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RNA干扰survivin基因在EC109细胞中作用的体内实验研究 被引量:5
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作者 孙红亚 郑建 +3 位作者 李维青 刘桐林 李简 汪涛 《实用临床医药杂志》 CAS 2008年第4期8-12,共5页
目的研究RNA干扰survivin基因对EC109细胞体内增殖的影响。方法构建siRNA-survivin真核表达载体,转染EC109细胞,筛选得到稳定细胞克隆。同时设非特异siRNA载体转染为对照;通过裸鼠移植瘤模型的成瘤时间、瘤结节重量,比较各组细胞在体内... 目的研究RNA干扰survivin基因对EC109细胞体内增殖的影响。方法构建siRNA-survivin真核表达载体,转染EC109细胞,筛选得到稳定细胞克隆。同时设非特异siRNA载体转染为对照;通过裸鼠移植瘤模型的成瘤时间、瘤结节重量,比较各组细胞在体内的增殖速度;免疫组织化学染色检测移植瘤的细胞凋亡。结果siRNA-survivin转染的EC109细胞组在裸鼠体内成瘤时间为(8.86±1.069)d,高于其它各组;平均瘤重为(0.32±0.12)g,低于其它组,均有显著差异(P<0.05);TUNEL法细胞凋亡检测,siRNA-survivin转染的EC109细胞组的凋亡指数为(10.52±4.35),高于其它组,具有显著性差异(P<0.05);结论RNA干扰survivin基因具有抑制人食管癌EC109细胞体内增殖的作用,诱导细胞的凋亡是其重要作用机制。 展开更多
关键词 食管癌 RNA干扰 SURVIVIN基因
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硒对AOM所致结肠癌模型大鼠肾上腺皮质束状带细胞组织化学的影响 被引量:2
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作者 孙红亚 唐军民 +2 位作者 唐岩 甄昱 盛树青 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期84-88,共5页
目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致结肠癌模型大鼠肾上腺皮质束状带细胞组织化学的变化。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分4组:正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组和致癌剂后补... 目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致结肠癌模型大鼠肾上腺皮质束状带细胞组织化学的变化。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分4组:正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组和致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌的形成。亚硒酸钠(Na2SeO3)水溶液(4mg/L)分别在AOM前、后干预,并持续至实验结束。各组均于34周取大鼠肾上腺,用组织化学的方法,观察大鼠肾上腺皮质束状带细胞组织化学的变化,对脂类、琥珀酸脱氢酶(SDH)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)进行染色,并图像分析。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(aberrant crypt,AC)和异常隐窝灶(aberrant crypt foci,ACF)。组织化学显示,与正常对照组相比,实验对照组大鼠肾上腺皮质束状带细胞的SDH和3β-HSD的MOD值明显增加(P<0.05),脂类的MOD值明显减少(P<0.05);硒干预的各组与实验对照组相比,大鼠肾上腺皮质束状带细胞的SDH和3β-HSD的MOD值均有增加,脂类的MOD值减少,其中致癌剂后补硒组SDH和3β-HSD的MOD值增加有统计意义(P<0.05)。结论硒可增强AOM所致大鼠结肠癌形成过程中肾上腺皮质束状带细胞的功能。 展开更多
关键词 结肠癌 亚硒酸钠 肾上腺皮质 氧化偶氮甲烷 大鼠
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硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促肾上腺皮质激素阳性细胞的影响 被引量:1
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作者 孙红亚 唐军民 +1 位作者 唐岩 甄昱 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期493-497,共5页
目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连... 目的观察硒对致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部ACTH阳性细胞的影响。方法随机将20只3周龄SPF级断乳雄性SD大鼠分为正常对照组、实验对照组、致癌剂前补硒组、致癌剂后补硒组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌形成。亚硒酸钠(Na2SeO3)水溶液(4mg/L)分别在AOM前、后干预,并持续至实验结束。各组均于34周后取大鼠垂体,用免疫组织化学SP法,观察垂体远侧部ACTH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(AC)和异常隐窝灶(ACF)。免疫组织化学法显示,实验对照组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞与正常对照组比较,阳性反应显著性增强(P<0.01);硒干预的各组与实验对照组相比,ACTH阳性细胞的阳性反应进一步增强(P<0.01)。结论硒可增强AOM所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部ACTH阳性细胞的功能。 展开更多
关键词 结肠癌 亚硒酸钠 ACTH阳性细胞 垂体 氧化偶氮甲烷 免疫组织化学 大鼠
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AOM所致大鼠结肠癌形成过程中脑垂体远侧部TSH阳性细胞免疫组织化学观察
4
作者 孙红亚 唐军民 +2 位作者 唐岩 甄昱 盛树青 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2008年第5期393-395,399,I0001,共5页
目的:观察氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,大鼠脑垂体远侧部促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)细胞的免疫组织化学变化并初探其意义。方法:用断乳SD(Sprague Dawley)雄性大鼠30只,分为AOM实验组... 目的:观察氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,大鼠脑垂体远侧部促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)细胞的免疫组织化学变化并初探其意义。方法:用断乳SD(Sprague Dawley)雄性大鼠30只,分为AOM实验组和对照组。实验组用AOM(15 mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌的形成。分别于实验第10,30,34周取材,用免疫组织化学、图像分析法观察大鼠实验性结肠癌形成过程中,脑垂体远侧部TSH阳性细胞的变化。结果:亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(aberrantcrypt,AC)和异常隐窝灶(aberrant crypt foci,ACF)。免疫组织化学显示,与同期正常对照组相比,实验组大鼠垂体远侧部TSH阳性细胞阳性反应显著性减弱(P<0.05)。结论:在大鼠实验性结肠癌形成过程中,脑垂体远侧部TSH细胞变化可能与机体肿瘤的发生有关。 展开更多
关键词 结肠癌 垂体 促甲状腺激素 阳性细胞 大鼠 氧化偶氮甲烷
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硒对氧化偶氮甲烷所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部促甲状腺激素阳性细胞的影响
5
作者 孙红亚 唐军民 +1 位作者 唐岩 甄昱 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期783-785,826,F0002,共5页
目的:观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部促甲状腺激素(TSH)阳性细胞的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照、实验对照、致癌剂前补硒和致癌剂后补硒组。34周取垂体,用免疫组织化学SP法和SAP法,观察其远侧部... 目的:观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部促甲状腺激素(TSH)阳性细胞的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照、实验对照、致癌剂前补硒和致癌剂后补硒组。34周取垂体,用免疫组织化学SP法和SAP法,观察其远侧部TSH阳性细胞的形态结构及免疫组织化学反应强度,并进行图像分析。结果:亚甲蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝和异常隐窝灶。免疫组织化学显示,与正常对照组相比,实验对照组TSH阳性细胞反应显著减弱;硒干预各组与实验对照组相比,TSH阳性细胞的阳性反应进一步减弱。结论:硒参与了AOM所致大鼠结肠癌形成过程中,垂体远侧部TSH阳性细胞功能变化的调节。 展开更多
关键词 结肠癌 氧化偶氮甲烷 亚硒酸钠 促甲状腺激素 垂体 大鼠
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AOM所致大鼠结肠癌形成过程中垂体远侧部ACTH阳性细胞免疫组织化学观察
6
作者 孙红亚 唐军民 +2 位作者 唐岩 甄昱 盛树青 《泰山医学院学报》 CAS 2008年第10期747-750,共4页
目的观察氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,大鼠脑垂体远侧部ACTH细胞的免疫组织化学变化并探讨其意义。方法用断乳SD(Sprague Dawley)雄性大鼠30只,分为AOM实验组和盐水对照组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连... 目的观察氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)所致大鼠结肠癌形成过程中,大鼠脑垂体远侧部ACTH细胞的免疫组织化学变化并探讨其意义。方法用断乳SD(Sprague Dawley)雄性大鼠30只,分为AOM实验组和盐水对照组。用AOM(15mg/kg)每周腹腔注射,连续2周,诱导大鼠结肠癌的形成。分别于实验第10、30、34周取材,用免疫组织化学、图像分析法观察大鼠实验性结肠癌形成过程中脑垂体远侧部ACTH阳性细胞的变化。结果亚甲基蓝染色光镜下观察,可见AOM腹腔注射的大鼠结肠黏膜出现异常隐窝(aberrant crypt,AC)和异常隐窝灶(aberrant crypt foci,ACF)。免疫组织化学显示,与同期正常对照组相比,对照组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞阳性反应显著性增强(P<0.01)。结论在大鼠实验性结肠癌形成过程中脑垂体远侧部ACTH细胞可能参与了机体抗肿瘤的内分泌调节。 展开更多
关键词 结肠癌 垂体 ACTH阳性细胞 大鼠 氧化偶氮甲烷
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人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合研究 被引量:4
7
作者 伊焕发 唐军民 +4 位作者 唐岩 甄昱 孙红亚 戴燕 秦屹 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期496-499,共4页
目的 探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法。研究树突状细胞 肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征。 方法 用PEG法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合 ,瑞氏 姬姆萨染色观察树突状细胞、LTE... 目的 探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法。研究树突状细胞 肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征。 方法 用PEG法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合 ,瑞氏 姬姆萨染色观察树突状细胞、LTEP78细胞及其融合细胞的形态结构 ,SP免疫细胞化学染色法检测融合细胞的分子表达。 结果 分离的树突状细胞能高表达HLA DR分子 ,而LTEP78细胞则不表达 ;将树突状细胞与LTEP78细胞按 10∶1比例融合后 ,两者的细胞膜、细胞质依次融合 ,获得的融合细胞仍能表达HLA DR分子。 结论人树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合是一个动态过程 ,通过将两者融合 ,人肺癌细胞获得了人树突状细胞表达的HLA DR分子 ,从而增强了其免疫原性 ,为人树突状细胞疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 外周血 树突状细胞 肺鳞癌细胞 融合研究 组织化学
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兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用 被引量:8
8
作者 马海涛 郭佳倩 +4 位作者 夏静 牛长敏 申雪沂 孙红亚 郑英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期246-251,共6页
目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.c... 目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化。应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体。利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定。结果应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的p ET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白。免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞。结论成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性。 展开更多
关键词 Setd8 多克隆抗体 鉴定
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人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞 被引量:4
9
作者 伊焕发 唐军民 +4 位作者 唐岩 孙红亚 甄昱 戴燕 秦屹 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期105-108,共4页
目的:探讨树突状细胞-肿瘤细胞融合细胞的形态特性,为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法:将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合,瑞氏-姬姆萨染色观察;扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结... 目的:探讨树突状细胞-肿瘤细胞融合细胞的形态特性,为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法:将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合,瑞氏-姬姆萨染色观察;扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果:树突状细胞与MCF7细胞接10:1比例融合后,一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合;扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起,树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论:树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞 树突状细胞 融合细胞 疫苗 免疫磁珠法 瑞氏-姬姆萨染色法 扫描电镜
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人RUVBL2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达 被引量:2
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作者 郑英 谢林俊 +5 位作者 张露萍 王海燕 孙红亚 梁虹 贾筱琴 胡艳秋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期586-587,591,共3页
目的:构建带有绿色荧光蛋白的RUVBL2真核表达载体pEGFP-N1-RUVBL2,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法:以pGADT7-RUVBL2质粒为模板,PCR扩增RUVBL2基因,首先克隆至T载体中,进一步亚克隆至p-EGFP-N1,并对重组表达载体进行酶切及测序鉴定。... 目的:构建带有绿色荧光蛋白的RUVBL2真核表达载体pEGFP-N1-RUVBL2,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法:以pGADT7-RUVBL2质粒为模板,PCR扩增RUVBL2基因,首先克隆至T载体中,进一步亚克隆至p-EGFP-N1,并对重组表达载体进行酶切及测序鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒瞬时转染HeLa细胞系,应用荧光显微镜观察绿色荧光融合蛋白的表达,并用Western blot法检测RUVBL2-GFP融合蛋白的表达。结果:经限制性酶切鉴定及测序分析证实pEGFP-N1-RUVBL2载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的HeLa细胞中有绿色荧光蛋白的表达,Western blot法证实转染细胞中能表达RUVBL2-GFP融合蛋白。结论:pEGFP-N1-RU-VBL2表达载体构建成功,并在HeLa细胞内成功表达。 展开更多
关键词 RUVBL2基因 真核表达载体 转染 HELA细胞
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人NYD-SP28基因原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量:2
11
作者 郑英 盛树东 +2 位作者 孙红亚 梁虹 王建军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期626-628,共3页
目的:构建人NYD-SP28基因原核表达载体,表达其原核蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生中的作用。方法:以原始质粒为模板,用PCR法扩增人的NYD-SP28基因开放阅读框全长,将其克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-NYD-... 目的:构建人NYD-SP28基因原核表达载体,表达其原核蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生中的作用。方法:以原始质粒为模板,用PCR法扩增人的NYD-SP28基因开放阅读框全长,将其克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-NYD-SP28。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导原核蛋白的表达,纯化蛋白以免疫小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体的滴度。结果:成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,并在BL21菌中表达NYD-SP28原核蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到NYD-SP28原核蛋白。用纯化的NYD-SP28蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度达到1/10万。结论:成功构建人NYD-SP28原核表达载体,并获得了高纯度的NYD-SP28蛋白及鼠抗NYD-SP28多克隆抗体,为进一步研究NYD-SP28的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 NYD-SP28基因 原核表达 多克隆抗体
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小鼠Stra8相互作用蛋白的筛选 被引量:2
12
作者 郑英 张露萍 +3 位作者 王海燕 孙红亚 梁虹 王建军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期18-22,共5页
目的采用酵母双杂交法,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与Stra8(stimulated by retinoic acid8,Stra8)相互作用的蛋白。通过对相互作用蛋白的筛选和研究,探讨Stra8在胚胎干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-Stra8为诱饵质粒,从小鼠... 目的采用酵母双杂交法,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与Stra8(stimulated by retinoic acid8,Stra8)相互作用的蛋白。通过对相互作用蛋白的筛选和研究,探讨Stra8在胚胎干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-Stra8为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与Stra8相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用的验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了Setd6及DEK 2种与Stra8相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,筛选得到了与Stra8相互作用的蛋白Setd6及DEK,它们可能与Stra8一起调控胚胎干细胞的增殖与分化,对Stra8相互作用蛋白的筛选有助于揭示其在胚胎干细胞中的作用机制。 展开更多
关键词 小鼠Stra8 酵母双杂交 相互作用蛋白
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肉苁蓉多糖对衰老小鼠大脑神经元影响的形态学研究 被引量:11
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作者 王德俊 孙红亚 《实用医药杂志(武汉)》 2001年第1期1-3,共3页
目的:探讨新疆肉苁蓉多糖对衰老小鼠大脑神经元形态学的影响。方法:120只小鼠分为对照组、模型组和给药组。应用组织化学方法和电子显微镜观察肉苁蓉多糖是臭氧造成衰老小鼠大脑皮质神经元的作用。结果:臭氧使小鼠大脑皮质神经元内... 目的:探讨新疆肉苁蓉多糖对衰老小鼠大脑神经元形态学的影响。方法:120只小鼠分为对照组、模型组和给药组。应用组织化学方法和电子显微镜观察肉苁蓉多糖是臭氧造成衰老小鼠大脑皮质神经元的作用。结果:臭氧使小鼠大脑皮质神经元内单胺氧化酶(MAO-B)、乳酸脱氢酶(LDH)、脂褐素均有明显升高,电镜下血管基底膜增厚。给药组对小鼠大脑皮质神经元内MAO-B、LDH、脂褐素明显下降,尼氏小体、溶梅体增多,与对照组和模型组比较,差异非常显著(P<0.01)。结论:从细胞水平证明了肉苁蓉多糖对衰老小鼠具有抗神经元损伤和延缓衰老的作用。 展开更多
关键词 肉苁蓉多糖 神经元 超微结构 抗衰老 动物试验 中药
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硒对氧化偶氮甲烷所致结肠癌模型大鼠睾丸精原细胞P16蛋白表达的影响
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作者 梅芳 唐军民 +2 位作者 唐岩 甄昱 孙红亚 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期509-512,共4页
目的观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致结肠癌大鼠睾丸精原细胞P16蛋白表达的影响。方法随机将20只3周龄断乳雄性SD大鼠分为:正常对照组、实验对照组、AOM致癌前喂食亚硒酸钠水组、AOM致癌后喂食亚硒酸钠水组。每周腹腔注射AOM 15 mg/kg,持... 目的观察硒对氧化偶氮甲烷(AOM)所致结肠癌大鼠睾丸精原细胞P16蛋白表达的影响。方法随机将20只3周龄断乳雄性SD大鼠分为:正常对照组、实验对照组、AOM致癌前喂食亚硒酸钠水组、AOM致癌后喂食亚硒酸钠水组。每周腹腔注射AOM 15 mg/kg,持续2周,造成大鼠结肠癌模型。用4 mg/L Na2SeO3水溶液分别在AOM致癌前、后开始进行干预,并持续至实验结果。各组均于34周后取两侧睾丸,用免疫组织化学方法,观察大鼠睾丸精原细胞内P16蛋白的表达,并进行图像分析。结果正常组大鼠的睾丸内未见精原细胞表达P16蛋白,而实验对照组、硒干预AOM致癌组(AOM致癌前、后喂食亚硒酸钠水)的精原细胞P16均呈阳性表达,阳性产物呈深棕色,定位于细胞核中,细胞质内仅有少量表达。实验对照组、AOM致癌前、后喂食亚硒酸钠水组阳性表达逐渐增强,组间具有显著性差异(P<0.05)。结论硒可增强AOM所致结肠癌大鼠精原细胞P16蛋白的表达。 展开更多
关键词 氧化偶氮甲烷 精原细胞 P16蛋白 结肠癌 大鼠
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PIAS-NY稳定转染小鼠精母细胞株的构建与鉴定
15
作者 郑英 王海燕 +5 位作者 张露萍 孙红亚 梁虹 贾筱琴 胡艳秋 朱永泽 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期15-18,共4页
目的:构建PIAS-NY基因慢病毒质粒,并将包装所得慢病毒感染小鼠精母细胞,获得稳定过表达PIAS-NY的细胞株。方法:应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,对阳性克隆进行PCR筛选及测序鉴定。将重组质粒与两种辅... 目的:构建PIAS-NY基因慢病毒质粒,并将包装所得慢病毒感染小鼠精母细胞,获得稳定过表达PIAS-NY的细胞株。方法:应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,对阳性克隆进行PCR筛选及测序鉴定。将重组质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,获得含慢病毒颗粒的细胞上清,用慢病毒感染小鼠精母细胞,并用Western印迹方法检测细胞中PIAS-NY蛋白的表达。结果:成功构建了pGC-FU-PIAS-NY慢病毒表达质粒,获得了稳定过表达PIAS-NY的小鼠精母细胞株。结论:PIAS-NY过表达慢病毒质粒及稳定转染小鼠精母细胞株的构建,为进一步体外研究PIAS-NY基因在精子发生中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 PIAS-NY基因 慢病毒载体 小鼠精母细胞系
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从小鼠胚胎干细胞文库中筛选PIASx相互作用蛋白
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作者 郑英 贾筱琴 +3 位作者 张露萍 王海燕 孙红亚 梁虹 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期1-4,共4页
目的应用酵母双杂交系统,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与PIASx(protein inhibitor ofactivated STAT x,PIASx)相互作用的蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIASx在干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-PIASx为诱饵质粒... 目的应用酵母双杂交系统,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与PIASx(protein inhibitor ofactivated STAT x,PIASx)相互作用的蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIASx在干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-PIASx为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与PIASx相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了6种与PIASx相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到了6种不同的基因,其编码蛋白与PIASx相互作用,可能与小鼠胚胎干细胞的增殖与分化相关。对PIASx相互作用蛋白的筛选有助于揭示PIASx在胚胎干细胞中的作用机制。 展开更多
关键词 PIASx 酵母双杂交 小鼠胚胎干细胞cDNA文库
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PIAS-NY酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活活性分析
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作者 郑英 张露萍 +3 位作者 王海燕 孙红亚 梁虹 王建军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第32期3971-3974,共4页
目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误... 目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误后,再将片段亚克隆入pGBKT7载体内,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PIAS-NY转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了PIAS-NY的诱饵载体,经过自激活活性的分析发现,该诱饵载体没有自激活活性,同时对两种酵母细胞的生长无毒性作用。结论成功构建了PIAS-NY的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供了实验基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交 PIAS—NY 载体构建
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活化的蛋白激酶C受体1真核表达载体的构建与鉴定
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作者 张露萍 王海燕 +5 位作者 孙红亚 梁虹 王建军 朱永泽 盛树青 郑英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期497-499,共3页
目的:构建活化的激酶C受体1(RACK1)WD1-4真核表达载体,通过细胞转染和Western blot鉴定其是否在细胞中表达。方法:应用PCR法扩增RACK1蛋白中第1~4个WD40区域的片段,将其与PGEM-T载体连接,测序后再将其克隆至pEGFP-N1中。采用脂质体法... 目的:构建活化的激酶C受体1(RACK1)WD1-4真核表达载体,通过细胞转染和Western blot鉴定其是否在细胞中表达。方法:应用PCR法扩增RACK1蛋白中第1~4个WD40区域的片段,将其与PGEM-T载体连接,测序后再将其克隆至pEGFP-N1中。采用脂质体法将重组质粒转染至293T细胞中,观察其在真核细胞中的表达,并用Western blot法进行鉴定。结果:pEGFP-N1-RACK1(WD1-4)重组质粒经酶切鉴定及测序证实,目的基因的序列完全正确。荧光显微镜观察发现,转染了重组质粒的细胞株可见绿色荧光融合蛋白的表达,Western blot结果进一步证实了上述结果。结论:成功构建pEGFP-N1-RACK1(WD1-4)重组质粒且进行了真核表达,为下一步研究RACK1蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 RACK1蛋白 真核表达载体构建 蛋白表达
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人外周血CD4^+树突状细胞的纯化及鉴定
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作者 伊焕发 唐岩 +2 位作者 甄昱 唐军民 孙红亚 《解剖科学进展》 CAS 2003年第3期193-196,共4页
目的 建立人外周血树突状细胞 (dendriticcell,DC)的分离方法 ,观察其形态学和免疫组织化学特点 ,为下一步细胞融合提供DC来源。方法 以免疫磁珠分选法从人外周血单个核细胞中分离CD4 + DC ,流式细胞仪检测所得细胞的纯度 ,光镜、电... 目的 建立人外周血树突状细胞 (dendriticcell,DC)的分离方法 ,观察其形态学和免疫组织化学特点 ,为下一步细胞融合提供DC来源。方法 以免疫磁珠分选法从人外周血单个核细胞中分离CD4 + DC ,流式细胞仪检测所得细胞的纯度 ,光镜、电镜和激光共聚焦扫描显微镜观察其形态 ,SP免疫细胞化学方法检测DC的分子表达。结果 此纯化方法所得细胞纯度可达到 80 %以上 ,形态学观察可见纯化细胞具有典型的DC特征 ,该细胞能高表达HLA DR和S 10 0分子。结论 免疫磁法可获得较高纯度典型DC 。 展开更多
关键词 外周血 树突状细胞 纯化 鉴定 细胞形态学 免疫组织化学 肿瘤细胞
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降息,农村信用社将何去何从?
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作者 孙红亚 《江苏农村金融》 1998年第10期18-18,共1页
中央银行自1996年5月1日起先后五次调整了存、贷款、准备金及再贷款利率,其频率之高,力度之大,影响面之广,是任何时期所没有的。从宏观面上讲,具有丰富的政策内涵,为有效扩大内需,支持国民经济发展有着极其深远的意义,但从客观上讲,降... 中央银行自1996年5月1日起先后五次调整了存、贷款、准备金及再贷款利率,其频率之高,力度之大,影响面之广,是任何时期所没有的。从宏观面上讲,具有丰富的政策内涵,为有效扩大内需,支持国民经济发展有着极其深远的意义,但从客观上讲,降息措施的实施,对金融业的经营,特别是农村信用社经营有着较大的负面影响,农村信用社所面临的形势甚为严峻。1、降息使农村信用社利差缩小。 展开更多
关键词 农村信用社 降息措施 利差缩小 扩大内需 再贷款利率 负面影响 利率下调 政策内涵 国民经济发展 业务经营
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