基于PSCAD的光伏阵列和MPPT控制器的仿真模型 被引量：86

1

作者 孙自勇 宇航 +2 位作者 严干贵 李军徽 陈葳 《电力系统保护与控制》 EI CSCD 北大核心 2009年第19期61-64,共4页

基于光伏模块直流物理模型,在PSCAD仿真环境下,开发了光伏阵列仿真模型。此外,考虑到太阳能的波动性和随机性对光伏阵列的影响,开发了最大功率点跟踪(Maximum Power Point Tracking,MPPT)控制器仿真模型,保证光伏阵列在任何当前日照下... 基于光伏模块直流物理模型,在PSCAD仿真环境下,开发了光伏阵列仿真模型。此外,考虑到太阳能的波动性和随机性对光伏阵列的影响,开发了最大功率点跟踪(Maximum Power Point Tracking,MPPT)控制器仿真模型,保证光伏阵列在任何当前日照下不断获得最大功率输出。仿真结果表明,搭建的仿真模型能够准确的反映实际物理装置的特性与功能,可以用于光伏发电并网及储能方面的仿真研究。 展开更多

关键词 光伏发电 最大功率点跟踪 PSCAD仿真

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牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定 被引量：12

2

作者 孙自勇 陈均勇 +4 位作者 陈新园 汪晶 田鹏鹏 吴盛 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期41-48,共8页

　用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sephar... 　用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly＿Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿β＿naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx＿hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp＿Asp＿Asp＿Asp＿Lys＿肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶. 展开更多

关键词 肠激酶 毕赤酵母 分泌表达 纯化 酶切 免疫印迹 丝氨酸蛋白水解酶

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液相色谱与串联质谱偶联在蛋白质序列分析中的应用 被引量：10

3

作者 孙自勇 吴盛 +1 位作者 王石泉 刘建宁 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2003年第2期126-131,共6页

本文对液相色谱与电喷雾电离串联质谱仪偶联 (LC ESI MS MS)技术分析蛋白质序列的方法进行了详细介绍。并以尿激酶原的一个酶解片段的LC ESI MS MS图谱为例 。

关键词 蛋白质序列分析 液相色谱 串联质谱偶联 多肽 氨基酸序列 尿激酶原

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基于DSP的无刷无位置直流电动机调速系统的研究 被引量：5

4

作者 孙自勇 李广波 +1 位作者 侯强 程景萌 《电力系统保护与控制》 EI CSCD 北大核心 2009年第10期106-110,共5页

为了能够准确地获得无刷无位置直流电动机转子位置的换相信号,采用基于虚拟中性点电位的三次谐波检测法,并对此检测法进行仿真和实验验证,设计出了以TMS320F2812为核心的全数字调速系统,给出了硬件电路的设计,并对九点五态控制器做出了... 为了能够准确地获得无刷无位置直流电动机转子位置的换相信号,采用基于虚拟中性点电位的三次谐波检测法,并对此检测法进行仿真和实验验证,设计出了以TMS320F2812为核心的全数字调速系统,给出了硬件电路的设计,并对九点五态控制器做出了数学解释。实验结果表明:该系统具有较强的鲁棒性和抗干扰能力,且超调量小,响应时间快。 展开更多

关键词 TMS320F2812 九点五态控制器 无刷直流电机 三次谐波

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重组人脑钠素在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定 被引量：4

5

作者 孙自勇 朱镇华 +5 位作者 陈均勇 刘莉莉 张巍 杨庆 张菁 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第1期34-40,共7页

人脑钠素(hBNP，human brain natriuretic peptide)是心室分泌的由32个氨基酸组成的多肽激素．临床研究表明，hBNP是治疗充血型心衰竭的一种安全有效的多肽药物．化学合成脑钠素全基因，以pET32a为表达载体，构建了硫氧还蛋白-脑钠素(th... 人脑钠素(hBNP，human brain natriuretic peptide)是心室分泌的由32个氨基酸组成的多肽激素．临床研究表明，hBNP是治疗充血型心衰竭的一种安全有效的多肽药物．化学合成脑钠素全基因，以pET32a为表达载体，构建了硫氧还蛋白-脑钠素(thioredoxin—hBNP)融合蛋白表达质粒，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，融合蛋白的表达量占全菌蛋白量的25％以上．融合蛋白经肠激酶裂解、Zn—Sepharose亲和层析和C4反相高效液相层析，从每升培养液中可获取4mg rhBNP，纯度达到95％．经质谱测定，rhBNP样品的分子量为3464Da．体外活性测定结果表明，rhBNP样品对兔胸主动脉条具有显著的血管舒张效应，其ED50为(2．24±0．58)×10^-6mg／mL． 展开更多

关键词 重组人脑钠素 大肠杆菌 表达 纯化 鉴定 肠激酶 酶解 多肽激素

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用富士变频器和PLC实现供水系统的自动恒压控制 被引量：1

6

作者 孙自勇 侯强 +1 位作者 史兴才 陈葳 《东北电力大学学报》 2008年第6期109-112,共4页

介绍一种变频调速恒压供水系统,该系统能够根据运行负荷的变化自动调节供水系统水泵的数量和转速,使整个系统始终保持高效节能的最佳状态。文中详细介绍了系统的控制原理及硬件电路。恒压供水控制系统的基本控制策略是:采用电动机调速... 介绍一种变频调速恒压供水系统,该系统能够根据运行负荷的变化自动调节供水系统水泵的数量和转速,使整个系统始终保持高效节能的最佳状态。文中详细介绍了系统的控制原理及硬件电路。恒压供水控制系统的基本控制策略是:采用电动机调速装置与可编程控制器(PLC)构成控制系统,完成供水压力的闭环控制,在管网流量变化时达到稳定供水压力和节约电能的目的。系统的控制目标是泵站总管的出水压力,系统设定的给水压力值与反馈的总管压力实际值进行比较,其差值输入具有压力显示的PID调节器运算处理后,输出模拟信号给变频器。用变频器来实现恒压供水,与用调节阀门来实现恒压供水相比较,节能效果十分显著。系统的优点是启动平稳,启动电流可限制在额定电流以内,从而避免了启动时对电网的冲击;由于泵的平均转速降低了,从而可延长泵和阀门等使用寿命;可以消除启动和停机时的水锤效应。 展开更多

关键词 供水系统 变频调速 PLC控制器 变频器

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蛋白质特异性断裂试剂研究进展

7

作者 孙自勇 周颂 +3 位作者 胡建中 朱德煦 陈晓华 朱龙根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第4期312-317,共6页

蛋白质特异性断裂试剂是近年来发展起来的一些具有特异性断裂肽键功能的化学工具．这些断裂试剂可分为两类，一类通过氧化断裂机制实现蛋白空间结构特异性切割，另一类通过水解断裂机制实现序列特异性切割．蛋白质特异性断裂试剂在蛋白... 蛋白质特异性断裂试剂是近年来发展起来的一些具有特异性断裂肽键功能的化学工具．这些断裂试剂可分为两类，一类通过氧化断裂机制实现蛋白空间结构特异性切割，另一类通过水解断裂机制实现序列特异性切割．蛋白质特异性断裂试剂在蛋白质序列测定，蛋白质的结构与功能研究，蛋白质与核酸相互作用研究以及新型化学治疗药物的合成等方面有着广阔的应用前景． 展开更多

关键词 蛋白质特异性断裂 氧化断裂 水解断裂

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尿激酶受体研究进展

8

作者 孙自勇 王石泉 +2 位作者 吴佳平 陈均勇 刘建宁 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期145-150,共6页

细胞表面的尿激酶受体是一种高度糖基化的蛋白质,通过糖基磷脂酰肌醇锚定在细胞膜上。尿激酶受体除能与尿激酶或尿激酶原结合外还与玻连蛋白,整合素,α2巨球蛋白受体-低密度脂蛋白相关蛋白等相互作用。细胞表面的尿激酶受体不仅能促进... 细胞表面的尿激酶受体是一种高度糖基化的蛋白质,通过糖基磷脂酰肌醇锚定在细胞膜上。尿激酶受体除能与尿激酶或尿激酶原结合外还与玻连蛋白,整合素,α2巨球蛋白受体-低密度脂蛋白相关蛋白等相互作用。细胞表面的尿激酶受体不仅能促进纤溶酶原的激活、细胞外基质的降解,一些生长因子的释放或活化,而且还参与细胞粘附以及尿激酶/纤溶酶原激活物抑制剂复合物的代谢和细胞迁移。在肿瘤患者血液中可溶性尿激酶受体含量显著高于正常人,因而对尿激酶受体含量的测定可作为临床肿瘤诊断的指标。动物实验结果表明,阻断尿激酶与尿激酶受体的结合或抑制尿激酶受体的表达可显著抑制肿瘤的浸润及转移。 展开更多

关键词 尿激酶受体 糖基化蛋白质 细胞膜 激活 纤溶酶原激活系统 肿瘤

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地区电网用电特性分析及年用电量预测 被引量：1

9

作者 孙自勇 夏旭 《东北电力大学学报》 2008年第2期42-47,共6页

利用灰色预测原理简单、建模数据少和运算方便的优点,结合神经网络非线性函数逼近能力强的特性,在此基础上提出了灰色-神经网络预测方法,并对哈尔滨市用电量进行了的仿真预测。

关键词 灰色预测 神经网络 用电量预测

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肽图法对细胞色素C中铂修饰位点研究

10

作者 孙自勇 钱卫平 +1 位作者 秦素珍 朱德煦 《东南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 1993年第3期114-117,共4页

生物体系电子转移反应的研究是当今生物无机化学的一个热点,许多重要的生命过程如光合作用、呼吸链氧化磷酸化等均涉及电子转移。电子转移反应速率受驱动力、电子给体与受体之间的距离以及传递介质等因素的影响。

关键词 肽图法 细胞色素C 铂 修饰位点

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K_2PtCl_4与细胞色素C修饰体系研究

11

作者 孙自勇 夏志成 +2 位作者 杨至灏 唐雯霞 朱德煦 《东南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 1992年第5期7-13,共7页

马心细胞色素C(以下简写为Cyt·C)与K_2PtCl_4的反应混合物在Sephadex G-75上分出4个组分,对应于Cyt·C寡聚体、三聚体、二聚体及单体,此结果与SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(以下简写为SDS-PAGE)测定的各组分的分子量相一致,这揭示了K... 马心细胞色素C(以下简写为Cyt·C)与K_2PtCl_4的反应混合物在Sephadex G-75上分出4个组分,对应于Cyt·C寡聚体、三聚体、二聚体及单体,此结果与SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(以下简写为SDS-PAGE)测定的各组分的分子量相一致,这揭示了K_2PtCl_4与Cyt·C存在多位点修饰,而非如Kostic报道的Met-65为其唯一修饰位点,此结论通过分析K_2PtCl_4与His-33羧甲基化的Cyt·C修饰反应产物所证实,同时也和同样条件下游离His,Met与K_2PtCl_4的配位作用相吻合,对Cyt·C二聚体衍生物的还原电位、紫外-可见光谱以及二阶导数傅利叶变换红外光谱研究表明,血红素周围的电子环境仍然保持完整,但其二级结构有较大的扰动. 展开更多

关键词 细胞色素 化学修饰/四氯合铂酸钾(K_2PtCl_4)

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四氯合铂酸钾(K_2PtCl_4)与细胞色素c(Cyt·c)修饰体系的进一步研究

12

作者 孙自勇 夏志成 +2 位作者 杨至灏 唐雯霞 朱德煦 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第1期26-31,共6页

从K_2PtCl_4与Cyt·c反应产物中分离得四个组分,SDS-PAGE及元素分析测定结果表明,它们分别对应于Cyt·c寡聚体、三聚体、二聚体及单体。这揭示了K_2PtCl_4对Cyt·c存在多位点修饰,南非如Kostic报道的Met-65为其唯一修饰位... 从K_2PtCl_4与Cyt·c反应产物中分离得四个组分,SDS-PAGE及元素分析测定结果表明,它们分别对应于Cyt·c寡聚体、三聚体、二聚体及单体。这揭示了K_2PtCl_4对Cyt·c存在多位点修饰,南非如Kostic报道的Met-65为其唯一修饰位点。通过K_2PtCl_4与羧甲基化Cyt·c修饰产物的分析研究,证实了另一标记位点His-33的存在。对Cyt·c二聚体衍生物的还原电位、紫外一可見及红外光谱研究表明,Cyt·c血红素周围的电子环境仍保持完整,但其二级结构有较大的扰动。 展开更多

关键词 化学修饰 细胞色素C 四氯合铂酸钾

原文传递

重组人尿激酶原药效学研究 被引量：9

13

作者 赵专友 刘蓓钫 +3 位作者 刘厚孝 孙自勇 张菁 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期420-434,共15页

利用人血浆及其产生的血栓凝块 ,在试管中模拟纤溶酶原激活剂在体内引起血栓溶解的过程及麻醉开胸犬电刺激冠脉左旋支引起的冠脉血栓形成模型评价重组人尿激酶原的溶栓活性 ,并与尿激酶进行比较 .InVitro实验结果表明 :2 4 0IU /mL是 pr... 利用人血浆及其产生的血栓凝块 ,在试管中模拟纤溶酶原激活剂在体内引起血栓溶解的过程及麻醉开胸犬电刺激冠脉左旋支引起的冠脉血栓形成模型评价重组人尿激酶原的溶栓活性 ,并与尿激酶进行比较 .InVitro实验结果表明 :2 4 0IU /mL是 prouk血纤维蛋白专一的最大浓度 ,低浓度的重组prouk比天然 prouk具有更高的溶栓能力 ,这可能与其非糖基化结构有关 .当重组prouk浓度小于 1μg/mL时 ,它在血浆中几乎不降解任何纤维蛋白原 .犬静脉给予重组人尿激酶原 9× 10 4 、4 .5× 10 4 、2 .2 5× 10 4 IU·kg- 1 对冠脉血栓产生显著的溶栓效果 ,栓塞冠脉血管很快出现再通 ,残存血栓较溶剂对照分别减少了 6 9.2 %、5 7.0 %、4 3.1% ;心肌梗死范围明显缩小 ;与等剂量尿激酶溶栓作用相似 .血浆优球蛋白溶解时间明显缩短 ;溶栓不伴有明显的血浆纤维蛋白原降解 ,而尿激酶溶栓的同时 ,纤维蛋白原明显降低 .除高剂量组个别动物外 ,对伤口出血量增加出血时间无明显影响 . 展开更多

关键词 重组人尿激酶原 溶栓治疗 纤维蛋白原 药效学 血栓 溶栓药

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重组人尿激酶原的工业化制备与性质研究 被引量：5

14

作者 陈于红 孙自勇 +4 位作者 朱镇华 张菁 傅一工 朱德煦 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期407-415,共9页

将含有 pET2 9a prouk重组质粒的人尿激酶原工程菌经 10L种子罐培养及 10 0L发酵 ,IPTG诱导表达 ,其表达量为占菌体总蛋白的 2 0 % ,表达产物经体外变复性 ,CM 纤维素离子交换层析 ,Superdex 75分子筛层析及Affi preppolymyxinsupport... 将含有 pET2 9a prouk重组质粒的人尿激酶原工程菌经 10L种子罐培养及 10 0L发酵 ,IPTG诱导表达 ,其表达量为占菌体总蛋白的 2 0 % ,表达产物经体外变复性 ,CM 纤维素离子交换层析 ,Superdex 75分子筛层析及Affi preppolymyxinsupport亲和层析去热源 ,每 10 0L发酵液得重组人尿激酶原纯品 6g ,纯度达 95 %以上 ,比活大于 1.2× 10 4 IU /mg ,双链含量低于0 .5 % ,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准 .其分子量 (质谱测定 )、氨基酸组成、N、C 端氨基酸序列分析等均与理论值相符 . 展开更多

关键词 重组人尿激酶原 发酵 活化 纯化 工业化制备 基因重组技术 IPIG诱导表达

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重组人尿激酶原急性毒性和长期毒性的研究 被引量：2

15

作者 张培祥 刘蓓钫 +8 位作者 方泰慧 张菁 徐立 陈于红 罗炳辉 孙自勇 杨世华 朱德煦 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期458-472,共15页

(1)重组人尿激酶原 (prouk)单剂量分别经静脉和腹腔注射给药均未测出小鼠的LD50 ,因此改作其最大给药量 .结果表明 ,prouk单剂量经静脉及腹腔注射给药小鼠的最大给药量不低于 9,0 0 0万IU /kg .(2 ) prouk 36 .0万IU/kg、6 7.5万IU/kg、... (1)重组人尿激酶原 (prouk)单剂量分别经静脉和腹腔注射给药均未测出小鼠的LD50 ,因此改作其最大给药量 .结果表明 ,prouk单剂量经静脉及腹腔注射给药小鼠的最大给药量不低于 9,0 0 0万IU /kg .(2 ) prouk 36 .0万IU/kg、6 7.5万IU/kg、135 .0万IU/kg和 2 70 .0万IU/kg四个剂量组连续给食蟹猴静脉滴注 14d ,每组 4只猴 ,雌雄各半 .实验过程中未见动物死亡 .prouk 36 .0万IU/kg剂量组的食蟹猴给药期及恢复期 ,精神状态良好 ,一般行为活动正常 ,体重、分泌物、食欲及摄食量、心电图、血常规、血液生化、体表观察、尿常规和粪便隐血试验等基本正常 ,无明显变化 .给药第 14天和恢复期的脏器系数与病理组织学检查表明 ,动物的脏器、组织均未见由药物引起的异常病理改变 ,与生理盐水组或赋形剂组之间比较均无明显差异 .而prouk 6 7.5万IU/kg、135 .0万IU/kg、2 70 .0万IU /kg剂量组的食蟹猴出现皮下出血、充血、紫癜、尿、粪便隐血反应阳性、贫血以及心率加快等症状 .给药期及恢复期 ,血清中检测出少量prouk抗体 .结果表明 ,prouk的无毒安全剂量不低于 36 .0万IU/kg . 展开更多

关键词 重组人尿激酶原 急性毒性 长期毒性 溶栓药物 毒性反应 安全剂量

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重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的工业化制备与性质研究 被引量：1

16

作者 朱镇华 孙自勇 +7 位作者 陈于红 张菁 王石泉 杨庆 刘莉莉 丁楅森 陈新园 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期7-15,共9页

　将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20%,表达产物经体外变复性、TI Sepharose亲和层析、SP Sepharose离子交换层析,每100L发酵液得... 　将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20%,表达产物经体外变复性、TI Sepharose亲和层析、SP Sepharose离子交换层析,每100L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4g,纯度达95%以上,比活大于500000IU/mg,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准.其分子量(质谱测定)、氨基酸组成、N、C-端氨基酸序列分析等均与理论值相符.同时进行了等电点测定及肽图分析等性质研究. 展开更多

关键词 重组人组织型纤溶酶原激活剂 缺失变体 制备 发酵 活化 纯化 蛋白

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重组人尿激酶原氨基末端片段的制备及活性测定 被引量：1

17

作者 汪晶 陈新园 +3 位作者 孙自勇 姚宏伟 陈均勇 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期66-74,共9页

　尿激酶原的N 末端135个氨基酸片段包含了表皮生长因子结构域和环柄结构域,参与了尿激酶原和其受体的结合以及尿激酶原诱导的化学趋化活性.利用RT PCR,从人脐带静脉内皮细胞中克隆ATF基因.将ATF基因插入pET 29a(+)中构建表达质粒pET 29... 　尿激酶原的N 末端135个氨基酸片段包含了表皮生长因子结构域和环柄结构域,参与了尿激酶原和其受体的结合以及尿激酶原诱导的化学趋化活性.利用RT PCR,从人脐带静脉内皮细胞中克隆ATF基因.将ATF基因插入pET 29a(+)中构建表达质粒pET 29a(+)/ATF,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达及纯化后,从每升培养液中获得15mgrhATF,其纯度超过95%.活性测定结果表明rhATF能够阻断尿激酶原与尿激酶受体的结合,并能抑制尿激酶对纤溶酶原以及纤溶酶对尿激酶原的激活. 展开更多

关键词 ATF 尿激酶受体 纯化 抑制 制备 活性测定 多肽

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重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化

18

作者 陈均勇 陈新园 +6 位作者 孙自勇 刘莉莉 朱镇华 汪晶 吴盛 王石泉 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期58-65,共8页

　将化学合成的rhPTH(1 34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET＿35b(+),使rhPTH(1 34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端,并得到高效表达.融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经FactorXa裂解释放出rhPTH(1 34),再通过纤维素树... 　将化学合成的rhPTH(1 34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET＿35b(+),使rhPTH(1 34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端,并得到高效表达.融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经FactorXa裂解释放出rhPTH(1 34),再通过纤维素树脂亲和层析、C4反向高效液相色谱纯化得到rhPTH(1 34)纯品.每升培养液可获取3mg高纯度的rhPTH(1 34).经质谱测定,所得样品的分子量为4117.0Da,与rhPTH(1 34)理论分子量一致. 展开更多

关键词 甲状旁腺激素 大肠杆菌 表达 纯化 纤维素结合结构域 FACTOR Xa

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重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定

19

作者 吴盛 陈新园 +5 位作者 陈均勇 刘莉莉 朱镇华 孙自勇 张燕 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第1期49-57,共9页

用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中，经过KpnI／SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游．将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性... 用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中，经过KpnI／SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游．将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白-胸腺肽α1融合蛋白．经凝血因子Xa酶切、Zn—Sepharose亲和层析以及反相高效液相色谱纯化获得3．8mg重组人胸腺肽．小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系． 展开更多

关键词 胸腺肽 大肠杆菌 表达 纯化 鉴定 酶解

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Kunitz抑制剂家族成员抑肽酶对纤溶酶原活化的抑制作用(英文)

20

作者 王莹 孙自勇 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期478-488,共11页

抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水... 抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水解活性.用u_PA研究了上述作用的机制,发现抑肽酶与u_PA的丝氨酸蛋白酶功能区特异性结合,而与纤溶酶原没有相互作用.抑肽酶与u_PA的结合并不阻断u_PA的活性位点,因为u_PA对小分子底物的水解活性仍然保持.上述发现提示抑肽酶可能存在另一种抑制作用模式,该模式不同于以前报道的关于Kunitz抑制剂或纤溶酶原激活酶抑制剂的作用.由于人体内的Kunitz抑制剂与抑肽酶在结构上非常相似,根据研究结果,推测体内纤溶酶原的激活作用并非仅受丝氨酸蛋白酶抑制剂的控制. 展开更多

关键词 抑肽酶 丝氨酸蛋白酶 Kunitz抑制剂 抑制作用 尿激酶型纤溶酶原激活利 组织型纤溶酶原激活剂

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