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去除雷达木干扰输血相容性检测的方法及输血疗效评估对比 被引量:1
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作者 张警丹 孙佳丽 +3 位作者 杜瑞辉 李鹏 孙丽妲 李强 《中国输血杂志》 CAS 2024年第2期151-157,共7页
目的探讨DARA-Fab片段处理经抗CD38单克隆抗体雷达木(daratumumab,DARA)治疗后的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者输血相容性检测方法的可行性,并通过对比二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)方法评估其输血疗效。方法将DARA使用Pierc... 目的探讨DARA-Fab片段处理经抗CD38单克隆抗体雷达木(daratumumab,DARA)治疗后的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者输血相容性检测方法的可行性,并通过对比二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)方法评估其输血疗效。方法将DARA使用PierceFab制备试剂盒制备成DARA-Fab片段后,确认不同体积(5、10、15、30μL)DARA-Fab片段对于抗筛细胞和抗体鉴定细胞的中和效果;DARA-Fab片段和明确相应抗原的抗筛细胞与对应的单抗试剂为试验组,以添加同体积的生理盐水为对照组孵育后离心;各选取20名经DARA治疗后的MM患者,分别使用DARA-Fab封闭RBC表面抗原和与DTT破坏红细胞表面抗原的方法来进行输血相容性检测,对其输血前后实验室指标进行统计分析,并比较2种配血方法。结果15、30μL DARA-Fab片段与抗筛细胞与混有DARA的血清孵育离心后结果为阴性,5、10μL DARA-Fab结果为阳性,15μL DARA-Fab处理抗体鉴定细胞(2、3、4、5、7、9、11)后为阴性,抗体鉴定细胞(1、6、8、10、12)经30μL DARA-Fab片段处理后,结果为阴性;添加DARA-Fab的实验组对MNS系统、Duffy、Kidd、Kell、Lewis、Rh血型系统和对照组结果一致;DARA-Fab片段这20名患者输注RBC后Hb(hemoglobin,Hb)(73.90±1.90)(g/L)比输血前(63.60±1.58)明显提高,统计学差异明显(P<0.01);患者总胆红素(total bilirubin,TBil)(μmol/L)(16.25±3.54 vs 17.87±3.57)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)(μmol/L)(6.31±2.32 vs 7.10±2.80)和间接胆红素(Indirect Bilirubin,I-Bil)(9.94±1.38 vs 10.77±1.22)输注前后无明显差异,无统计学差异(P>0.05)。DTT处理方法与DARA-Fab片段封闭方法的输血前后Hb差值(10.75±1.04 vs 10.30±0.98)、TBil差值(3.31±1.47 vs 3.31±0.55)、DBIL差值(2.76±1.24 vs 2.60±0.83)和I-Bil差值(1.97±0.40 vs 2.82±0.53)无明显差异,无统计学差异(P>0.05)。结论DARA-Fab片段可通过封闭RBC表面CD38抗原,来去除DARA对红细胞输血相容性检测的干扰,这种封闭方法对于红细胞临床常见血型系统的抗原无影响,且通过这种配血方法实验室指标输血疗效明显,与DTT方法的输血疗效无差异。 展开更多
关键词 雷达木 多发性骨髓瘤 输血 二硫苏糖醇
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IL-17A协同GM-CSF和LPS促进骨髓细胞衍生树突状细胞的分化和成熟研究
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作者 刘腾丽 乔赛 +6 位作者 郑佞波 唐莹 赵慧丽 王悦 梁聚友 孙丽妲 白虹(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1477-1480,共4页
目的:探讨IL-17A对小鼠骨髓细胞衍生树突状细胞分化和成熟的影响。方法:分离小鼠骨髓细胞,加入含GM-CSF(20 ng/ml)RPMI1640完全培基培养8 d,诱导小鼠骨髓单个核细胞向DC分化,加入LPS(1μg/ml)继续培养36 h,进一步诱导DC成熟,同时在骨髓... 目的:探讨IL-17A对小鼠骨髓细胞衍生树突状细胞分化和成熟的影响。方法:分离小鼠骨髓细胞,加入含GM-CSF(20 ng/ml)RPMI1640完全培基培养8 d,诱导小鼠骨髓单个核细胞向DC分化,加入LPS(1μg/ml)继续培养36 h,进一步诱导DC成熟,同时在骨髓细胞衍生诱导DC分化及成熟的不同阶段加入不同浓度的rm IL-17A(10、100 ng/ml),采用流式细胞术检测DC表面共刺激分子的表达,ELISA方法检测DC培养上清中IL-12p40和IL-10水平。结果:rm IL-17A可促进GMCSF诱导骨髓细胞衍生DC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,且具有剂量依赖性,其中以高浓度rm IL-17A刺激组的CD40及MHCⅡ表达增加最显著;在LPS诱导DC成熟阶段加入rm IL-17A,骨髓细胞衍生DC共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达均明显增加,并且随着rm IL-17A浓度的增加,CD86和MHCⅡ的表达水平也随之增高;同时与未加rm IL-17A的对照组相比,低浓度rm IL-17A组LPS刺激骨髓细胞衍生DC分泌IL-12p40和IL-10水平均显著增加(P<0.001),高浓度rm IL-17A组IL-12p40水平显著增高(P<0.001),但IL-10水平没有变化。结论:IL-17A可促进GM-CSF诱导的骨髓细胞衍生DC前体细胞表型发展,并能协同LPS诱导骨髓衍生DC的分化和成熟。 展开更多
关键词 IL-17A 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 骨髓衍生树突状细胞 脂多糖
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TLR2、TLR4及MyD88高表达与Cm呼吸道感染肺组织炎症相关 被引量:15
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作者 庞高举 孙丽妲 +6 位作者 姚楠 查晓宇 梁聚友 檀露 张虹 乔赛 白虹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期737-740,共4页
目的:探讨沙眼衣原体呼吸道感染过程中C3H/HeN(C3H)小鼠过度炎症反应的机制。方法:C3H与C57BL/6(C57)小鼠鼻腔吸入1×10~3IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型,使用RT-PCR检测感染后不同时间点小鼠肺组织Tol... 目的:探讨沙眼衣原体呼吸道感染过程中C3H/HeN(C3H)小鼠过度炎症反应的机制。方法:C3H与C57BL/6(C57)小鼠鼻腔吸入1×10~3IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型,使用RT-PCR检测感染后不同时间点小鼠肺组织Toll样受体TLR2、TLR4及转导蛋白MyD88 mRNA的表达。结果:使用1×10~3IFU的Cm呼吸道感染C3H与C57BL/6(C57)诱导小鼠衣原体肺炎,Cm感染在高易感性的C3H小鼠及低易感的C57小鼠均诱导Toll样受体的表达,但在感染后第7天及第14天,高易感的C3H小鼠肺组织中TLR2和TLR4 mRNA的表达均显著高于C57小鼠,尤其TLR2(P<0.001或P<0.05),进一步研究发现Cm呼吸道感染C3H小鼠肺组织My D88mRNA的表达也显著高于C57小鼠,并在感染后第14天仍维持高表达。结论:Cm呼吸道感染诱导TLR2、TLR4及MyD88在高易感的C3H小鼠肺组织高表达,可能与C3H小鼠肺组织过度炎症反应相关。 展开更多
关键词 沙眼衣原体肺炎菌株 C3H小鼠 TLR2 TLR4 MYD88
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基于ERIC-PCR指纹图谱技术的小鼠肠道菌群失调分析方法的建立 被引量:4
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作者 孙杰 孙丽妲 +3 位作者 伦永志 潘志鹏 潘凌鸿 赵梓晗 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2016年第12期1386-1388,1392,共4页
目的采用常规菌群分析方法和ERIC-PCR技术对正常小鼠和抗生素相关性腹泻小鼠模型分别进行肠道菌群检测,结合细菌培养和DNA指纹图谱检测结果分析小鼠肠道内主导菌群数量和种类的改变情况,建立利用ERIC-PCR技术分析小鼠肠道菌群失调的检... 目的采用常规菌群分析方法和ERIC-PCR技术对正常小鼠和抗生素相关性腹泻小鼠模型分别进行肠道菌群检测,结合细菌培养和DNA指纹图谱检测结果分析小鼠肠道内主导菌群数量和种类的改变情况,建立利用ERIC-PCR技术分析小鼠肠道菌群失调的检测方法。方法先利用常规菌群分析方法鉴定正常小鼠和抗生素相关性腹泻小鼠的菌群状况,再提取其基因组DNA,最后以肠杆菌科基因间重复序列(ERIC)为模板,利用ERIC-PCR方法获得正常小鼠和模型小鼠的肠道菌群指纹图谱,与常规菌群分析结果作比较,验证ERIC-PCR技术的准确性。结果常规菌群分析结果表明四种优势菌群在数量上出现明显的变化,证实造模成功。经ERIC-PCR技术成功获得两组小鼠粪便基因组DNA图谱,两组间呈现具有一定对比性的特异性指纹图谱。结论从小鼠粪便基因组经ERIC-PCR后的图谱中特异性条带的分布、数目和亮度来看,能说明肠道菌群的分布状况存在明显差异,结合常规菌群分析方法作对比,说明ERIC-PCR技术是一种分析小鼠肠道菌群失调高效快捷的检测方法。 展开更多
关键词 小鼠粪便基因组 菌群失调 常规菌群培养 ERIC-PCR
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γδT细胞在小鼠沙眼衣原体感染中通过促进Th17免疫应答发挥免疫保护作用 被引量:4
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作者 赵慧丽 唐莹莹 +9 位作者 乔赛 王悦 梁聚友 刘腾丽 郑佞波 张虹 檀露 孙丽妲 张永慈 白虹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期879-883,共5页
目的探讨γδTT细胞在沙眼衣原体呼吸道感染中的作用以及对衣原体特异性适应性免疫应答的影响。方法WT(C57BL/6)小鼠和TCRδ^-/-小鼠(C57BL/6背景)经鼻腔吸入1×10^3IFU的沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm)... 目的探讨γδTT细胞在沙眼衣原体呼吸道感染中的作用以及对衣原体特异性适应性免疫应答的影响。方法WT(C57BL/6)小鼠和TCRδ^-/-小鼠(C57BL/6背景)经鼻腔吸入1×10^3IFU的沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm),建立沙眼衣原体小鼠呼吸道感染模型。酶免疫法检测感染不同时间的小鼠肺组织衣原体生长情况,用衣原体包涵体形成单位(IFU)代表衣原体繁殖;ELISA法测定脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-17的产生;细胞内细胞因子染色检测小鼠肺组织CD3^+CD4^+T细胞IFN-γ(Th1免疫应答)及CD3^+CD4^+T细胞IL-17(Th17免疫应答)的水平,确定γδT细胞对宿主特异性抵抗衣原体的Th1、Th17免疫应答的调节作用。结果经鼻腔吸入一定剂量Cm诱导小鼠沙眼衣原体肺炎,与WT小鼠比较,TCRδ^-/-小鼠感染Cm早期体重下降更明显,但是两组小鼠肺组织衣原体繁殖水平未见显著差异。ELISA结果显示,WT与TCRδ^-/-小鼠在Cm呼吸道感染后的第3天和第7天IFN-γ分泌无显著差异,感染第7天TCRδ^-/-小鼠IL-17分泌显著低于WT小鼠;细胞内细胞因子染色结果提示感染第3天和第7天TCRδ^-/-小鼠CD3^+CD4^+T细胞分泌IL-17的量显著低于WT小鼠,IFN-γ未见显著差异。结论γδT细胞通过促进抗衣原体特异性的Th17应答发挥免疫保护作用。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 ΓΔT细胞 Th17免疫应答
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产生IL-17的γδT细胞在沙眼衣原体呼吸道感染早期促进中性粒细胞的募集 被引量:5
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作者 梁聚友 孙丽妲 +8 位作者 庞高举 王悦 乔赛 檀露 张虹 唐莹莹 刘腾丽 赵慧丽 白虹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-5,共5页
目的探讨沙眼衣原体呼吸道感染早期产生IL-17的γδT细胞对中性粒细胞募集的影响及其机制。方法WT(C57BL/6)与TCRδ-/-小鼠鼻腔吸入3×103 IFU(inclusion-forming units)沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum, Cm)... 目的探讨沙眼衣原体呼吸道感染早期产生IL-17的γδT细胞对中性粒细胞募集的影响及其机制。方法WT(C57BL/6)与TCRδ-/-小鼠鼻腔吸入3×103 IFU(inclusion-forming units)沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum, Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型。分离感染不同时间点小鼠肺组织单个核细胞,流式细胞术检测肺组织CD11b+Gr1+中性粒细胞(PMN)百分率;细胞内因子染色检测γδT细胞IL-17的合成;RT-PCR检测小鼠肺组织IL-17及KC(中性粒细胞趋化因子)、IL-6 mRNA表达。结果一定剂量的Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织γδT细胞分泌大量IL-17,与未感染组比较,感染后第3天小鼠肺组织CD3+ γδT+细胞分泌的IL-17显著增加(P〈0.001),并且持续到感染的第7天(P〈0.05);TCRδ-/-小鼠Cm呼吸道感染后第3天肺组织IL-17 mRNA的表达以及PMN百分率显著低于WT鼠;进一步研究显示TCRδ-/-小鼠在感染后第3天及第7天中性粒细胞趋化因子KC和IL-6在小鼠肺组织的表达显著降低。结论产生大量IL-17的γδT细胞可能通过上调KC和IL-6的表达在沙眼衣原体呼吸道感染中发挥PMN募集作用。 展开更多
关键词 沙眼衣原体肺炎菌株 中性粒细胞 ΓΔT细胞 IL-17
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沙眼衣原体呼吸道感染诱导PI3K/AKT/Bcl-2/Bax通路活化促进CD4^+ T细胞凋亡 被引量:5
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作者 檀露 郑佞波 +4 位作者 梁聚友 孙丽妲 庞高举 张虹 白虹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期178-182,共5页
目的探讨PI3K/AKT/Bcl-2/Bax途径在小鼠沙眼衣原体呼吸道感染中的诱导活化及CD4^+T细胞的凋亡。方法C57BL/6小鼠,经鼻腔吸入1×10^3 IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),诱导小鼠衣原体肺炎。于感染的不同时间点分离小鼠肺组织单... 目的探讨PI3K/AKT/Bcl-2/Bax途径在小鼠沙眼衣原体呼吸道感染中的诱导活化及CD4^+T细胞的凋亡。方法C57BL/6小鼠,经鼻腔吸入1×10^3 IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Cm),诱导小鼠衣原体肺炎。于感染的不同时间点分离小鼠肺组织单个核细胞,RT-PCR检测PI3K p110δ mRNA表达;Western blot检测p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白表达;流式细胞术检测不同感染时间小鼠肺组织CD4^+ T细胞的凋亡。结果与未感染组比较,小鼠Cm呼吸道感染诱导感染肺组织PI3K p110δ mRNA表达及PI3K下游分子p-AKT蛋白表达增高,两者均于感染第3天显著增高,第7天达到高峰,感染第14天有所降低。同时,Cm呼吸道感染也诱导凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达显著增高,均于第7天达到高峰,但Bcl-2/Bax比值依感染时间降低,提示抗凋亡作用逐渐降低,细胞凋亡增加。Cm感染诱导小鼠肺组织CD4^+T细胞的凋亡,于感染第3天早期凋亡(Annexin+PI+)和细胞总凋亡(Annexin+PI)均开始增高(P〈0.05),感染第7天达高峰(P〈0.001)。结论Cm小鼠呼吸道感染诱导PI3K/AKT/Bcl-2/Bax通路活化导致CD4^+ T细胞凋亡。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 P13K/AKT CD4^+T细胞 凋亡
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