把学员队工作的着力点放到跨世纪人才培养上

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作者 姚西英 曾锦川 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 1999年第4期58-59,共2页

新世纪对医学生提出了更高标准，怍为管理学员的各级干部要瞄准目标，改进方法，把工作重点放在学员创新能力、科学精神、全面素质培养上。

关键词 学员队 全面素质培养 人才培养 着力点 科学精神 创新能力 工作重点 医学生 改进方法 干部

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HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨 被引量：9

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作者 蒋建利 姚西英 +3 位作者 周筠 黄勇 张阳 陈志南 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期534-537,共4页

目的　探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法　应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 ... 目的　探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法　应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 +信号调控在此过程的作用。结果　HAb18G/CD14 7分子的高表达明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,分泌总量升高 ( 30 .4 5± 3.4 1) % (P <0 .0 1) ,而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化。细胞内Ca2 +库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染 772 1细胞可有效诱导MMP 2和MMP 9的分泌与活化 ,较对照组升高 ( 5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ,其诱导作用可受到细胞内Ca2 +调节抑制剂S 亚硝基 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制 ,而HAb18G/CD14 7的高表达则抑制了以上细胞内Ca2 +信号通路对MMP分泌和活化的调节作用 ,使转染的T772 1细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态。结论　全长的HAb18G/CD14 7分子可通过抑制细胞内Ca2 +信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 肿瘤细胞 培养的 SMMC-7721细胞 基质金属蛋白酶类 HAB18G/CD147 钙离子通道

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降低mRNA翻译起始区的稳定性原核非融合表达HAb18GEF 被引量：9

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作者 张思河 邢金良 +1 位作者 姚西英 陈志南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期175-180,共6页

为在大肠杆菌中非融合表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 (HAb18GEF) ,将HAb18GEF基因的cDNA插入原核表达载体pET2 1a +。通过计算机辅助设计 ,对重组的HAb18GEF pET2 1a +的mRNA翻译起始区 (TIR)的二级结构和密码子偏性同时进行预测。... 为在大肠杆菌中非融合表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 (HAb18GEF) ,将HAb18GEF基因的cDNA插入原核表达载体pET2 1a +。通过计算机辅助设计 ,对重组的HAb18GEF pET2 1a +的mRNA翻译起始区 (TIR)的二级结构和密码子偏性同时进行预测。结果发现其存在稳定的茎环结构和许多稀有密码子。通过优化二级结构和优化密码子偏性二种策略分别来降低HAb18GEF pET2 1a +的mRNA翻译起始区 (TIR)的稳定性。在不改变氨基酸序列的前提下 ,利用密码子的简并性 ,通过非连续定点突变实现这两种优化。将突变前后的重组子经酶切鉴定和测序验证后 ,转化感受态JM10 9 DE3宿主菌后 ,随机挑菌 3 7℃下用IPTG诱导表达。SDS PAGE、间接ELISA、Westernblot和细胞分级分离法分析这些重组子的诱导表达情况。RNAdotblot对比分析优化前后目的基因mRNA的量。结果证明 ,成功地构建了HAb18GEF pET2 1a +及其二种优化突变体。仅优化TIR区二级结构或仅优化TIR区密码子偏性均能实现HAb18GEF蛋白的非融合表达 ,而未优化的重组子不表达任何HAb18GEF。非融合表达产物在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在 ,高达 2 9 3 %。由于过表达和细胞渗漏 ,培养基和周质腔中也可检测到少许的HAb18GEF。优化二级结构和优化密码子偏性二种策略的HAb18GEF的非融合? 展开更多

关键词 MRNA 翻译起始区 非融合表达 HAbl8G胞外区 二级结构 密码子偏性 肝癌 粘附分子

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肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达与免疫学活性分析 被引量：6

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作者 邢金良 王永庆 +2 位作者 杨向民 姚西英 陈志南 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第12期1057-1060,共4页

目的 :利用大肠杆菌高效表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 ,并分析其与相应抗体的结合活性 ,进而明确表达产物用于筛选基因工程抗体的可行性 .方法 :用PCR技术扩增出HAb18G胞外区基因片段 ,克隆入原核表达载体pGEX 4T 3中 ,筛选及鉴定... 目的 :利用大肠杆菌高效表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 ,并分析其与相应抗体的结合活性 ,进而明确表达产物用于筛选基因工程抗体的可行性 .方法 :用PCR技术扩增出HAb18G胞外区基因片段 ,克隆入原核表达载体pGEX 4T 3中 ,筛选及鉴定阳性重组子 ,IPTGv诱导表达后对表达产物进行纯化及复性等处理 ,同时利用SDS PAGE ,Western Blot以及ELISA等方法检测蛋白表达情况及其免疫学特性 .结果 :成功构建了肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达载体 pGEX 4T 3/HAb18GE ,并在大肠杆菌中成功实现高效融合表达 .表达蛋白Mr 4 6 0 0 0 ,表达量约占菌体总蛋白量的 4 3% ,表达产物主要以包涵体形式为主 .另外 ,表达蛋白在变性和非变性的条件下均可以与HAb18GmAb特异性结合 .结论 :原核融合表达的HAb18G胞外区片段可以替代天然的HAb18G蛋白 ,以用做抗原来筛选新型的基因工程抗体 . 展开更多

关键词 肝肿瘤 抗原 肿瘤 胞外区 融合表达

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PMA诱导的THP-1细胞分化过程中MMP-9及MMP-2的表达与细胞侵蚀性的关系 被引量：3

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作者 周筠 朱平 +4 位作者 蒋建利 陈志南 姚西英 贾俊峰 樊春梅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期256-257,260,共3页

　目的: 应用单核细胞THP -1株建立单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型, 并探讨THP- 1细胞分化过程中基质金属蛋白酶 9(MMP -9)及基质金属蛋白酶 2 (MMP -2)的表达与细胞侵蚀性的关系以及巨噬细胞在类风湿关节炎 (RA)发病机制中的作用。... 　目的: 应用单核细胞THP -1株建立单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型, 并探讨THP- 1细胞分化过程中基质金属蛋白酶 9(MMP -9)及基质金属蛋白酶 2 (MMP -2)的表达与细胞侵蚀性的关系以及巨噬细胞在类风湿关节炎 (RA)发病机制中的作用。方法: 用乙酸肉豆蔻佛波酯 (PMA) 诱导THP- 1细胞向成熟的单核 巨噬细胞分化后, 采用倒置显微镜观察分化细胞的形态学变化。用流式细胞术测定细胞表面特异性抗原CD14的表达。采用明胶酶谱 (gelatin- zymogram)分析法测定分化前后THP- 1细胞中MMP -9和MMP- 2的表达。采用侵蚀性小室 (BoydenChamber -Matrigel人工重组基底膜 )法, 观察分化前后的THP- 1细胞侵蚀性的变化。结果: THP- 1细胞向单核 巨噬细胞分化过程中, 细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁, 且出现CD14的高表达。分化后的THP- 1细胞中MMP -9和MMP- 2的表达明显增多, 侵蚀性明显增强。结论:建立了THP- 1单核细胞的体外分化模型。该细胞在分化过程中, MMP- 9和MMP -2的表达增多、侵蚀性增强, 为巨噬细胞在RA发病机制的作用提供了一定的实验依据。 展开更多

关键词 单核细胞 乙酸肉豆蔻佛波醇 细胞分化 基质金属蛋白酶 侵蚀性

原文传递

人鼠嵌合Fab抗体通用表达载体的构建和抗人肝癌相关抗原HAb18G嵌合Fab抗体的表达 被引量：2

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作者 邢金良 杨向民 +3 位作者 张思河 姚西英 梁瑞安 陈志南 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第2期271-275,共5页

目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Cκ基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体... 目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Cκ基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体pComb3C.然后将扩增的mAbHAb18的VL和VH基因分别组装到通用表达载体中,酶切去除gⅢ片段后,连接成为HAb18嵌合Fab抗体的分泌型表达载体pComb3C/cFab.转化大肠杆菌后诱导其表达,通过ELISA检测产物的表达和定位.最后,利用亲合层析纯化表达产物,进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的亲和力和特异性.结果:测序及酶切鉴定表明,人IgG3的CHl和Ck基因正确插入到pComb3中.大小分别为324bp和333bp,同时mAbHlAb18的嵌合Fab基因也分别获得正确组装和表达.表达产物的分子质量约为45ku,主要位于周质腔中.另外,ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物含有人的抗体片段,并具有与相应抗原特异结合的活性,亲和力约为亲本抗体的10%.结论:成功构建了人鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体并制备了抗人肝癌小分子嵌合Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础. 展开更多

关键词 鼠 FAB抗体 基因表达 载体 肝癌 抗原HAb18G FAB抗体 肿瘤

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稳定表达肝癌相关抗原HAb18G/CD147成纤维细胞株的建立及其意义 被引量：2

7

作者 黄勇 蒋建利 +3 位作者 周筠 姚西英 窦科峰 陈志南 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第8期673-676,共4页

目的 :探讨将HAb1 8G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/ 3T3的可行性及其意义 .方法 :将含有肝癌相关抗原HAb1 8G全长cDNA的真核表达载体 pcDNA3.0 /HAb1 8G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株... 目的 :探讨将HAb1 8G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/ 3T3的可行性及其意义 .方法 :将含有肝癌相关抗原HAb1 8G全长cDNA的真核表达载体 pcDNA3.0 /HAb1 8G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株t3T3;利用流式细胞仪、间接免疫荧光染色方法鉴定目的蛋白转染情况 ;RT PCR琼脂糖电泳、明胶酶谱分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后HAb1 8G刺激 3T3细胞分泌基质金属蛋白酶 (MMP 2、MMP 9)的情况 .结果 :利用脂质体介导法将HAb1 8G全长cDNA转染入成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪分析、间接免疫荧光染色证实成功建立了稳定表达HAb1 8G的阳性克隆株 ;RT PCR琼脂糖电泳证实t3T3细胞MMP 2、MMP 9mRNA转录水平较未转染前增多 ;明胶酶谱表明t3T3分泌MMPs能力较未转染前增强 .结论 :HAb1 8G全长cDNA可以稳定转染成纤维细胞 ,并能从核酸和蛋白水平诱导基质金属蛋白酶高表达 。 展开更多

关键词 转染 抗原 肿瘤 HAbl8G 成纤维细胞 金属蛋白酶类

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SARS-CoV刺突蛋白受体结合区的表达及高潜在中和性人源抗体的制备 被引量：3

8

作者 李郁 姚西英 +6 位作者 杨勇 陈江浩 张思河 宋斐 包国强 杨向民 陈志南 《科学技术与工程》 2005年第14期939-943,共5页

为表达SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)受体结合区(RBD)并从中筛选高潜在中和性人源抗体,我们用原核表达并纯化的SARS-CoVSRBD进行抗体库的筛选。从多个曾患SARS的健康人血中获得淋巴细胞,PCR扩增全部抗体基因,插入Pcomb3x载体中,构建抗SARS... 为表达SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)受体结合区(RBD)并从中筛选高潜在中和性人源抗体,我们用原核表达并纯化的SARS-CoVSRBD进行抗体库的筛选。从多个曾患SARS的健康人血中获得淋巴细胞,PCR扩增全部抗体基因,插入Pcomb3x载体中,构建抗SARS病毒人源噬菌体抗体库。利用噬菌体表面呈现技术,从中筛选结合SARS-CoVSRBD的人源抗体并用ELISA及Westernblot鉴定阳性克隆,竞争ELISA检测人源抗体阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合情况。结果为构建了库容量6.2×107的免疫Fab噬菌体抗体库,重组率为75%,从中筛选获得9株特异抗SARS-CoVSRBD的人源Fab抗体,ELISA及Westernblot检测均为阳性。其中有一株能阻断SARS-CoVSRBD与其受体ACE2的结合。本实验结果表明:人源抗SARS-CoVSRBD基因工程抗体的获得,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防。 展开更多

关键词 严重急性呼吸综合征(SARS) 刺突蛋白 RBD 噬菌体抗体 FAB

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抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达 被引量：1

9

作者 董红霖 邢金良 +4 位作者 安家泽 杨向民 姚西英 窦科峰 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期342-346,共5页

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPI... 目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 肝癌 单克隆抗体 cFab 毕赤酵母 分泌表达

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扩张柱床吸附层析回收纯化灌流培养生产的单克隆抗体 被引量：1

10

作者 余晓玲 米力 +1 位作者 姚西英 陈志南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期227-232,共6页

用扩张柱床吸附层析技术 ,一步回收纯化连续灌流培养的单克隆抗体。用StreamlineSP阳离子交换介质在固定床柱XK16 2 0上进行条件摸索 ,扩张床柱Streamline 2 5和 50分别用于小规模条件优化和中试规模放大。培养液中的低浓度单抗经此步处... 用扩张柱床吸附层析技术 ,一步回收纯化连续灌流培养的单克隆抗体。用StreamlineSP阳离子交换介质在固定床柱XK16 2 0上进行条件摸索 ,扩张床柱Streamline 2 5和 50分别用于小规模条件优化和中试规模放大。培养液中的低浓度单抗经此步处理 ,浓缩 10倍以上 ,纯度提高 5～ 7倍 ,回收率 >90 % ,制备周期比固定柱床层析缩短一半以上。根据培养液中单抗浓度的不同 ,一次处理量为 18～ 50L ,纯化规模由实验室水平 (40 0mg)扩大至中试水平(2g) ,生产成本和工艺复杂性大为降低。应用扩张柱床吸附层析技术 ,建立单克隆抗体回收纯化工艺 ,具有经济、简便。 展开更多

关键词 扩张柱床吸附层析技术 纯化工艺 灌流培养 单克隆抗体 培养液

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免疫亲和层析纯化大肠癌相关抗原 被引量：1

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作者 杨勇 李郁 +5 位作者 王贤辉 商澎 汪莉 骞爱荣 姚西英 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期348-351,共4页

目的 :从培养的大肠癌细胞Hce 86 93中分离纯化并鉴定大肠癌相关抗原。方法 :利用流式细胞术选择高表达大肠癌相关抗原的大肠癌细胞系 ,分别用单去污及三去污裂解液裂解细胞。然后用 5株抗大肠癌单克隆抗体 (mAb)CYL 1～CYL 5进行Wester... 目的 :从培养的大肠癌细胞Hce 86 93中分离纯化并鉴定大肠癌相关抗原。方法 :利用流式细胞术选择高表达大肠癌相关抗原的大肠癌细胞系 ,分别用单去污及三去污裂解液裂解细胞。然后用 5株抗大肠癌单克隆抗体 (mAb)CYL 1～CYL 5进行Westernblot,分析与大肠癌细胞结合反应最强的mAb。以此mAb作为配基进行亲和层析纯化大肠癌相关抗原 ,纯化结果利用Westernblot法进行鉴定。结果 :大肠癌细胞系Hce 86 93上相关抗原的表达量最高 ;抗大肠癌mAbCYL 2与Hce 86 93的结合力最强。纯化所获与CYL 2特异结合的大肠癌相关抗原 ,Mr 约为 13× 10 3 。该抗原由Mr 为 6 0× 10 3 和70× 10 3 两种亚基组成。结论 :利用mAbCYL 2进行亲和层析 ,从大肠癌细胞系Hce 86 93中获得纯化的肿瘤相关抗原。 展开更多

关键词 大肠癌抗原 亲和色谱法 单克隆抗体

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抗人大肠癌抗体CAb-1 Fab基因的克隆、表达和鉴定 被引量：1

12

作者 杨向民 邢金良 +2 位作者 姚西英 张思河 陈志南 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第19期1768-1771,共4页

目的 :从杂交瘤细胞中克隆mAbCAb 1所编码Fab抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行表达和鉴定 .方法 :采用RT PCR方法 ,扩增mAbCAb 1的Fd片段和全长κ链基因 ,分别克隆到T载体后进行序列测定和分析 .依次亚克隆两个基因到噬粒 pComb3中 ,去除... 目的 :从杂交瘤细胞中克隆mAbCAb 1所编码Fab抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行表达和鉴定 .方法 :采用RT PCR方法 ,扩增mAbCAb 1的Fd片段和全长κ链基因 ,分别克隆到T载体后进行序列测定和分析 .依次亚克隆两个基因到噬粒 pComb3中 ,去除该载体上的 gIII基因 ,构建成分泌表达载体Fd L/pComb3.转化XL1 BlueE .coli菌株 ,IPTG诱导表达 .采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的特异性 .结果 :克隆了大肠癌mAbCAb 1的Fab基因 ,并在E .coli中获得表达 .产物CAb 1Fab具有与大肠癌细胞株SW4 80特异结合的活性 .结论 :成功构建了在E .coli中表达抗人大肠癌mAbCAb 1的小分子单价Fab抗体的载体 . 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 FAB抗体 克隆 表达

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细胞生物学讨论课教学改革尝试 被引量：5

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作者 蒋建利 刘宏颀 +3 位作者 边惠洁 姚西英 张思河 陈志南 《西北医学教育》 2004年第1期56-57,共2页

为了激发学员学习细胞生物学的积极性,加强全面素质教育,提高教学质量,我们组织了细胞生物学讨论课,并进行了问卷调查,结果显示,学员增强了对细胞生物学的学习兴趣,同时综合分析能力也得到了提高,并在学习过程中建立了互动式学习模式.

关键词 细胞生物学 讨论课 教学改革 素质教育 问卷调查

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对生物医学研究生开设生物医学实验安全课程的必要性探讨 被引量：17

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作者 蒋建利 姚西英 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 2004年第1期69-71,共3页

通过对当前生物医学发展与生物安全现状分析,探讨在生物医学研究生课程中设置生物医学实验安全课程的必要性.

关键词 实验安全 课程 必要性 开设 现状分析 生物医学研究 生物安全 发展

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同源比较法克隆单抗CAb-1重链可变区基因

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作者 杨向民 姚西英 +3 位作者 邢金良 张思河 冯媛 陈志南 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期382-385,共4页

目的获得抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区VH的准确基因。方法结合生物信息学同源比较分析,利用高兼并的FR15′端处引物扩增的单抗CAb-1的VH基因,并与数据库中序列比对,在同源性最高的抗体序列的信号肽处二次设计引物,用RT-PCR法获得抗体... 目的获得抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区VH的准确基因。方法结合生物信息学同源比较分析,利用高兼并的FR15′端处引物扩增的单抗CAb-1的VH基因,并与数据库中序列比对,在同源性最高的抗体序列的信号肽处二次设计引物,用RT-PCR法获得抗体基因VH的准确序列。结果选定了与已知抗体VH高度同源的序列进行引物设计。凝胶电泳可见预期大小DNA条带。经测序表明,配对于信号肽处的扩增产物不仅与配对于抗体可变区FR1的结果一致,而且也纠正了配对于CAb-1的VH的FR1的兼并引物所引入的氨基酸突变。结论所优化设计的引物能够扩增完整的抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区基因,为小分子工程抗体改造奠定了基础。 展开更多

关键词 重链可变区 兼并引物 FR1区 同源序列 可变区基因 同源比较 单抗 比较法 RT-PCR法 抗体基因

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抗人HAb18G分子单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的分泌表达

16

作者 邢金良 杨向民 +2 位作者 王永庆 姚西英 陈志南 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期479-482,共4页

目的 :构建抗人HAb18G分子单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 :通过连接肽 (Gly4Ser) 3基因序列将已成功克隆的抗人肝癌单抗HAb18轻、重链可变区基因拼接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并在 5′和 3′端引入相应的酶切位点 ,克... 目的 :构建抗人HAb18G分子单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 :通过连接肽 (Gly4Ser) 3基因序列将已成功克隆的抗人肝癌单抗HAb18轻、重链可变区基因拼接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并在 5′和 3′端引入相应的酶切位点 ,克隆至改造的分泌性表达载体pCANTAB 5His之中 ,转化到E coliHB2 15 1中进行诱导表达。亲和层析纯化表达蛋白后 ,以SDS PAGE电泳、Westernblot及ELISA等方法分析检测表达产物。结果 :经限制性酶切鉴定及DNA测序分析 ,证实基因构建正确。SDS PAGE电泳和Westernblot分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达。表达产物的相对分子质量 (Mr)为 31kD ,与理论预期值相符 ,并且可与相应的抗原特异结合。结论 :成功实现了抗人HAb18G分子单链抗体的原核分泌表达 ,为其在人肝癌诊治中的进一步应用奠定了基础。 展开更多

关键词 抗人HAbl8G分子 单链抗体 基因 大肠杆菌 分泌表达

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扩张柱床吸附层析与固定柱床层析纯化单克隆抗体的比较

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作者 余晓玲 米力 +1 位作者 姚西英 陈志南 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第1期61-69,共9页

为满足Ⅰ类新药二期临床的药品需求量 ,单抗生产由实验室规模扩大到中试规模 ,在目标产品的下游纯化工艺中 ,采用扩张柱床吸附技术代替一期临床实验室规模方法中的澄清、浓缩、和最初的疏水层析 ,其后的纯化步骤保持不变。由于采用新的... 为满足Ⅰ类新药二期临床的药品需求量 ,单抗生产由实验室规模扩大到中试规模 ,在目标产品的下游纯化工艺中 ,采用扩张柱床吸附技术代替一期临床实验室规模方法中的澄清、浓缩、和最初的疏水层析 ,其后的纯化步骤保持不变。由于采用新的纯化路线 ,使得制备周期缩短 2 3,处理能力由 1 0 0ml小鼠腹水扩大至 1 8～ 5 0L杂交瘤细胞培养液 ,回收率提高2 0 %以上 ,并很容易根据需要线性放大规模 ,为单抗的的产业化提供了更为简便和高效的下游纯化模式。 展开更多

关键词 扩张柱床吸附层析 固定柱床层析 纯化 单克隆抗体 比较 中试规模

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抗人肝癌单克隆抗体嵌合轻链在巴氏毕赤酵母的高效分泌表达

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作者 董红霖 邢金良 +4 位作者 杨向民 姚西英 李郁 窦科峰 陈志南 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第8期734-736,共3页

目的: 通过整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab的嵌合轻链.方法: 将抗人肝癌mAbcFab/HAb18原核表达载体pET32a/cFab中的cL亚克隆到酵母表达载体pPIC9K,构建成重组质粒pPIC9K/cL测序鉴定.重组质粒pPIC9K/cL整合到酵母菌GS11... 目的: 通过整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab的嵌合轻链.方法: 将抗人肝癌mAbcFab/HAb18原核表达载体pET32a/cFab中的cL亚克隆到酵母表达载体pPIC9K,构建成重组质粒pPIC9K/cL测序鉴定.重组质粒pPIC9K/cL整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418筛选得到高拷贝转化子及Mut表型鉴定后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果: 该系统成功表达了抗人肝癌mAbHAb18cFab的嵌合轻链,表达水平为22mg/L;WesternBlotting证实,表达产物具有良好的HAb18GE结合活性和特异性.结论: 嵌合轻链/HAb18在巴氏毕赤酵母获得成功表达,为高效分泌表达cFab抗体奠定了基础. 展开更多

关键词 肝肿瘤 抗体 单克隆 嵌合轻链 毕赤酵母 分泌表达

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教学法五喻

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作者 刘宏颀 徐静 +1 位作者 姚西英 陈志南 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 2002年第3期206-206,208,共2页

本文从细胞生物学教学实践出发,论述了贯穿教学全过程的教学方法,以"钓鱼"作比喻,从五个方面探讨了基础医学教育改革的有关问题,涉及教学方法指导、学习目标确定、学习条件完善、学习兴趣培养及学习成果检阅等.

关键词 教学方法 教学改革 细胞生物学 基础医学教育

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HAb18G/CD147真核荧光蛋白的表达及鉴定

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作者 库晓明 田蓉 +4 位作者 杨向民 李郁 谬成功 姚西英 陈志南 《科学技术与工程》 2006年第14期2024-2027,共4页

构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22—50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用。通过PCR及OverlappingPCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJ... 构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22—50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用。通过PCR及OverlappingPCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJM109,构建含有肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及E51的真核荧光蛋白表达载体。并经限制性酶切及序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染COS-7细胞,进行瞬时表达;荧光显微镜观察EGFP表达,通过流式细胞术检测蛋白的表达情况,明胶酶谱法鉴定其功能。成功地构建了真核荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,并经限制性酶切及序列分析证明外源基因插入正确;流式细胞术鉴定该蛋白表达正确;功能实验证实缺失片段E51不具有诱导成纤维细胞分泌MMPs的功能。结果显示HAb18G/CD147基因第22—50位氨基酸与其刺激成纤细胞分泌MMP和功能有密切关系。实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 HAB18G/CD147 EGFP 肝密相关抗原

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