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草地贪夜蛾Sf9细胞外泌体microRNA调控AcMNPV增殖的研究
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作者 田伟彬 张以农 +2 位作者 任菲菲 严寄铭 孙京臣 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第2期133-140,共8页
【目的】探究草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda Sf9细胞外泌体microRNA(miRNA)对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)增殖的影响。【方法】通过不连续蔗糖质量分数梯度超速离心纯... 【目的】探究草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda Sf9细胞外泌体microRNA(miRNA)对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)增殖的影响。【方法】通过不连续蔗糖质量分数梯度超速离心纯化外泌体,随后利用透射电镜观察和纳米颗粒跟踪分析技术对纯化产物进行颗粒直径分析。运用sRNA高通量测序技术筛选AcMNPV感染Sf9细胞后外泌体差异表达的miRNA并预测其潜在靶基因对应的生物学通路。通过转染模拟物(mimic)和病毒感染等细胞试验以及qPCR验证外泌体miRNA的差异表达,并检测差异表达miRNA——sfr-miR-1a-3p对AcMNPV增殖的影响。【结果】成功纯化Sf9细胞外泌体,且AcMNPV感染有效刺激Sf9细胞外泌体的分泌量增加。AcMNPV感染Sf9细胞72 h后,经与Rfam数据库比对,筛选出11个差异表达的外泌体miRNAs,其中,8个miRNAs的转录水平与测序结果趋势一致。通过预测miRNAs靶基因和KEGG富集分析,发现潜在的靶基因主要富集在cAMP信号通路、PI3K-Akt信号通路、癌症通路、人乳头瘤病毒信号通路等,这表明差异表达外泌体miRNA可能参与昆虫天然免疫反应。过表达sfrmiR-1a-3p能显著提高AcMNPV病毒vp39基因的表达。【结论】本研究通过sRNA测序筛选了AcMNPV感染后Sf9细胞外泌体的差异表达miRNA,证明了AcMNPV通过促进外泌体分泌,协助被感染细胞传递miRNA−sfr-miR-1a-3p来影响周围未感染细胞,以促进自身增殖。以上结果为昆虫外泌体传递miRNA以调控病毒增殖的机制研究提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 SF9细胞 苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 外泌体 microRNA sfr-miR-1a-3p
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CSBV的分离鉴定及其感染幼虫后的应答反应 被引量:1
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作者 费世港 刘合永 +3 位作者 王叶元 冯敏 王子龙 孙京臣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期89-96,共8页
本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定... 本研究旨在为了解江西某蜂场蜜蜂是否感染中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)并探究CSBV感染中蜂幼虫后的应答反应。采集该蜂场疑似感染CSBV的蜜蜂,采用RT-PCR的方法检测CSBV核酸,取阳性的蜜蜂样品进行病毒分离纯化、电镜观察及测序。将纯化鉴定后的CSBV对3日龄的中蜂幼虫进行人工感染,进行转录组测序,分析中蜂幼虫感染CSBV的应答反应。通过RT-PCR验证和电镜观察成功鉴定CSBV,并命名为CSBV-JX。CSBV-JX电镜观察直径为25~30 nm。对其进行分段扩增测序,发现基因组序列为8781 bp,对其进行系统发育分析,表明东方蜜蜂的SBV(AcSBV)与西方蜜蜂的SBV(AmSBV)明显分为两个分支,具有较强的地域分化性。转录组测序分析发现,中蜂幼虫在感染CSBV-JX后2 h有59个基因上调表达,83个基因下调表达;感染后12 h有68个基因上调表达,86个基因下调表达。本研究成功分离鉴定一株中蜂囊状幼虫病毒并命名为CSBV-JX。同时对CSBV-JX感染中蜂幼虫的转录组学分析发现,CSBV-JX感染2 h和12 h引起宿主的响应较小,这可能是CSBV-JX感染的2 h和12 h为病毒增殖的早期阶段病毒载量低,引起的宿主免疫响应小所导致。在CSBV-JX感染中蜂幼虫的2 h和12 h期间引起的差异基因与代谢通路关联较大,研究结果为阐明解析CSBV感染中蜂的分子机制提供了基础。 展开更多
关键词 中蜂囊状幼虫病毒 分离鉴定 系统发育分析 转录组学
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调控丝素蛋白膜的力学性能研究进展
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作者 刘海宇 梁文安 +2 位作者 王叶元 胡豆豆 孙京臣 《丝绸》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期50-61,共12页
作为一种潜在的生物材料,以丝素蛋白制备的膜材料越来越多地应用到生物医学领域。丝素蛋白膜的力学性能是一个重要的表征参数,对其后续的体外体内应用有较大的影响。本文先简述丝素蛋白的多级结构与力学性能的关系;然后总结制备工艺对... 作为一种潜在的生物材料,以丝素蛋白制备的膜材料越来越多地应用到生物医学领域。丝素蛋白膜的力学性能是一个重要的表征参数,对其后续的体外体内应用有较大的影响。本文先简述丝素蛋白的多级结构与力学性能的关系;然后总结制备工艺对丝素蛋白膜力学性能的影响,阐述不同的处理方式对丝素蛋白膜微观结构的影响及由此所致的力学性能的变化。丝素蛋白膜的制备工艺包括丝素蛋白溶液的制备(先脱胶再溶解丝素)、成膜工艺(按结构形式分为致密膜、多孔膜和多层膜),以及成膜后处理(有机溶剂浸泡、水蒸气退火和外力作用)等。此外,讨论复合丝素蛋白膜中不同改性方法导致的结构变化与力学性能的关系。最后,展望丝素蛋白膜材料的发展趋势,为不同需求下的丝素蛋白膜的发展提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 丝素蛋白 薄膜 力学性能 调控方法 复合材料 “结构性能”关系
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质型多角体病毒在家蚕体内入侵与复制研究(英文) 被引量:3
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作者 孙京臣 陈冬妮 +4 位作者 杨艺峰 张勤奋 谭佩婵 徐兴耀 邱宝利 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期78-82,共5页
采用在家蚕活体内研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的入侵增殖复制过程,探讨BmCPV的入侵过程和增殖复制机制。实验用健康的三龄起蚕经口接种BmCPV后不同时间取中肠后部固定,制作电镜样品,在透射电子显微镜下观察,结果发现BmCPV病毒被食下1... 采用在家蚕活体内研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的入侵增殖复制过程,探讨BmCPV的入侵过程和增殖复制机制。实验用健康的三龄起蚕经口接种BmCPV后不同时间取中肠后部固定,制作电镜样品,在透射电子显微镜下观察,结果发现BmCPV病毒被食下1.5 h后,在中肠上皮组织圆筒形细胞微绒毛之间有病毒粒子存在,6 h后病毒进入微绒毛内,并向细胞质移动,9 h后观察到圆筒形细胞质中有病毒粒子。作者认为病毒入侵是以整个病毒粒子穿越中肠围食膜,吸附并进入微绒毛,感染圆筒形细胞,与前人病毒入侵只是髓核进入细胞,而病毒衣壳仍留在细胞外的推测不同。随后病毒核心物质进入细胞核,启动复制循环。经过隐潜期后病毒复制,在感染24 h后,细胞质中形成病毒发生基质,子代病毒开始形成,逐渐增多。感染48 h后,圆筒形细胞质中的多角体蛋白逐渐沉积并将病毒粒子包埋,最终形成新的多角体。 展开更多
关键词 家蚕 质型多角体病毒 入侵 复制
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家蚕质型多角体病毒RDRP基因的序列测定及同源性分析 被引量:1
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作者 孙京臣 杨艺峰 +4 位作者 戴伟君 谭玉蓉 张勤奋 张景强 徐兴耀 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-58,共6页
应用分段RTPCR方法和分子克隆技术从家蚕质型多角体病毒(Bombyxmoricytoplasmicpolyhedrosisvirus,BmCPV)中国株的dsRNA中成功地分3段克隆了RDRP基因(RNAdependentRNApolymerase),大小分别为1442、827、1675bp,进行了基因全序列拼接,获... 应用分段RTPCR方法和分子克隆技术从家蚕质型多角体病毒(Bombyxmoricytoplasmicpolyhedrosisvirus,BmCPV)中国株的dsRNA中成功地分3段克隆了RDRP基因(RNAdependentRNApolymerase),大小分别为1442、827、1675bp,进行了基因全序列拼接,获得37kb的全长RDRP基因(GenBank序列号为AY496445)。通过在线blast分析,与BmCPV1、DpCPV1、LdCPV1、LdCPV14、TnCPV15核苷酸同源性分别为89%、81%、81%、541%和509%,氨基酸同源性分别为965%、931%、929%、411%和335%。根据核苷酸同源性与氨基酸同源性构建的进化树具有较好的一致性。通过ClustalX软件分析,定位了该病毒RDRP基因的3个保守区域(酸性区,核苷酸结合的核心区和催化功能核心区)。 展开更多
关键词 家蚕质型多角体病毒 DSRNA RDRP基因 同源性
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不同地区BmNPV对家蚕致死中量的比较研究 被引量:9
6
作者 孙京臣 金丰良 +1 位作者 徐兴耀 谭佩婵 《广东蚕业》 2001年第4期35-37,共3页
收集了8种不同地区的BmNPV,经纯化后,配制成实验浓度107个多角体/ml,然后按10倍梯度稀释成5级浓度,分别添食三龄起蚕,每24h调查一次,统计其发病头数,计算发病率,用几率值法求出不同地区Bm-NPV对家蚕的致死中量LC50,比较其致死中量的大小... 收集了8种不同地区的BmNPV,经纯化后,配制成实验浓度107个多角体/ml,然后按10倍梯度稀释成5级浓度,分别添食三龄起蚕,每24h调查一次,统计其发病头数,计算发病率,用几率值法求出不同地区Bm-NPV对家蚕的致死中量LC50,比较其致死中量的大小,推断不同地区的家蚕核型多角体病毒对家蚕的致病力由强到弱顺序是:Z-BmNPV>T-BmNPV>A-BmNPV>G-BmNPV>S-BmNPV>X-BmNPV>W-BmNPV>E-BmNPV. 展开更多
关键词 家蚕 地区 BMNPV 致死中量 致病力 家蚕 核型多角体病毒
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BmCPV病毒增殖的组织病理研究 被引量:2
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作者 孙京臣 谭佩婵 +1 位作者 陈冬妮 徐兴耀 《广东蚕业》 2004年第4期23-28,共6页
本研究采用石蜡切片技术,取健康的三龄起蚕经口接种 BmCPV 后不同时间段取中肠后部固定、制片,光学显微镜下观察家蚕中肠圆筒形细胞组织变化,作者认为随病毒的入侵复制增殖,病蚕圆筒形细胞出现的病理变化是与病毒复制增殖、多角体形成... 本研究采用石蜡切片技术,取健康的三龄起蚕经口接种 BmCPV 后不同时间段取中肠后部固定、制片,光学显微镜下观察家蚕中肠圆筒形细胞组织变化,作者认为随病毒的入侵复制增殖,病蚕圆筒形细胞出现的病理变化是与病毒复制增殖、多角体形成相关的,细胞内出现浅染小空白点时正是病毒发生基质与病毒粒子大量产生阶段;细胞松弛、先端膨大变形、出现多空泡时正是多角体逐步增多时期。结合电子显微镜的研究结果,光镜下观察的组织病变进一步说明病毒的复制和多角体的形成都是由细胞顶端部位开始,逐渐向基底部推进,最后新的多角体充满整个细胞,使细胞溃烂破裂,大量多角体和病毒粒子落到肠腔。 展开更多
关键词 细胞 组织病理 病毒增殖 溃烂 镜下观察 不同时间 基底部 多角体 CPV 病毒粒子
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广东蚕业经济产业发展的探索与经验 被引量:3
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作者 孙京臣 胡智明 +1 位作者 钟苏苑 徐兴耀 《中国蚕业》 2005年第2期56-57,共2页
1广东蚕业三大产业带的形成与发展 广东传统的蚕桑主产区是珠江三角洲.处于三角洲腹地的南海、顺德、中山地区方圆只有5000km2,桑地面积和产茧量却占全省的80%;若加上毗邻的三水、新会两地,则占全省的91.58%以上,产茧约9万t.这个大产业... 1广东蚕业三大产业带的形成与发展 广东传统的蚕桑主产区是珠江三角洲.处于三角洲腹地的南海、顺德、中山地区方圆只有5000km2,桑地面积和产茧量却占全省的80%;若加上毗邻的三水、新会两地,则占全省的91.58%以上,产茧约9万t.这个大产业带伴随着广东蚕业的发展延续了2000多年.在这些高度集中的蚕桑生产地区,形成了产业化、集约化、专业化生产,农民不种粮作、不种菜,成为上集购粮买菜的'特殊农民',生活水平远高于其他地区. 展开更多
关键词 产业发展 蚕业经济 广东 经验 珠江三角洲 专业化生产 生产地区 生活水平 主产区 产茧量 产业带 产业化 集约化 蚕桑 农民 顺德
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不同地区BmNPV药物耐受性的测定 被引量:1
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作者 孙京臣 金丰良 +1 位作者 徐兴耀 谭佩婵 《广东蚕业》 2002年第1期28-31,共4页
用生产上常用的消毒净作为消毒药物,对4个不同地区的BmNPV进行不同时间的消毒后,添食三龄起蚕,累计病蚕头数,计算相对发病率,比较4个地区的BmNPV对消毒净耐受性的大小。实验结果表明:不同地区的BmNPV对消毒净的耐受性是有差异的,遂溪Bm... 用生产上常用的消毒净作为消毒药物,对4个不同地区的BmNPV进行不同时间的消毒后,添食三龄起蚕,累计病蚕头数,计算相对发病率,比较4个地区的BmNPV对消毒净耐受性的大小。实验结果表明:不同地区的BmNPV对消毒净的耐受性是有差异的,遂溪BmNPV对消毒净的耐受性最强,其次是埃及BmNPV,最弱的翁源BmNPV和徐闻BmNPV。 展开更多
关键词 地区 BMNPV 药物耐受性 家蚕 核型多角体病毒 消毒净
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家蚕核多角体病毒p10基因的克隆和分子系统进化分析
10
作者 孙京臣 姜丽华 +4 位作者 龙虎 吴钢 徐兴耀 钟万芳 蔡平钟 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期64-68,共5页
根据GenBank中家蚕核多角体病毒13株中p10基因的保守序列,克隆得到了8个不同地区的家蚕核多角体病毒的p10基因,并分别与GenBank中的NPVp10基因进行比对.结果发现p10基因都含有1个213bp的开放阅读框(ORF)共编码70个氨基酸,8株P10... 根据GenBank中家蚕核多角体病毒13株中p10基因的保守序列,克隆得到了8个不同地区的家蚕核多角体病毒的p10基因,并分别与GenBank中的NPVp10基因进行比对.结果发现p10基因都含有1个213bp的开放阅读框(ORF)共编码70个氨基酸,8株P10蛋白间氨基酸序列相似性为95%~100%,相似性高.与GenBank中Ac-MNPV和BmNPV的P10蛋白相比,8株BmNPVP10蛋白都缺失了3个保守结构域中的C-端结构域,只含有2个保守结构域,即N-端卷曲螺旋和Pro丰富区. 展开更多
关键词 家蚕核多角体病毒 p10基因 基因克隆 序列对比 分子系统进化
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家蚕质多角体病毒RDRP的免疫电镜定位研究
11
作者 孙京臣 谭玉蓉 +3 位作者 戴伟君 张勤奋 徐兴耀 张景强 《电子显微学报》 CAS CSCD 2005年第1期69-73,共5页
以原核表达BmCPV RDRP重组蛋白为抗原制备的兔抗血清为一抗,直径15nm山羊抗兔IgG 胶体金为二抗。应用3%多聚甲醛 0 1%戊二醛混和固定液、K4M低温包埋剂和紫外光聚合制备的样品进行免疫电镜观察,结果感染BmCPV(C)病蚕的中肠柱状细胞中,... 以原核表达BmCPV RDRP重组蛋白为抗原制备的兔抗血清为一抗,直径15nm山羊抗兔IgG 胶体金为二抗。应用3%多聚甲醛 0 1%戊二醛混和固定液、K4M低温包埋剂和紫外光聚合制备的样品进行免疫电镜观察,结果感染BmCPV(C)病蚕的中肠柱状细胞中,游离和病毒多角体中BmCPV的病毒粒子均能结合胶体金颗粒,平均标记率为25%左右,认为BmCPV(C) RDRP基因编码的蛋白应为BmCPV病毒的结构蛋白,位于病毒的衣壳上。其中一抗的使用浓度为1∶200,二抗的使用浓度为1∶40,可以获得较好的免疫标记效果和较少的非特异性标记。 展开更多
关键词 免疫电镜 胶体金 免疫标记 标记率 非特异性 兔IGG 感染 CPV 使用浓度 多角体病毒
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广东省雷州半岛蚕业产业化经营的实践与分析
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作者 孙京臣 霍永康 +5 位作者 徐兴耀 余炳球 陈龙宇 黄星光 张永文 陈振兴 《广东蚕业》 1999年第2期18-23,共6页
本文根据广东雷州半岛蚕业产业化经营的实践,初步总结出了“家庭经营”、“家族经营”和“农庄经营”等三种产业化的蚕茧生产经营模式,并对“农庄经营”模式的生产经营提出了科学管理的方法。
关键词 广东 蚕业 产业化 经营
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丹酚酸B诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化 被引量:20
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作者 陈嘉 孙京臣 +2 位作者 邹移海 张进 黄冰 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第23期2152-2155,共4页
目的:体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并研究中药单体丹酚酸B诱导MSCs向心肌样细胞分化.方法:用贴壁培养法分离、培养、纯化MSCs,免疫荧光法检测细胞抗原CD44和CD34.分别用含5μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)和30mg/L丹酚酸... 目的:体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并研究中药单体丹酚酸B诱导MSCs向心肌样细胞分化.方法:用贴壁培养法分离、培养、纯化MSCs,免疫荧光法检测细胞抗原CD44和CD34.分别用含5μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)和30mg/L丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs24h后,RT-PCR法检测培养1,7,14和21d心肌特异性转录因子NKX2.5,GATA-4和心肌特异性蛋白α-actin mR-NA的表达,用免疫荧光法检测诱导后α-actin的表达情况.结果:获得纯化的MSCs,免疫荧光检测细胞表面标记CD44呈阳性,CD34呈阴性.诱导后细胞形态逐渐发生变化.RT-PCR显示NKX2.5和GATA-4 mRNA在MSCs有基础性的表达,而分别以5-aza和丹酚酸B处理24h后,NKX2.5和GATA-4 mRNA表达增强,7d时表达达高峰,以后维持在高水平,与空白对照组相比,有统计学差异(P<0.01).未诱导的MSCsα-actin mRNA表达呈阴性,丹酚酸B诱导后的第14日,出现α-actin mRNA的表达.结论:用贴壁培养法可获得纯化的MSCs,丹酚酸B可诱导MSCs向心肌样细胞分化. 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 丹酚酸B 心肌细胞
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丹酚酸B对骨髓间充质干细胞SCF表达的影响 被引量:7
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作者 陈嘉 孙京臣 +3 位作者 邹移海 黄冰 张进 张永斌 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期276-278,共3页
目的研究中药单体丹酚酸B对骨髓间充质干细胞(MSCs)中干细胞因子(stemcell factor,SCF)的影响。方法用贴壁培养法分离、培养和纯化MSCs,取第三代MSCs进行实验。用含不同浓度丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs,ELISA法检测培养24、48、72... 目的研究中药单体丹酚酸B对骨髓间充质干细胞(MSCs)中干细胞因子(stemcell factor,SCF)的影响。方法用贴壁培养法分离、培养和纯化MSCs,取第三代MSCs进行实验。用含不同浓度丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs,ELISA法检测培养24、48、72h的上清中SCF的含量;RT-PCR法检测培养24、48、72h的SCF mRNA的表达。结果膜型和可溶型SCF mRNA均有表达。随着培养时间的增加,0.3μg/ml、3μg/ml、30μg/ml丹酚酸B可明显促进SCF的分泌和SCF mRNA的表达(与空白对照组比较,P<0.05),而0.03μg/ml丹酚酸B组和空白对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论丹酚酸B可促进MSCs分泌SCF并促进SCF mRNA的表达,提示SCF可能在中药丹参治疗心肌梗死中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 间质干细胞 细胞培养 丹酚酸B 干细胞因子
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杀菌剂多菌灵在桑叶中的消解动态研究 被引量:7
15
作者 刘新清 金鹏飞 +2 位作者 谭佩婵 徐兴耀 孙京臣 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期487-490,共4页
多菌灵(carbendazim)是家蚕微粒子病的防治药物。将50%多菌灵可湿性粉剂分别稀释至1000和500倍药液后喷洒桑树,用高效液相色谱(HPLC)检测桑叶中多菌灵的残留和消解动态。结果表明:桑树喷洒稀释1000倍的多菌灵药液后,桑叶中药物的消解动... 多菌灵(carbendazim)是家蚕微粒子病的防治药物。将50%多菌灵可湿性粉剂分别稀释至1000和500倍药液后喷洒桑树,用高效液相色谱(HPLC)检测桑叶中多菌灵的残留和消解动态。结果表明:桑树喷洒稀释1000倍的多菌灵药液后,桑叶中药物的消解动态方程为Ct=4.5339e-0.2215t,药物的半衰期T1/2=3.13d;喷洒稀释500倍的多菌灵药液后,桑叶中药物的消解动态方程为Ct=6.0527e-0.1030t,药物的半衰期T1/2=6.73d。多菌灵在桑叶中的残留与消解动态显示低浓度(稀释1000倍)的药液在桑叶中的降解更快,所以建议生产上适当采用高浓度药液喷施桑树,并根据相应的药物消解动态数据确定桑叶采摘时期,以保证家蚕食下药叶对微粒子病的防治效果。 展开更多
关键词 杀菌剂多菌灵 家蚕微粒子病 桑叶 药物消解动态 高效液相色谱
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表达绿色荧光蛋白嵌合狂犬病病毒HEP-GFP株的拯救 被引量:9
16
作者 刘晓慧 艾军 +2 位作者 郭霄峰 孙京臣 梁红茹 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期401-403,共3页
Green fluorescent protein(GFP)gene was inserted into the pseudogene(ψ)region of genome of rabies virus rHep-Flury strain,and a recombinant rabies virus carrying GFP,designated as HEP-GFP,was rescued by reverse geneti... Green fluorescent protein(GFP)gene was inserted into the pseudogene(ψ)region of genome of rabies virus rHep-Flury strain,and a recombinant rabies virus carrying GFP,designated as HEP-GFP,was rescued by reverse genetics system.It was demonstrated that green fluorescent protein could be expressed in the chimeric virus after 5 passages in BHK-21 cell line.The research indicated that the pseudogene(ψ)region in the genome of rHEP-Flury strain,as an independent functional unit in the process of virus assembly,could independently carry and express exogenous genes. 展开更多
关键词 狂犬病毒 嵌合病毒 绿色荧光蛋白
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化学纯三聚氰胺膀胱结石大鼠模型的研究 被引量:5
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作者 陈嘉 邹移海 +4 位作者 张薇 陈苑 张永斌 金鹏飞 孙京臣 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期81-84,共4页
为了探讨三聚氰胺形成泌尿系结石机理,进行化学纯三聚氰胺膀胱结石大鼠模型的研究.SD大鼠(以下简称大鼠)分别给予0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0g/(kg·d)剂量的化学纯三聚氰胺灌胃.溶媒对照组用10g/L甲基纤维... 为了探讨三聚氰胺形成泌尿系结石机理,进行化学纯三聚氰胺膀胱结石大鼠模型的研究.SD大鼠(以下简称大鼠)分别给予0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0g/(kg·d)剂量的化学纯三聚氰胺灌胃.溶媒对照组用10g/L甲基纤维素溶液5mL/(kg·d)灌胃,无菌水对照组用无菌水5mL/(kg·d)灌胃.在灌胃20、30和40d,每组各取10只大鼠(雌雄各半)剖检.结果表明,三聚氰胺灌胃大鼠,会影响其体质量的增长,部分大鼠形成膀胱结石(膀胱结石形成率最高为40%,雄性大鼠多见). 展开更多
关键词 三聚氰胺 膀胱结石 模型 动物
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杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装 被引量:5
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作者 龙虎 姚伦广 +3 位作者 王姗姗 陈士新 谭佩婵 孙京臣 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1491-1495,共5页
目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿... 目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒。为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的基因表达。结果扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒。结论成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多亚基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴。 展开更多
关键词 轮状病毒样颗粒 家蚕杆状病毒 多基因表达系统 BmN细胞 疫苗
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家蚕质多角体病毒(BmCPV)基因组dsRNA片段V的全序列测定 被引量:5
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作者 林伟 徐安龙 +3 位作者 杨文利 孙京臣 卢火斤英 张景强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期375-377,共3页
dsRNA segment Ⅴ was separated from Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus(BmCPV)of Chinese Guangzhou strainAfter ligation with a ssDNA adaptor,the cDNA fragments overlapping full-length segment Ⅴ of BmCPV ... dsRNA segment Ⅴ was separated from Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus(BmCPV)of Chinese Guangzhou strainAfter ligation with a ssDNA adaptor,the cDNA fragments overlapping full-length segment Ⅴ of BmCPV were acquired by RT-PCR amplificationSegment Ⅴ is 2852 nucleotides long and possesses a single open reading frame encoding a putative protein of 881 amino acidsComparison of amino acid sequences shows 97% homology with BmCPV Japanese isolate segments Ⅴ,86% and 36% with LdCPV-1 and LdCPV-14 segments Ⅴ respectivelyPart of sequence of BmCPV segment Ⅴ exhibits high homology with 2Apro motif of picornavirus members,which may suggest that there might exist some affinities evolutionally between both of 展开更多
关键词 家蚕质多角体病毒 BmCPV 基因组 dsRNA片段V 全序列测定
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禽流感病毒HA基因在狂犬病毒中的表达 被引量:5
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作者 艾军 金晓芹 +3 位作者 孙京臣 罗琴芳 黄文科 郭霄峰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期81-83,共3页
为了研究狂犬病毒作为载体表达外源基因的特性,将禽流感病毒HA基因插入狂犬病毒全基因组cDNA感染性克隆pHEP-3.0G基因与L基因的假基因位点,再通过反向遗传技术,获得了携带流感病毒HA基因的嵌合狂犬病毒(HepFHA),并进行了病毒传代与HA基... 为了研究狂犬病毒作为载体表达外源基因的特性,将禽流感病毒HA基因插入狂犬病毒全基因组cDNA感染性克隆pHEP-3.0G基因与L基因的假基因位点,再通过反向遗传技术,获得了携带流感病毒HA基因的嵌合狂犬病毒(HepFHA),并进行了病毒传代与HA基因表达的研究.结果显示,重组病毒经BHK-21细胞传代10次,病毒表达稳定,但各代次常规红细胞凝集试验均为阴性;Western-blotting检测到病毒表达产物中存在部分HA蛋白的表达,其相对分子质量为39 540,与HA裂解的HA1蛋白相对分子质量相吻合. 展开更多
关键词 狂犬病毒 反向遗传技术 HA基因
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