重组肿瘤坏死因子-α抗血清对大鼠实验性结肠炎的影响 被引量：1

1

作者 姜小丹 尹丙姣 +3 位作者 石文芳 冯玮 徐勇 李卓娅 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期281-283,共3页

目的探讨灌胃给予肿瘤坏死因子α(TNFα)多克隆抗体对溃疡性结肠炎的作用。方法以50mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)经肛门注入大鼠肠腔,复制大鼠溃疡性结肠炎模型;用兔抗人TNFα多克隆抗体血清10mg/kg给大鼠灌胃,观察一氧化氮(NO)含量、髓过... 目的探讨灌胃给予肿瘤坏死因子α(TNFα)多克隆抗体对溃疡性结肠炎的作用。方法以50mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)经肛门注入大鼠肠腔,复制大鼠溃疡性结肠炎模型;用兔抗人TNFα多克隆抗体血清10mg/kg给大鼠灌胃,观察一氧化氮(NO)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性及TNFα在大鼠溃疡性结肠炎组织中的表达。结果抗TNFα多克隆抗体治疗可明显减轻溃疡性结肠炎的病理改变,抑制局部结肠组织NO的产生、MPO活性以及TNFα表达。结论抗TNFα血清通过中和TNFα,可抑制溃疡性结肠炎结肠组织表达TNFα及炎性介质的释放,从而减轻溃疡性结肠炎的病理损伤。 展开更多

关键词 抗体 肿瘤坏死因子 溃疡性结肠炎 肿瘤坏死因子-Α

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非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立

2

作者 姜小丹 吴群 +3 位作者 熊平 冯玮 郑芳 龚非力 《世界肿瘤杂志》 2005年第1期16-17,20,共3页

目的 建立非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型。方法常规培养NK92细胞和猪内皮细胞(PEC)，利用MTT法检测NK92细胞对PEC细胞的杀伤效应，通过β-hexosaminidase释放实验显示杀伤过程中，NK92细胞的胞吐量。结果效靶比... 目的 建立非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型。方法常规培养NK92细胞和猪内皮细胞(PEC)，利用MTT法检测NK92细胞对PEC细胞的杀伤效应，通过β-hexosaminidase释放实验显示杀伤过程中，NK92细胞的胞吐量。结果效靶比为10：1时作用时间6h，NK92细胞的胞吐量最大，对PEC的杀伤率为100％。结论NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立成功。 展开更多

关键词 非何杰金氏淋巴瘤 NK92 细胞模型 异种细胞 细胞杀伤 MTT法检测 内皮细胞 杀伤效应 EC细胞 释放实验 作用时间 杀伤率 PEC 胞吐

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PKA对跨膜型和分泌型TNF-α胞毒效应的影响 被引量：9

3

作者 石文芳 李卓娅 +4 位作者 龚非力 姜小丹 徐勇 熊平 冯玮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期190-192,共3页

目的 :研究PKA对跨膜型TNF α(mTNF α)和分泌型TNF α(TNF α)杀瘤效应的影响。方法 :用TNF生物活性检测方法在体外观察PKA激活剂和抑制剂对二型TNF α杀伤不同肿瘤细胞的影响。结果 :PKA激活剂Forskolin(10 μmol L)和抑制剂H8(15 μm... 目的 :研究PKA对跨膜型TNF α(mTNF α)和分泌型TNF α(TNF α)杀瘤效应的影响。方法 :用TNF生物活性检测方法在体外观察PKA激活剂和抑制剂对二型TNF α杀伤不同肿瘤细胞的影响。结果 :PKA激活剂Forskolin(10 μmol L)和抑制剂H8(15 μmol L)可分别增强和抑制sTNF α对其敏感靶细胞的胞毒活性 ,对其余 4株耐受靶细胞却无逆转作用 ,而且对mTNF α的胞毒效应无任何影响。此外 ,PKA活性增强 ,可使sTNF α介导靶细胞的死亡方式发生改变 ,即坏死比例减少 ,凋亡比例增加。结论 :PKA仅参与sTNF α胞毒作用的信号传导 ,与mTNF α无关 ;且与sTNF 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子Α mTNFα STNFα PKA 细胞凋亡

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重组绿色荧光蛋白-肿瘤坏死因子融合蛋白的表达及应用 被引量：3

4

作者 孙义敏 尹丙姣 +2 位作者 李卓娅 姜小丹 徐勇 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期519-521,534,共4页

目的　为肿瘤坏死因子 α (TNF α)及其受体 (TNFR)的科学研究提供实验工具。方法　用基因克隆技术构建了人TNF α (rhTNF α)及绿色荧光蛋白 (GFP)与人TNF α的融合蛋白 (GFP TNF)的原核表达质粒pET2 8a/rhTNF及 pET2 8a/GFP TNF ,分... 目的　为肿瘤坏死因子 α (TNF α)及其受体 (TNFR)的科学研究提供实验工具。方法　用基因克隆技术构建了人TNF α (rhTNF α)及绿色荧光蛋白 (GFP)与人TNF α的融合蛋白 (GFP TNF)的原核表达质粒pET2 8a/rhTNF及 pET2 8a/GFP TNF ,分别转化大肠杆菌BL2 1;用IPTG诱导重组蛋白的表达 ,超声裂菌 ,包涵体中的rhTNF α和GFP TNF用镍金属螯合层析柱进行纯化 ;用MTT法检测rhTNF α和GFP TNF的生物活性。结果重组表达的rhTNF α及GFP TNF均具有明显的细胞毒效应 ,GFP TNF还具有GFP的绿色荧光特性。结论　rhTNF α和GFP TNF具有生物活性 ,可用于TNF α和TNFR的实验研究。 展开更多

关键词 HTNF-Α 原核表达质粒 TNFR 肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 融合蛋白 细胞毒效应 绿色荧光蛋白(GFP) 绿色荧光蛋白 IPTG 包涵体

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TNF结合肽和TNFR封闭肽的筛选及其鉴定 被引量：4

5

作者 尹丙姣 王晶 +3 位作者 喻明霞 姜小丹 冯玮 李卓娅 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期670-673,677,共5页

目的筛选能与TNF-α结合的环肽(称为TNF结合肽)以及既能与TNFR-Ⅰ结合又不诱导TNFR相关生物学效应的环肽(称为TNFR封闭肽)。方法采用噬菌体随机肽库展示技术分别以hrTNF-α和hrTNFRⅠ为诱饵进行亲和筛选,ELISA方法进行噬菌体特异性鉴定... 目的筛选能与TNF-α结合的环肽(称为TNF结合肽)以及既能与TNFR-Ⅰ结合又不诱导TNFR相关生物学效应的环肽(称为TNFR封闭肽)。方法采用噬菌体随机肽库展示技术分别以hrTNF-α和hrTNFRⅠ为诱饵进行亲和筛选,ELISA方法进行噬菌体特异性鉴定,应用细胞毒抑制实验和RT-PCR技术等进行噬菌体的生物学效应鉴定。根据噬菌体展示肽的DNA序列合成环肽。结果对肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果;5种TNF结合噬菌体克隆(5、6、7、32及38号克隆)和2种TNFR封闭噬菌体(X2、X4号克隆)分别能与TNF-α和TNFR特异性结合,并且均能显著抑制sTNF-α对L929细胞和U937细胞的杀伤作用,TNFR封闭噬菌体不仅本身无促进U937细胞IL-1βmRNA转录的作用,而且还能有效抑制sTNF-α的生物学效应;并且发现X4与32号、X4与38号联用的细胞毒抑制效应均较其单独作用的效果好,其中X4与38号联用的抑制率高达85.3%,显著高于各自单独的抑制作用(P<0.01)。选择32、38和X4号噬菌体克隆进行DNA测序并合成环肽。结论从噬菌体随机环肽库中筛选得到能够抑制sTNF-α生物学功能的TNF结合肽和TNFR封闭肽,为研制TNF相关的多肽类抗炎药物奠定了实验基础。 展开更多

关键词 噬菌体肽库 肿瘤坏死因子-Α 肿瘤坏死因子结合肽 肿瘤坏死因子受体封闭肽

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卡介苗活化的CD1-限制性细胞毒T细胞的抗膀胱癌效应 被引量：1

6

作者 方敏 龚非力 +4 位作者 李卓娅 冯玮 熊平 姜小丹 徐勇 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期242-244,共3页

为研究卡介苗 (BCG)活化的 T细胞亚群在抗膀胱癌效应中的作用 ,通过细胞因子 (IL- 4与 GM- CSF)体外诱导而获得高表达 CD1分子的抗原提呈细胞 ,然后用 BCG抗原致敏抗原提呈细胞以激活各 T细胞亚群 ,比较 BCG活化的 T细胞亚群对膀胱癌细... 为研究卡介苗 (BCG)活化的 T细胞亚群在抗膀胱癌效应中的作用 ,通过细胞因子 (IL- 4与 GM- CSF)体外诱导而获得高表达 CD1分子的抗原提呈细胞 ,然后用 BCG抗原致敏抗原提呈细胞以激活各 T细胞亚群 ,比较 BCG活化的 T细胞亚群对膀胱癌细胞株 T2 4生长抑制效应。结果表明 ,BCG活化的 CD1-限制性 T细胞具有明显的抗瘤活性 ,CD4 + T细胞和γδT也发挥抑制瘤细胞生长的作用。该研究结果提示具有非特异免疫功能的 T细胞亚群在 展开更多

关键词 卡介苗 T细胞亚群 免疫治疗 膀胱癌

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跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序稳定表达细胞株的建立及功能研究

7

作者 秦娜琳 尹丙姣 +5 位作者 王妮丹 朱建华 庞艳 姜小丹 冯玮 李卓娅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期610-613,618,共5页

目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获... 目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获得能稳定表达TNF-ICD细胞株。采用MTT法检测转染细胞对TNF-α的敏感度,比色法检测NO含量,ELISA方法检测NF-κB的活性。结果TNF-ICD基因转染入MCF-7细胞后表达在细胞膜上,并能提高该细胞NF-κB活性,抵抗TNF-α的杀伤,增加其NO产生;应用NF-κB抑制剂PDTC处理后能恢复该细胞对TNF的敏感性。结论获得稳定表达TNF-ICD的MCF-7细胞株,TNF-ICD可能作为TM-TNF-α细胞内的一段活化基序参与TM-TNF-α的反向信号,并通过活化NF-κB,抵抗可溶性TNF-α介导的细胞毒作用,增加NO的产生。 展开更多

关键词 跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序 NF—κB 反向信号 MCF-7细胞

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氨基酸置换增强肿瘤坏死因子受体封闭肽的生物学效应

8

作者 张磊 冯健男 +4 位作者 王晶 熊霞辉 姜小丹 冯玮 李卓娅 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期543-546,共4页

目的增强肿瘤坏死因子受体(TNFR)封闭肽的生物学效应。方法通过计算机模建,模拟并推测提高TNFR封闭肽生物学效应需置换的位点和氨基酸;合成原封闭肽和突变肽;受体竞争抑制结合实验比较原肽与突变肽对绿色荧光蛋白-肿瘤坏死因子融合蛋白(... 目的增强肿瘤坏死因子受体(TNFR)封闭肽的生物学效应。方法通过计算机模建,模拟并推测提高TNFR封闭肽生物学效应需置换的位点和氨基酸;合成原封闭肽和突变肽;受体竞争抑制结合实验比较原肽与突变肽对绿色荧光蛋白-肿瘤坏死因子融合蛋白(GFP-TNF)结合TNFR的竞争抑制效应;细胞毒作用抑制实验比较原肽与突变肽对TNFR的封闭效应。结果受体竞争抑制结合实验结果显示:两种肽均可与GFP-TNF竞争结合U937细胞表面的TNFR。原肽的半数抑制浓度(IC50)为140μg/ml,而突变肽为100μg/ml,提示突变肽的竞争抑制效应高于原肽;细胞毒抑制实验显示:突变肽对于TNF-α杀伤U937细胞的细胞毒作用的抑制率为57%,高于原肽的40%(P<0.01)。结论突变肽的生物学效应强于原肽。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子受体封闭肽 计算机模建

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GFP-TNF融合蛋白的制备及在亲和力研究中的运用

9

作者 张磊 李卓娅 +1 位作者 刘丽江 姜小丹 《江汉大学学报（自然科学版）》 2005年第2期8-10,14,共4页

目的:在TNF的研究中寻找一种取代同位素标记的检测亲和力的方法。方法:表达及纯化GFP-TNF融合蛋白;鉴定GFP-TNF融合蛋白;用GFP-TNF与TNF做TNF受体的竞争结合分析。结果:GFP-TNF与TNF可竞争结合U937细胞表面的TNFR。结论:GFP-TNF有望取代... 目的:在TNF的研究中寻找一种取代同位素标记的检测亲和力的方法。方法:表达及纯化GFP-TNF融合蛋白;鉴定GFP-TNF融合蛋白;用GFP-TNF与TNF做TNF受体的竞争结合分析。结果:GFP-TNF与TNF可竞争结合U937细胞表面的TNFR。结论:GFP-TNF有望取代125I-TNF在TNF的研究中作为检测亲和力的工具。 展开更多

关键词 TNF-Α GFP-TNF 亲和力

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两型TNF-α对HL-60细胞毒效应及其机制研究

10

作者 喻明霞 王晶 +2 位作者 石文芳 姜小丹 李卓娅 《世界肿瘤杂志》 2005年第2期91-93,共3页

目的前期研究表明，膜型TNF-α较分泌型TNF-α具有更强和更广的细胞毒作用，本研究拟进一步研究两型TNF-α介导胞毒效应的差异。方法采用对两型TNF-α反应性不同的HL-60为靶细胞；MTT法检测两型TNF-α对HL-60的胞毒活性；RT-SSCP法检测... 目的前期研究表明，膜型TNF-α较分泌型TNF-α具有更强和更广的细胞毒作用，本研究拟进一步研究两型TNF-α介导胞毒效应的差异。方法采用对两型TNF-α反应性不同的HL-60为靶细胞；MTT法检测两型TNF-α对HL-60的胞毒活性；RT-SSCP法检测p53基因；通过检测荧光素酶报告基因表达水平，反映NF-kB活性的变化。结果TM-TNF可以有效杀伤HL-60，S-TNF则不能。S-TNF诱导HL-60的NF-kB活性升高，TM-TNF则不能诱导HL-60的NF-kB活性升高。同时我们发现HL-60细胞的p53基因是突变的。结论HL-60细胞对S-TNF胞毒作用耐受，对TM-TNF敏感；此种差异可能在于TM—TNF能够有效抑制NF-kB的激活，进而下调突变p53基因，最终导致其抗凋亡效应减弱，杀伤效应增强，其具体机制有待深入研究。 展开更多

关键词 分泌型肿瘤坏死因子-α 膜型肿瘤坏死因子 胞毒效应 P53基因 NF-KB

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TNF受体封闭肽对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响 被引量：6

11

作者 何亚萍 尹丙姣 +4 位作者 李卓娅 徐勇 姜小丹 冯玮 熊平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期385-387,391,共4页

目的 :观察TNF受体封闭肽在体外对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法 :用NBT的方法检测呼吸爆发 ;用RT PCR检测大鼠腹腔巨噬细胞IL 1βmRNA和TNF αmRNA水平 ;用Westernblot检测大鼠腹腔巨噬细胞NF κBp6 5核转位。 结果 :TNF受体封闭... 目的 :观察TNF受体封闭肽在体外对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法 :用NBT的方法检测呼吸爆发 ;用RT PCR检测大鼠腹腔巨噬细胞IL 1βmRNA和TNF αmRNA水平 ;用Westernblot检测大鼠腹腔巨噬细胞NF κBp6 5核转位。 结果 :TNF受体封闭肽可完全拮抗TNF α诱导大鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发 ,明显抑制TNF α诱导的IL 1βmRNA和TNF αmRNA的转录 ,使腹腔巨噬细胞TNF α诱导的NF κBp6 5核转位明显减少。结论 :TNF受体封闭肽在体外能有效抑制TNF α诱导的大鼠腹腔巨噬细胞功能。 展开更多

关键词 TNF受体封闭肽 大鼠 腹腔巨噬细胞功能 影响 RT—PCR检测

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计算机对分大中小货位的自动化仓库一种管理方法

12

作者 姜小丹 《微型机与应用》 1992年第5期37-39,共3页

计算机对自动化仓库进行全面管理,并建立相应的仓库管理信息处理系统,已成为自动化仓库现代化的重要成就和标志。本文就货位管理问题及货位管理的数据文件结构进行了探讨,并给出了初始化框图。

关键词 仓库管理 计算机 货位 自动化仓库

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自动化仓库的发展及展望

13

作者 姜小丹 《北京联合大学学报》 CAS 1994年第3期66-69,共4页

本文论述了自动化仓库的发展、组成及设计技术，详细给出了设计思想和设计步骤，最后指出了自动化仓库发展的前景。

关键词 自动化仓库 货架 堆垛起重机

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死亡结构域沉默子参与两型TNF-α胞毒效应机制的研究 被引量：3

14

作者 朱俊 郑芳 +3 位作者 李琳芸 冯玮 姜小丹 李卓娅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期343-345,共3页

目的　比较两型TNF对肿瘤细胞的胞毒效应与SODD表达关系的异同。方法　应用MTT法检测两型TNF对HL6 0和U937的杀瘤效应。应用RT PCR技术 ,检测HL6 0和U937肿瘤细胞株SODD、TNFR1的表达情况及两型TNF对其影响。结果　对S TNF耐受而对TM TN... 目的　比较两型TNF对肿瘤细胞的胞毒效应与SODD表达关系的异同。方法　应用MTT法检测两型TNF对HL6 0和U937的杀瘤效应。应用RT PCR技术 ,检测HL6 0和U937肿瘤细胞株SODD、TNFR1的表达情况及两型TNF对其影响。结果　对S TNF耐受而对TM TNF敏感的HL6 0细胞内接头分子SODD表达水平明显高于TNFRI表达水平 ,而对两型TNF均敏感的U937细胞内SODD表达相对极低于TNFRI的表达 ;S TNF对两种细胞内SODD的表达无影响 ,而TM TNF可下调胞内SODD表达水平。结论　肿瘤细胞内SODD的表达水平与TNF的杀伤效应呈负相关 ,TM TNF可下调SODD的表达从而比不能下调SODD表达的S TNF有更广的杀瘤谱 ,对SODD表达的影响不同可能是两型TNF杀瘤效应存在差异的原因之一。 展开更多

关键词 TNF-Α 细胞毒效应 SODD TNFR1 信号转导

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TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和TNFR Ⅰ封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用 被引量：3

15

作者 黄丽霞 尹丙姣 +4 位作者 王晶 梁慧芳 曾庆岭 姜小丹 李卓娅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期776-780,共5页

目的:研究比较TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白(TNFR1BP/hIgGFc)和TNFR Ⅰ封闭肽(TNFR1BP)生物学特性及功能,为开发治疗TNF-α相关疾病的肽类药物奠定基础。方法:通过流式细胞术和细胞毒抑制实验检测TNFR1BP/hIgGFc和人工合成TNFR1BP对TNF... 目的:研究比较TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白(TNFR1BP/hIgGFc)和TNFR Ⅰ封闭肽(TNFR1BP)生物学特性及功能,为开发治疗TNF-α相关疾病的肽类药物奠定基础。方法:通过流式细胞术和细胞毒抑制实验检测TNFR1BP/hIgGFc和人工合成TNFR1BP对TNFRⅠ的封闭作用;通过RT-PCR、激光共聚焦显微镜技术检测融合蛋白和封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用。结果:流式细胞术证实TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和人工合成TNFR Ⅰ封闭肽二者均能抑制TNF-α与细胞膜表面TNFR1的结合;RT-PCR结果显示二者均可明显抑制TNF-α诱导的IL-1β及IL-8等促炎细胞因子的mRNA表达;激光共聚焦显微镜显示二者均可明显拮抗TNF-α诱导的人单核细胞NF-κB核转位的发生。结论:TNFR1BP/hIgGFc和TNFR1BP均可与细胞表面TNFR Ⅰ结合,拮抗TNF-α介导的生物学效应。 展开更多

关键词 TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白 TNFR Ⅰ封闭肽 TNF-Α

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我国普米族、傈僳族、怒族和纳西族补体第3成分遗传多态性的研究 被引量：3

16

作者 王亚雷 肖诗艺 +1 位作者 黄永建 姜小丹 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期629-630,共2页

使用琼脂糖凝胶高压电泳及抗 C3血清免疫固定技术对我国云南地区 4个少数民族 :普米族 4 2例、傈僳族93例、怒族 10 0例及纳西族 10 0例无关个体血样进行补体第 3成分遗传多态性的检测。结果发现各少数民族基因频率分别为 :普米族 C3S0 ... 使用琼脂糖凝胶高压电泳及抗 C3血清免疫固定技术对我国云南地区 4个少数民族 :普米族 4 2例、傈僳族93例、怒族 10 0例及纳西族 10 0例无关个体血样进行补体第 3成分遗传多态性的检测。结果发现各少数民族基因频率分别为 :普米族 C3S0 .95 2 ,C3F0 .0 4 8;傈僳族 C3S0 .995 ,C3F0 .0 0 6 ;怒族 C3S0 .95 5 ,C3F0 .0 4 5 ;纳西族 C3S0 .96 5 ,C3F 0 .0 35 ;未发现罕见型。通过遗传距离 F的比较 ,表明汉族与傈僳族之间 ,普米族、纳西族和怒族相互之间遗传差异较小 ,而汉族与普米族、纳西族、怒族相互之间 ,傈僳族与普米族、纳西族。 展开更多

关键词 少数民族 补体第3成分 多态性 中国

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利用噬菌体环肽库筛选可溶性肿瘤坏死因子受体1的特异性结合肽 被引量：1

17

作者 熊霞辉 石文芳 +4 位作者 张磊 李清芬 姜小丹 龚非力 李卓娅 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期134-137,共4页

目的　应用噬菌体环肽库筛选肿瘤坏死因子α(TNF- α) 的模拟肽, 为研制模拟TNF -α的新型多肽药物奠定基础。方法　用亲和纯化的可溶性TNF受体1 (sTNFR -1) 作为筛选配基, 对噬菌体随机环肽库进行亲和筛选, 利用胞毒效应进行生物学筛... 目的　应用噬菌体环肽库筛选肿瘤坏死因子α(TNF- α) 的模拟肽, 为研制模拟TNF -α的新型多肽药物奠定基础。方法　用亲和纯化的可溶性TNF受体1 (sTNFR -1) 作为筛选配基, 对噬菌体随机环肽库进行亲和筛选, 利用胞毒效应进行生物学筛选, 并进一步对某些阳性克隆进行序列测定和分析。结果　经3 轮筛选, 每轮的投入/产出比逐轮提高, 说明筛选具有良好的富集效果。并得到模拟跨膜型TNF -α(TM -TNF- α)、可溶型TNF -α(S- TNF -α) 的模拟肽和拮抗TNF作用的sTNFR 1 封闭肽。获得了TM -TNF -α的模拟肽的氨基酸序列的基序。结论　获得的模拟TM -TNF- α生物学效应的sTNFR -1结合肽, 可望发展成为一种新的TNF- α肽类新药。 展开更多

关键词 噬菌体环肽库 跨膜型肿瘤坏死因子 分泌型肿瘤坏死因子 胞毒效应

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跨膜型TNF-α突变体(Δ-28)的正向和反向信号对U937细胞的作用 被引量：1

18

作者 谌启政 刘娜 +4 位作者 王晶 姜小丹 徐勇 冯玮 李卓娅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期192-194,共3页

目的观察跨膜段突变TM-TNF-α(Δ-28mTM-TNF-α)正反向信号诱导U937促炎因子表达的影响。方法Δ-28mTM-TNF-α质粒分别转染COS-7,检测表达的Δ-28mTM-TNF-α诱导U937产生NO的量。同样Δ-28mTM-TNF-α质粒转染U937,sTNFRI激活反向信号后... 目的观察跨膜段突变TM-TNF-α(Δ-28mTM-TNF-α)正反向信号诱导U937促炎因子表达的影响。方法Δ-28mTM-TNF-α质粒分别转染COS-7,检测表达的Δ-28mTM-TNF-α诱导U937产生NO的量。同样Δ-28mTM-TNF-α质粒转染U937,sTNFRI激活反向信号后,检测U937促炎因子IL-8以及IL-1β的mRNA转录水平。结果Δ-28mTM-TNF-α不能够诱导U937产生NO,但被激活并传递反向信号促使U937的促炎因子转录和表达。结论跨膜段突变抑制了TM-TNF-α正向信号但不影响反向信号的传递。 展开更多

关键词 跨膜型TNF-Α 正向信号 反向信号 U937

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TM-TNF-α模拟肽P18和S-TNF模拟肽P12的体外生物学活性的鉴定

19

作者 熊霞辉 李清芬 +6 位作者 石文芳 冯玮 姜小丹 徐勇 熊平 龚非力 李卓娅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期72-74,共3页

目的:获得具有生物学活性的跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)模拟肽。方法:以噬菌体扩增及PEG/NaCl沉淀法, 大量制备所需的噬菌体展示肽。采用细胞毒实验、RT-PCR、Western blot印迹、凋亡检测实验分别检测TM-TNF-α模拟肽的杀瘤效应、对SODD m... 目的:获得具有生物学活性的跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)模拟肽。方法:以噬菌体扩增及PEG/NaCl沉淀法, 大量制备所需的噬菌体展示肽。采用细胞毒实验、RT-PCR、Western blot印迹、凋亡检测实验分别检测TM-TNF-α模拟肽的杀瘤效应、对SODD mRNA表达水平、NF-κB核转位及致死亡方式的影响。结果:噬菌体展示肽P12和P18分别能模拟sTNF-α和 TM-TNF-α的生物学活性。结论:获得能模拟TM-TNF-α的生物学活性的展示肽,为TM-TNF-α用于临床抗瘤治疗提供新线索。 展开更多

关键词 噬菌体展示 跨膜型TNF-Α 凋亡 SODD NF-κB

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TNFR1BP/IgGFc融合蛋白载体的构建、表达及其生物学活性研究

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作者 黄丽霞 尹丙姣 +4 位作者 王晶 梁慧芳 曾庆岭 姜小丹 李卓娅 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期561-564,F0002,共5页

目的构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)封闭肽与IgGFc融合蛋白的真核表达载体,检测其表达和生物学活性。方法将合成的TNFR1封闭肽(TNFR1BP)基因片段插入质粒pIG/3C,构建真核表达载体pIG/3C-TNFR1BP;脂质体法将重组载体转染COS-7细胞;ELISA和... 目的构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)封闭肽与IgGFc融合蛋白的真核表达载体,检测其表达和生物学活性。方法将合成的TNFR1封闭肽(TNFR1BP)基因片段插入质粒pIG/3C,构建真核表达载体pIG/3C-TNFR1BP;脂质体法将重组载体转染COS-7细胞;ELISA和Western blot法检测转染细胞的培养上清中TNFR1BP/IgGFc融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验、细胞毒抑制实验检测融合蛋白对TNFR1的封闭作用。结果经PCR和核苷酸序列测定证实TNFR1BP基因正确插入质粒pIG/3C。ELISA检测证实,在转染细胞培养上清中有融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验和细胞毒抑制实验证实融合蛋白能结合L929细胞表面的TNFR1,并能抑制分泌型肿瘤坏死因子α(sTNF-α)介导的细胞毒作用。结论成功构建并实现TNFR1BP/IgGFc融合蛋白真核表达;体外实验证实此融合蛋白可通过与细胞表面TNFR1结合,从而拮抗sTNF-α介导的生物学效应。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子-Α 真核表达 IgGFc融合蛋白 封闭肽

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