目的运用网络药理学联合分子对接探讨三物白散治疗胃癌的作用机制,通过体外细胞实验对相关靶点作初步验证。方法利用TCMSP数据库获取三物白散的活性成分及潜在靶点;通过Genecards、OMIM、TTD数据库,收集胃癌相关的作用靶点;将三物白散...目的运用网络药理学联合分子对接探讨三物白散治疗胃癌的作用机制,通过体外细胞实验对相关靶点作初步验证。方法利用TCMSP数据库获取三物白散的活性成分及潜在靶点;通过Genecards、OMIM、TTD数据库,收集胃癌相关的作用靶点;将三物白散潜在靶点与胃癌靶点相匹配,获得三物白散抗胃癌的作用靶点,使用STRING数据库对作用靶点进行蛋白互作分析,构建PPI网络,并进行拓扑分析筛选核心靶点;用R语言对作用靶点进行GO生物学过程和KEGG通路富集分析;采用Auto Dock Vina软件对核心靶点与对应活性成分进行分子对接;运用qPCR验证三物白散对胃癌细胞SGC-7901中Caspase-3、Caspase-7作用靶点的调控作用。结果经筛选获得三物白散活性成分17个,三物白散作用靶点84个,经拓扑分析得到12个核心作用靶点,包括TP53、AKT1、MAPK1、JUN、CASP3等。三物白散作用靶点涉及PI3K-AKT、p53、HIF-1、IL-17等多条信号通路,通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、调节缺氧及炎性微环境发挥抗肿瘤作用。分子对接结果表明,活性成分与核心靶点有良好的结合能力。体外实验结果证实,三物白散可上调凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-7的表达,这在一定程度上证实了网络药理学预测及指导实验设计的可靠性。结论本研究结果体现了三物白散多成分、多靶点、多通路的治疗特点,系统地揭示了其抗胃癌的药效物质、核心靶点和信号通路,为后续深入研究作用机制提供参考。展开更多
目的:研究溃结宁膏对HT-29细胞炎症模型的影响并基于microRNA-155(miR-155)/酪氨酸蛋白激酶(janus kinase,JAK)/信号转导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)通路探讨其机制。方法:体外培养HT-29细...目的:研究溃结宁膏对HT-29细胞炎症模型的影响并基于microRNA-155(miR-155)/酪氨酸蛋白激酶(janus kinase,JAK)/信号转导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)通路探讨其机制。方法:体外培养HT-29细胞建立溃疡性结肠炎炎症模型,分为空白对照组、炎症模型组、模型对照组、miR-155 mimics组、miR-155 inhibitor组、穴位敷贴组、柳氮磺吡啶(SASP)组。乳酸脱氢酶法检测细胞损伤,ELISA检测细胞培养液IL-8、IL-6的含量。qRT-PCR检测miR-155、JAK2、STAT3 mRNA的表达,免疫荧光检测细胞因子信号传导抑制蛋白1(suppressor of cytokine signaling,SOCS1)、JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组和模型对照组细胞乳酸脱氢酶释放率,IL-6、IL-8含量,miR-155、JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3 mRNA和蛋白表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,穴位敷贴组细胞乳酸脱氢酶释放率,IL-6、IL-8含量,JAK2/p-JAK2,STAT3/p-STAT3 mRNA和蛋白表达显著减少,miR-155 mRNA表达量显著降低,SOCS1蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-155 mimics组比较,miR-155 inhibitor组细胞中JAK2/p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达显著降低,SOCS1蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:溃结宁膏穴位敷贴可能通过调控miR-155/JAK/STAT信号通路调节HT-29细胞炎症反应。展开更多
文摘目的运用网络药理学联合分子对接探讨三物白散治疗胃癌的作用机制,通过体外细胞实验对相关靶点作初步验证。方法利用TCMSP数据库获取三物白散的活性成分及潜在靶点;通过Genecards、OMIM、TTD数据库,收集胃癌相关的作用靶点;将三物白散潜在靶点与胃癌靶点相匹配,获得三物白散抗胃癌的作用靶点,使用STRING数据库对作用靶点进行蛋白互作分析,构建PPI网络,并进行拓扑分析筛选核心靶点;用R语言对作用靶点进行GO生物学过程和KEGG通路富集分析;采用Auto Dock Vina软件对核心靶点与对应活性成分进行分子对接;运用qPCR验证三物白散对胃癌细胞SGC-7901中Caspase-3、Caspase-7作用靶点的调控作用。结果经筛选获得三物白散活性成分17个,三物白散作用靶点84个,经拓扑分析得到12个核心作用靶点,包括TP53、AKT1、MAPK1、JUN、CASP3等。三物白散作用靶点涉及PI3K-AKT、p53、HIF-1、IL-17等多条信号通路,通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、调节缺氧及炎性微环境发挥抗肿瘤作用。分子对接结果表明,活性成分与核心靶点有良好的结合能力。体外实验结果证实,三物白散可上调凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-7的表达,这在一定程度上证实了网络药理学预测及指导实验设计的可靠性。结论本研究结果体现了三物白散多成分、多靶点、多通路的治疗特点,系统地揭示了其抗胃癌的药效物质、核心靶点和信号通路,为后续深入研究作用机制提供参考。
