安全性研究等方面的成果进行了总结,对柑橘基因工程育种在抗细菌病、真菌病、病毒病等生物逆境和干旱、低温等非生物逆境,以及在改善柑橘果实性状和生长性状等方面的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 柑橘 基因工程 育种 生物安全
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日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶基因的表达及其免疫保护试验 被引量:7
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作者 姚利晓 孙安国 +4 位作者 傅志强 刘金明 苑纯秀 蔡幼民 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期122-126,共5页
为研究日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶(SjPP)的免疫功能,构建了原核表达重组质粒pET28a(+)-SjPP,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)进行诱导表达,并用重组蛋白进行了小鼠免疫保护试验,免疫剂量为每次20μg/只,共免疫3次。结果表明,pET28a(+... 为研究日本血吸虫丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶(SjPP)的免疫功能,构建了原核表达重组质粒pET28a(+)-SjPP,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)进行诱导表达,并用重组蛋白进行了小鼠免疫保护试验,免疫剂量为每次20μg/只,共免疫3次。结果表明,pET28a(+)-SjPP/BL21(DE3)在0.1 mmol/L IPTG诱导2 h时,每1 g菌体可产生17.8 mg以包涵体形式存在的重组蛋白;重组蛋白免疫小鼠后诱导产生了高效价的血清特异性IgG抗体,并获得了部分减虫率、肝组织减卵率和显著的粪便减卵率,具有一定的免疫保护作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶 蛋白表达 免疫保护作用
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柑橘溃疡病抗性相关转录因子CitMYB20的功能 被引量:3
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作者 姚利晓 范海芳 +7 位作者 张庆雯 何永睿 许兰珍 雷天刚 彭爱红 李强 邹修平 陈善春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1997-2008,共12页
[目的]了解柑橘不同品种CitMYB20对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)和外源植物激素的应答情况,评价转基因植株对柑橘溃疡病的抗性,验证CitMYB20的生物学功能.[方法]根据柑橘基因组序列设计引物,PCR法同源克隆柑橘溃疡... [目的]了解柑橘不同品种CitMYB20对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)和外源植物激素的应答情况,评价转基因植株对柑橘溃疡病的抗性,验证CitMYB20的生物学功能.[方法]根据柑橘基因组序列设计引物,PCR法同源克隆柑橘溃疡病抗性品种金弹金柑(Fortunella japonica)和敏感品种枣阳小叶枳(Poncirus trifoliata)的CitMYB20基因序列和启动子序列,利用在线软件PlantCARE对启动子序列进行顺式作用元件预测.以针刺法对金弹金柑和枣阳小叶枳离体叶片接种柑橘溃疡病菌,用外源激素水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利处理金弹金柑和枣阳小叶枳的叶片,在处理的不同时期收集材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CitMYB20的表达水平.分别构建CitMYB20的过表达载体和抑制表达载体,根癌农杆菌法转化枳上胚轴,随机摘取转基因株系成熟叶片进行柑橘溃疡病离体抗性评价.[结果]金弹金柑和枣阳小叶枳中CitMYB20(GenBank登录号分别为MN689609和MN689608)序列高度保守,相似度达到99%;两者的启动子序列(GenBank登录号分别为MN689611和MN689610)虽然都具有脱落酸和茉莉酸甲酯的响应元件,但金弹金柑中还具有水杨酸响应的顺式作用元件,而枣阳小叶枳中缺少该元件.在体外接种柑橘溃疡病菌5 d时,金弹金柑成熟叶片中CitMYB20表达量显著上升,达到对照的2.5倍;而枣阳小叶枳叶片CitMYB20在整个接菌周期内表达量未发生显著变化.外源激素处理时,CitMYB20对水杨酸和茉莉酸甲酯的响应相似,即在金弹金柑中呈现出先升高后降低的趋势,而在枣阳小叶枳中表达量降低,随后又恢复正常.乙烯利处理时,CitMYB20在金弹金柑中表达量略有下降,在枣阳小叶枳中表达量先升后降.遗传转化共获得7株过表达植株和5株抑制表达植株,转基因植株与对照植株相比在形态发育上未见明显差异.CitMYB20过表达植株能够在一定程度上减弱柑橘溃疡病的症状,而抑制CitMYB20表达植株对柑橘溃疡病菌的敏感性增强.[结论]CitMYB20在柑橘溃疡病抗性品种中受柑橘溃疡病菌的诱导表达;CitMYB20是防御柑橘溃疡病菌入侵的一种正向调控转录因子,其抗柑橘溃疡病功能可能需要水杨酸和茉莉酸信号途径的作用;CitMYB20可作为柑橘抗溃疡病分子育种的候选基因. 展开更多
关键词 柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种 柑橘溃疡病 R2R3-MYB转录因子 过表达 RNA干扰 抗病性
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东方田鼠抗日本血吸虫病的研究进展 被引量:4
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作者 姚利晓 林矫矫 蔡幼民 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2003年第6期471-473,共3页
东方田鼠(Microtus fortis)亦称米氏田鼠(MicrotusMichnoi)、长江田鼠、沼泽田鼠、苇田鼠,俗称湖鼠,属啮齿目(Rodentia)、仓鼠科(Cricitidae)、田鼠亚科(Microcinae)、田鼠属(Microcus).
关键词 东方田鼠 日本血吸虫病 米氏田鼠 湖鼠 洞庭湖 抗血吸虫病机制 防治途径 应用前景 抗病基因
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日本血吸虫SjPP基因重组杆状病毒的构建和在昆虫细胞中的表达 被引量:3
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作者 姚利晓 陶丽红 +3 位作者 杨冠珍 吴祥甫 蔡幼民 林矫矫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期124-127,共4页
目的在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化入大肠埃希菌DH10... 目的在昆虫细胞中表达获得可溶性的日本血吸虫SjPP重组蛋白。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,通过RT-PCR扩增出SjPP基因的编码区序列,将其定向克隆到供体质粒pFastBac HT-B中,构建重组杆状病毒供体质粒pFastBac-SjPP,转化入大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组杆粒Bacmid-SjPP,用阳离子脂质体法转染粉纹夜蛾(TN5B1-4)细胞。利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。结果构建了含日本血吸虫SjPP基因的重组杆粒Bacmid-SjPP,转染TN5B1-4细胞后,获得有感染力的重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中成功表达SjPP蛋白。该重组蛋白可被抗SjPP蛋白的兔血清识别。结论成功构建SjPP基因重组杆状病毒,并在TN5B1-4细胞中表达,该蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 SjPP Bac-to-Bac杆状病毒表达系统
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日本血吸虫病核酸疫苗的研究 被引量:9
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作者 姚利晓 林矫矫 《中国兽医寄生虫病》 CAS 2004年第4期33-37,共5页
核酸疫苗能同时诱发体液免疫和细胞免疫 ,具有众多传统疫苗无法比拟的优点 ,并且佐剂的应用能增强核酸疫苗的免疫效果。抗日本血吸虫核酸疫苗的研究在实验动物和牛、羊等大家畜上取得一定进展 。
关键词 核酸疫苗 日本血吸虫病 诱发 细胞免疫 体液免疫 佐剂 多价疫苗 大家畜 和牛 免疫效果
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RNA干扰技术及其在寄生虫研究中的应用 被引量:2
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作者 姚利晓 林矫矫 蔡幼民 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期274-278,共5页
关键词 RNA干扰技术 寄生虫 RNAI技术 转录后基因沉默 生物体 序列特异 天然存在 原生动物 脊椎动物 高等植物
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日本血吸虫SjPP基因原核表达蛋白的酶活性
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作者 姚利晓 王欣之 +2 位作者 傅志强 陶丽红 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期555-558,共4页
分别以磷酸苏氨酸多肽(K-R-pT-I—R—R)和4-硝基苯基磷基二钠盐(pNPP)为底物,研究原核表达的日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性,检测二价金属阳离子(Mn^2+、Ni^2+、Mg^2+、Ca^2+)、温度、pH值对rSjPP酶... 分别以磷酸苏氨酸多肽(K-R-pT-I—R—R)和4-硝基苯基磷基二钠盐(pNPP)为底物,研究原核表达的日本血吸虫丝/苏氨酸蛋白磷酸酶重组蛋白rSjPP的酶活性,检测二价金属阳离子(Mn^2+、Ni^2+、Mg^2+、Ca^2+)、温度、pH值对rSjPP酶活性的影响。结果显示,rSjPP重组蛋白可以有效地水解磷酸苏氨酸多肽,具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶活性。rSjPP酶活性的最适温度为60℃,最适pH值为8.0。1~4mmol/L Ni^2+对rSjPP酶活力有促进作用,但Mn^2+、Mg^2+、Ca^2+等阳离子对rSjPP的酶活力影响不大。 展开更多
关键词 日本血吸虫 丝/苏氨酸蛋白磷酸酶 酶活性 影响因子
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枳早期结瘤素样基因PtBCP1的克隆和分析
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作者 姚利晓 马园园 +5 位作者 李凤龙 许兰珍 雷天刚 彭爱红 何永睿 陈善春 《安徽农业科学》 CAS 2012年第33期16102-16106,共5页
[目的]克隆枳早期结瘤素样基因PtBCP1并对其序列进行分析。[方法]以枳消减文库中的C28 EST为种子序列进行电子克隆,据此设计引物进行PCR,以获得枳早期结瘤素样基因PtBCP1的全长cDNA和DNA序列,并对获得的序列进行生物信息学分析。[结果]P... [目的]克隆枳早期结瘤素样基因PtBCP1并对其序列进行分析。[方法]以枳消减文库中的C28 EST为种子序列进行电子克隆,据此设计引物进行PCR,以获得枳早期结瘤素样基因PtBCP1的全长cDNA和DNA序列,并对获得的序列进行生物信息学分析。[结果]PtBCP1基因由2个外显子和1个内含子组成,在枳幼苗根中的表达量是叶中的140倍,该基因编码的蛋白含131个氨基酸残基,预测分子量为14.0 kD,理论等电点为8.75,具有N端信号肽和PCLD(PFMD:PF02298)功能域,但无完整的铜离子结合位点,属于早期结瘤素样蛋白。[结论]为进一步研究PtBCP1基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 早期结瘤素样基因 克隆
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寄生虫的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶
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作者 姚利晓 林矫矫 蔡幼民 《国外医学(寄生虫病分册)》 2004年第6期258-261,共4页
丝 /苏氨酸蛋白磷酸酶是一种调节蛋白质可逆磷酸化的酶蛋白 ,在细胞代谢、DNA复制、基因转录、RNA剪接、信号转导、细胞分化及凋亡、癌基因转化等细胞活动过程中发挥重要作用。该文着重对寄生虫的丝 /苏氨酸蛋白磷酸酶的研究进展作简要... 丝 /苏氨酸蛋白磷酸酶是一种调节蛋白质可逆磷酸化的酶蛋白 ,在细胞代谢、DNA复制、基因转录、RNA剪接、信号转导、细胞分化及凋亡、癌基因转化等细胞活动过程中发挥重要作用。该文着重对寄生虫的丝 /苏氨酸蛋白磷酸酶的研究进展作简要综述。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶 寄生虫 RNA剪接 白质 凋亡 基因转录 细胞分化 苏氨酸 酶蛋白 转化
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柑橘栽培品种(系)DNA指纹图谱库的构建 被引量:57
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作者 雷天刚 何永睿 +5 位作者 吴鑫 姚利晓 彭爱红 许兰珍 刘小丰 陈善春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期2852-2861,共10页
【目的】构建柑橘栽培品种(系)的DNA指纹图谱数据库,为建立柑橘种苗纯度及真实性鉴定技术体系和技术规范奠定基础。【方法】利用SSR标记和ISSR标记对102个柑橘栽培品种(系)进行DNA指纹分析,筛选适合的特征引物,构建柑橘栽培品种(系)的... 【目的】构建柑橘栽培品种(系)的DNA指纹图谱数据库,为建立柑橘种苗纯度及真实性鉴定技术体系和技术规范奠定基础。【方法】利用SSR标记和ISSR标记对102个柑橘栽培品种(系)进行DNA指纹分析,筛选适合的特征引物,构建柑橘栽培品种(系)的指纹图谱数据库。【结果】从200对SSR引物中筛选到重复性好、多态性丰富的12对引物作为柑橘品种(系)鉴定的特征引物,12对SSR特征引物组合可鉴别42个品种(系);在此基础上,对未出现SSR特征指纹的60个品种(系)进行ISSR指纹分析,从40个ISSR引物中筛选到2个可用于品种鉴定的特征引物,结合SSR标记,可快速、准确地鉴别70个柑橘的品种(系)。并利用这12对SSR特征引物和2个ISSR特征引物构建了70个柑橘栽培品种(系)的DNA特征指纹图谱数据库。【结论】SSR和ISSR标记适于构建柑橘栽培品种DNA指纹图谱库;指纹图谱库的建立为柑橘种苗纯度及真实性鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 柑橘 品种鉴定 SSR ISSR 指纹图谱库
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柑橘响应溃疡病菌转录因子CsBZIP40的克隆及功能分析 被引量:11
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作者 贾瑞瑞 周鹏飞 +8 位作者 白晓晶 陈善春 许兰珍 彭爱红 雷天刚 姚利晓 陈敏 何永睿 李强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第13期2488-2497,共10页
【目的】分析柑橘BZIP转录因子家族并克隆柑橘溃疡病菌相关的转录因子Cs BZIP40,对其进行亚细胞定位并研究外源激素及机械损伤对该基因的诱导表达,确定其诱导表达模式,分析其与溃疡病菌侵染的关系。【方法】基于全基因组公共数据库,对柑... 【目的】分析柑橘BZIP转录因子家族并克隆柑橘溃疡病菌相关的转录因子Cs BZIP40,对其进行亚细胞定位并研究外源激素及机械损伤对该基因的诱导表达,确定其诱导表达模式,分析其与溃疡病菌侵染的关系。【方法】基于全基因组公共数据库,对柑橘BZIP转录因子进行综合专业注释以获得柑橘中BZIP家族的所有成员信息,并根据染色体定位对其进行命名;利用MEME分析其结构域;利用MEGA 6.0分析柑橘BZIP与拟南芥BZIP的系统发育关系,并根据系统发育关系对该基因家族进行分类,确定本研究关注的Cs BZIP40所属的类型;结合染色体定位和系统发育树确定该家族的基因复制情况;利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)方法验证感染溃疡病菌前后由柑橘转录组筛选出的Cs BZIP40表达模式;分析Cs BZIP40、启动子元件(plant CARE)和核定位信号(c NLSmapper),构建GFP融合载体,用洋葱表皮进行亚细胞定位分析,来对预测的核定位信息进行验证;利用q RT-PCR技术分析水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(Me JA)、乙烯利(ET)以及机械损伤(wounding)对该基因的诱导表达模式,揭示该转录因子与激素代谢途径的关系。【结果】从柑橘(甜橙)全基因组数据库中共注释到47个BZIP,这些BZIP基因位于9号染色体之外的所有染色体上,其中3号染色体基因密度最大为4.5×10-7个/Mb,2号染色体上的BZIP基因密度最小,仅占所有BZIP基因的2%;柑橘BZIP基因家族含有较少的基因复制事件,所以相对其他已测序物种其BZIP家族较小;Cs BZIP40基因全长5 756 bp,开放阅读框1 530 bp,编码509个氨基酸;经BZIP家族染色体定位、结构域和系统发育分析结果显示Cs BZIP40基因序列特异性较好,且Cs BZIP40与拟南芥中AT1g08320属于同源基因,属于柑橘10个亚家族中参与病菌防御的D亚类;上游启动子元件含多个与植物逆境或激素应答相关的顺式作用元件,例如Box-W1、HSE、ERE等;此基因含有核定位信号,亚细胞定位表明此蛋白定位于细胞核,具备转录因子发挥作用的前提;外源水杨酸并不会使四季橘和纽荷尔脐橙中Cs BZIP40的表达水平显著上调,纽荷尔脐橙在茉莉酸甲酯诱导后有明显的差异表达,但乙烯利可以使Cs BZIP40在四季橘和纽荷尔脐橙中均有较明显的差异表达;柑橘溃疡病菌侵染可诱导抗病品种四季橘中此基因上调表达,而在感病品种纽荷尔脐橙中,该基因对柑橘溃疡病菌侵染没有响应。【结论】Cs BZIP40是响应溃疡病菌侵染的一个转录因子,该基因可作为柑橘抗溃疡病菌分子育种的一个候选基因来进行进一步功能性验证,具有潜在的分子育种价值。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 BZIP 转录因子 亚细胞定位
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日本血吸虫童虫部分差异表达蛋白的质谱分析 被引量:10
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作者 赵晓宇 姚利晓 +4 位作者 孙安国 傅志强 刘金明 蔡幼民 林矫矫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-6,共6页
应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童... 应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。 展开更多
关键词 日本血吸虫 童虫 蛋白质组 质谱
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日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt-4基因的克隆、表达及功能分析 被引量:6
16
作者 陶丽红 姚利晓 +6 位作者 傅志强 冯新港 刘金明 石耀军 苑纯秀 蔡幼民 林矫矫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期392-397,共6页
由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。... 由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。利用RACE技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个Wnt家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp,编码436个氨基酸,理论分子量49.6kD。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型Wnt家族蛋白特征,与日本三角涡虫、人Wnt4的氨基酸序列相似性分别达43%、37%,推测为血吸虫的Wnt4基因,命名为Sjwnt4(GenBank登陆号DQ643829)。实时定量PCR分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达,其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段,44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pGEX-4T-2-Sjwnt4,应用大肠杆菌系统进行了表达,表达蛋白以包涵体形式存在,Western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。Sjwnt4基因及其表达产物的获得,为探索Wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 信号转导 Wnt4 发育 差异表达
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贵州部分柑橘地方品种遗传背景的SSR分析 被引量:6
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作者 雷天刚 何永睿 +5 位作者 彭爱红 许兰珍 邹修平 姚利晓 李金强 陈善春 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期30-35,共6页
利用SSR分子标记技术对5个贵州柑橘地方品种的遗传背景进行分析.结果表明,24对SSR引物在5个地方品种和参与D N A指纹比对的14个栽培品种中共检测到92个等位基因,每个位点的等位基因数变幅为2~7个,平均为3.8个;多态性信息含量(PI... 利用SSR分子标记技术对5个贵州柑橘地方品种的遗传背景进行分析.结果表明,24对SSR引物在5个地方品种和参与D N A指纹比对的14个栽培品种中共检测到92个等位基因,每个位点的等位基因数变幅为2~7个,平均为3.8个;多态性信息含量(PIC)变化范围在0.36~0.78之间,平均为0.49.经过DNA指纹比对,发现其中5对引物扩增的8条特征谱带可作为地方品种鉴别的参考性标记.利用NTSYS软件进行相似性系数计算,采用 UP‐GM A法聚类,结果显示,相似性系数为0.80,可将5个地方品种划分在不同的亚组中;地方品种米柑和牛肉红金橘均单独成组,其遗传背景独特;土柑与皱皮柑的亲缘关系较近;大果型冰糖橙与冰糖橙的遗传背景相同;红香柚与强德勒柚的遗传背景基本一致. 展开更多
关键词 柑橘 地方品种 遗传背景 SSR标记
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根癌农杆菌介导甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因转化柑桔成年材料的研究 被引量:4
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作者 彭爱红 彭祝春 +5 位作者 何永睿 许兰珍 雷天刚 刘小丰 姚利晓 陈善春 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期51-55,共5页
本研究以柑桔优良品种不知火(shinanui)为试料,通过携带质粒pBI121-A的根癌农杆菌转化成年树腋芽,获得转甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因不知火植株。研究结果表明,锦橙试管砧木培养15d时不知火成年树腋芽的嫁接成活率最高,达到90%;... 本研究以柑桔优良品种不知火(shinanui)为试料,通过携带质粒pBI121-A的根癌农杆菌转化成年树腋芽,获得转甲型肝炎病毒(HAV)衣壳蛋白融合基因不知火植株。研究结果表明,锦橙试管砧木培养15d时不知火成年树腋芽的嫁接成活率最高,达到90%;不知火不同成熟度的枝条应采用不同的消毒时间,木质化的枝条消毒时间要长些,半木质化的枝条消毒时间要短些。对获得的拟转化植株进行PCR分析以及对PCR阳性植株进行测序,结果表明HAV衣壳蛋白融合基因已整合到不知火的基因组中。 展开更多
关键词 柑桔 根癌农杆菌 甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 转化
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转基因植物疫苗的研究进展 被引量:6
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作者 王军政 彭爱红 +2 位作者 姚利晓 范达 陈善春 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第17期3471-3475,共5页
疫苗是目前预防和控制疾病最有效的方式之一。转基因植物疫苗作为一种新型口服疫苗是现代疫苗研究的一个热点,以其价廉、安全、有效、易于储存等优点而具有十分广阔的应用前景。从转基因植物疫苗的作用机理、生产方法和应用前景等方面... 疫苗是目前预防和控制疾病最有效的方式之一。转基因植物疫苗作为一种新型口服疫苗是现代疫苗研究的一个热点,以其价廉、安全、有效、易于储存等优点而具有十分广阔的应用前景。从转基因植物疫苗的作用机理、生产方法和应用前景等方面进行了论述。分析了转基因植物疫苗的优点及不足,并对其未来的发展进行了展望。 展开更多
关键词 转基因植物疫苗 作用机理 研究进展 应用前景
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柑桔转基因研究进展 被引量:5
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作者 彭爱红 何永睿 +5 位作者 许兰珍 邹修平 刘小丰 姚利晓 雷天刚 陈善春 《热带作物学报》 CSCD 2011年第7期1381-1387,共7页
柑桔基因工程育种因其具有周期短、效率高、可控性强等优点而成为柑桔育种的重要内容之一。本文就柑桔转基因研究的品种及外植体、柑桔转基因研究所采用的方法、导入柑桔的外源基因进行了综述,最后提出了柑桔遗传转化中存在的问题并对... 柑桔基因工程育种因其具有周期短、效率高、可控性强等优点而成为柑桔育种的重要内容之一。本文就柑桔转基因研究的品种及外植体、柑桔转基因研究所采用的方法、导入柑桔的外源基因进行了综述,最后提出了柑桔遗传转化中存在的问题并对柑桔转基因研究进行了展望。 展开更多
关键词 柑桔 转基因 育种
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