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球虫病防控:防重于治,精准用药——广东省农科院动物卫生研究所所长孙铭飞研究员专访
1
作者 胡俊康(摄影) 孙铭飞 周风珍 《广东饲料》 2024年第6期11-14,共4页
鸡球虫病是鸡的一种常见且危害十分严重的寄生虫病。春夏季节,南方阴雨绵绵,空气湿度较大,是球虫病的高发期。为此,广东饲料编辑部特意采访了我国著名的家禽疾病防控专家、广东省农业科学院动物卫生研究所所长孙铭飞研究员,就家禽球虫... 鸡球虫病是鸡的一种常见且危害十分严重的寄生虫病。春夏季节,南方阴雨绵绵,空气湿度较大,是球虫病的高发期。为此,广东饲料编辑部特意采访了我国著名的家禽疾病防控专家、广东省农业科学院动物卫生研究所所长孙铭飞研究员,就家禽球虫病的流行现状、科学防控策略进行了专访,为行业答疑解惑。 展开更多
关键词 广东省农科院 鸡球虫病 空气湿度 疾病防控 卫生研究所 流行现状 防控策略 寄生虫病
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粤东地区鸡球虫病流行病学调查 被引量：2
2
作者 余志会 方肆云 +14 位作者 刘文俊 戚南山 李娟 吴彩艳 林栩慧 吕敏娜 蔡海明 胡俊菁 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 尹理君 张健騑 廖申权 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2024年第1期82-86,共5页
鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞造成的原虫病。为明确粤东地区鸡群中的球虫病流行情况,该研究于2018-2019年在粤东地区18个规模化养鸡场采集700份粪便样品,利用PCR方法检测样品中鸡球虫感染情况。结果显示,粤东地... 鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞造成的原虫病。为明确粤东地区鸡群中的球虫病流行情况,该研究于2018-2019年在粤东地区18个规模化养鸡场采集700份粪便样品,利用PCR方法检测样品中鸡球虫感染情况。结果显示,粤东地区的鸡球虫病总检出率高达95.71%(67/70),主要流行虫种为柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫,检出率分别为55.71%(39/70)和48.57%(34/70)。1-25日龄肉鸡堆型艾美耳球虫的检出率最高,为69.23%;大于25日龄肉鸡柔嫩艾美耳球虫的检出率最高,可高达60%。分析发现粤东地区鸡球虫混合感染情况普遍存在,但单一虫种感染占比最高(42.86%)。本研究对粤东地区规模化养鸡场的鸡球虫病流行情况进行系统研究,为粤东地区鸡球虫病的综合防控提供理论依据。 展开更多
关键词 粤东地区 鸡球虫病 PCR 流行病学
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G型产气荚膜梭菌的分离鉴定及其在鸡坏死性肠炎发病模型中的应用 被引量：1
3
作者 孙栋 宋忠锋 +7 位作者 倪君丽 方肆云 王定爱 申翰钦 严专强 戚南山 孙铭飞 顾有方 《安徽科技学院学报》 2024年第2期31-38,共8页
目的:探讨不同诱导因素对鸡坏死性肠炎(Necrotic enteritis,NE)的诱发效果,以便建立鸡坏死性肠炎的发病模型。方法:以安徽省某规模化鸡场采集的病鸡肠道样品中分离出的G型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)(CPG-AH5... 目的:探讨不同诱导因素对鸡坏死性肠炎(Necrotic enteritis,NE)的诱发效果,以便建立鸡坏死性肠炎的发病模型。方法:以安徽省某规模化鸡场采集的病鸡肠道样品中分离出的G型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)(CPG-AH5株)为病原菌,分析单独或联合感染毒害艾美耳球虫对在饲喂高蛋白饲料(添加鱼粉)和不饲喂高蛋白饲料条件下,诱发鸡坏死性肠炎的影响。结果:无诱导因素时,1.1×10^(9)CFU/mL剂量下CPG-AH5株感染可造成肠道损伤(平均病变评分为1.5±0.85分);单一诱导因素(鱼粉或球虫)不能有效促进CPG-AH5株的感染,肠道病变与无诱导因素条件下无显著性提高(2.0±1.15、2.4±1.08,P>0.05);多个诱导因素(鱼粉和球虫)联合诱导可有效促进CPG-AH5株的感染,与无诱导因素和单一诱导因素相比肠道病变显著性提高(3.6±0.52,P<0.001)。结论:鱼粉和球虫联合诱导可显著促进G型产气荚膜梭菌的感染,提高肠道病变。本研究建立了一种鸡坏死性肠炎发病模型,有利于对鸡坏死性肠炎发病机制的研究,为疫苗及药物的后续研发和筛选评价提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 坏死性肠炎 G型产气荚膜梭菌 毒害艾美耳球虫 发病模型
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鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析
4
作者 倪君丽 刘欣超 +7 位作者 孙栋 方肆云 王定爱 申翰钦 严专强 戚南山 孙铭飞 顾有方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5159-5172,共14页
为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其... 为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 多表位重组质粒 真核表达 DNA疫苗
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禽类隐孢子虫与其他病原感染相关性研究进展
5
作者 李易 魏光伟 +10 位作者 李娟 邱茜茜 廖申权 戚南山 吕敏娜 林栩慧 蔡海明 胡俊菁 张健騑 张浩吉 孙铭飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期211-218,共8页
隐孢子虫作为一种重要的胞内寄生原虫,感染谱广泛,主要侵犯呼吸道、胃肠道和法氏囊,禽类感染后主要表现为精神萎靡、腹泻、免疫低下和呼吸困难等临床症状。多重病原协同感染是近些年禽病的主要流行形式,禽类隐孢子虫作为一种重要的机会... 隐孢子虫作为一种重要的胞内寄生原虫,感染谱广泛,主要侵犯呼吸道、胃肠道和法氏囊,禽类感染后主要表现为精神萎靡、腹泻、免疫低下和呼吸困难等临床症状。多重病原协同感染是近些年禽病的主要流行形式,禽类隐孢子虫作为一种重要的机会性致病病原,其感染与宿主的免疫功能直接相关,当器官/组织伴有其他病原同时感染时,可使疾病风险和防控难度加剧。目前,禽类隐孢子虫流行病学数据相对较少,与其他病原感染相关性研究尚不明朗。本文通过对国内外研究数据的梳理、归纳,对禽类隐孢子虫流行及其与呼吸道、消化道和法氏囊感染的其他病原的相关性进行综述,为进一步研究其间的协同致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 禽类隐孢子虫 感染相关性 禽胃肠道病原 禽呼吸道病原 禽法氏囊病原
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顶复门原虫多胺合成研究进展
6
作者 殷熙娟 廖申权 +9 位作者 戚南山 李娟 吕敏娜 蔡海明 胡俊菁 林栩慧 宋勇乐 张健騑 刘文俊 孙铭飞 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期105-110,共6页
多胺是一类聚阳离子脂肪族化合物,广泛存在于生物体内,其在顶复门原虫的生长、发育和繁殖等多个阶段发挥着重要作用。顶复门原虫的多胺合成途径存在多样性,其与宿主细胞的经典路径不同,且顶复门原虫多胺生物合成限速酶(鸟氨酸脱羧酶与S... 多胺是一类聚阳离子脂肪族化合物,广泛存在于生物体内,其在顶复门原虫的生长、发育和繁殖等多个阶段发挥着重要作用。顶复门原虫的多胺合成途径存在多样性,其与宿主细胞的经典路径不同,且顶复门原虫多胺生物合成限速酶(鸟氨酸脱羧酶与S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶)的半衰期与宿主细胞限速酶的半衰期存在显著差异。因此,顶复门原虫多胺合成限速酶及转运载体成为抗原虫药物研发的候选靶标,以顶复门原虫多胺合成限速酶及多胺转运载体为靶标的抗寄生原虫抑制剂研究取得一定进展。论文综述了顶复门原虫多胺的生物学功能、生物合成途径及其抑制剂研究进展,以期为抗原虫药物靶标研究及新型抑制剂研发提供参考。 展开更多
关键词 顶复门原虫 多胺合成 药物靶标
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产气荚膜梭菌四环素耐药基因双重荧光定量PCR检测方法的建立
7
作者 欧兰欣 叶碧锦 +13 位作者 孙铭飞 戚南山 李娟 吕敏娜 林栩慧 蔡海明 胡俊菁 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 尹理君 张健騑 廖申权 张浩吉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4630-4637,共8页
旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法,为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA(P)和tetB(P)的保守序列设计引物和探针,构建重组质粒,... 旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法,为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA(P)和tetB(P)的保守序列设计引物和探针,构建重组质粒,对退火温度和体系进行优化,同时采用药敏纸片琼脂扩散法测定菌株对四环素类药物的敏感性加以验证。结果发现,优化后的反应程序为95℃30 s;95℃5 s,56℃30 s,共39个循环。使用该反应程序仅能扩增重组质粒,对照菌株无扩增曲线;组内变异系数小于1.3%,组间变异系数小于1.8%,重组质粒最低检测限度为102 copies·μL^(-1)。使用本方法对33份产气荚膜梭菌临床分离株样品进行耐药基因检测,同时进行药敏试验,发现本研究建立的检测方法对四环素耐药基因的检出率均为75.8%(25/33),且与药敏试验结果一致。综上,本研究建立了一种特异、敏感、重复性好的产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 四环素 tetA(P) tetB(P) 双重荧光定量PCR
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鸡球虫体外培养模型及应用研究进展
8
作者 潘晓婷 李娟 +10 位作者 陈兵 刘俊杰 戚南山 廖申权 吕敏娜 林栩慧 蔡海明 胡俊菁 宋勇乐 白银山 孙铭飞 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期292-301,共10页
鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞内所引起的一种寄生性原虫病,感染鸡体重减轻、营养不良、肠道损伤等,严重危害养鸡业的健康发展。球虫的生命周期包括从无性阶段到有性阶段的转换并局限于一个宿主。目前对球虫的研究主要包括... 鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞内所引起的一种寄生性原虫病,感染鸡体重减轻、营养不良、肠道损伤等,严重危害养鸡业的健康发展。球虫的生命周期包括从无性阶段到有性阶段的转换并局限于一个宿主。目前对球虫的研究主要包括在细胞生物学及其不同生命阶段的蛋白质表达和运输机制、宿主细胞入侵和宿主-寄生虫相互作用、新型药物靶标筛选等方面。鉴于研究问题的多样性,以及减少和取代动物试验的要求,建立高效的体外培养模型成为研究鸡球虫生物学特性、抗球虫疫苗和药物的基本条件。笔者重点阐述了鸡球虫体外培养模型及其在药物抗虫效果研究中的应用,包括鸡胚培养模型、二维培养模型(原代细胞培养模型、传代细胞系培养模型)及三维类器官培养模型。越来越多培养技术的突破为研究球虫生命周期阶段和干预策略开辟了新的途径,也为深入了解鸡球虫致病机制、抗球虫药物研发提供依据。 展开更多
关键词 鸡 艾美耳球虫 体外培养模型
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3株柔嫩艾美耳球虫广东地区临床分离株的耐药性分析
9
作者 尹理君 方肆云 +11 位作者 林栩慧 廖申权 李娟 吕敏娜 吴彩艳 蔡海明 胡俊菁 肖文婉 张小慧 张健騑 戚南山 孙铭飞 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第10期63-70,共8页
为了解广东地区鸡球虫耐药性情况,分别从惠州、肇庆和韶关地区采集鸡场样品,利用球虫单卵囊分离纯化技术得到优势虫株柔嫩艾美耳球虫纯种卵囊,通过鸡体试验对各地区优势虫株进行复方磺胺氯吡嗪钠、尼卡巴嗪、地克珠利等11种常用抗球虫... 为了解广东地区鸡球虫耐药性情况,分别从惠州、肇庆和韶关地区采集鸡场样品,利用球虫单卵囊分离纯化技术得到优势虫株柔嫩艾美耳球虫纯种卵囊,通过鸡体试验对各地区优势虫株进行复方磺胺氯吡嗪钠、尼卡巴嗪、地克珠利等11种常用抗球虫药物的耐药性评估。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫百分率(POAA)4项指标,综合评估不同地区虫株对不同抗球虫药物的耐药性及耐药程度。结果:柔嫩艾美耳球虫惠州株(ETHZ-Y)对氯羟吡啶耐药性最强,对马度米星铵呈中度耐药;肇庆株(ETZQ-Y)对氯羟吡啶、盐酸氯苯胍、癸氧喹酯、甲基盐霉素和地克珠利等药物完全耐药,对拉沙洛西钠耐药性最弱;韶关株(ETSG-Y)对氯羟吡啶和地克珠利等药物耐药性最为严重,而尼卡巴嗪的抗球虫效果相对较好;3个地方虫株普遍对复方磺胺氯吡嗪钠、地克利珠、癸氧喹酯、二硝托胺、氯羟吡啶、甲基盐霉素、莫能菌素和盐酸氯苯胍均产生完全或重度耐药。综上,惠州、肇庆和韶关地区的鸡球虫耐药情况较为严重,应及时针对性地改变用药策略,加强防控、改善环境,避免鸡球虫病暴发的风险。 展开更多
关键词 鸡球虫病 抗球虫药物 耐药性 抗球虫指数
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毒害艾美耳球虫疫苗ENYS株TaqMan qPCR检测方法的建立
10
作者 靳浩展 肖文婉 +13 位作者 廖申权 戚南山 李娟 吕敏娜 蔡海明 胡俊菁 林栩慧 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 尹理君 张健騑 张旭 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2024年第4期1-8,共8页
为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分... 为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分别为500nM和250 nM,标准曲线的斜率为-3.249,相关系数为0.999,可以通过Ct值对模板浓度定量,该方法检测下线为290个拷贝/反应和50个卵囊/反应,灵敏度是传统PCR的10倍;该方法可以特异性检测EnYS株,不能扩增其他种的疫苗株和野毒株以及肠道病原菌;重复性检测的变异系数小于0.6%,重复性良好。本研究针对E.necatrix EnYS株开发了一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的TaqMan qPCR检测方法,为E.necatrix EnYS株的安全性评估及临床应用提供技术支持。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 减毒活疫苗 全基因组重测序 分子标记 TaqMan qPCR
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鸵鸟源隐孢子虫的种类鉴定及其生物学特性研究 被引量：14
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作者 孙铭飞 张龙现 +3 位作者 宁长申 梁宏德 菅复春 张敏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1528-1534,共7页
【目的】掌握鸵鸟隐孢子虫病的流行范围和流行动态,以及研究鸵鸟源隐孢子虫的生物学特性。【方法】应用饱和蔗糖溶液漂浮法检查鸵鸟新鲜粪样404份,详细观察、测量卵囊形态大小;收集纯化阳性样品中的隐孢子虫卵囊,分别人工经口感染幼鸵... 【目的】掌握鸵鸟隐孢子虫病的流行范围和流行动态,以及研究鸵鸟源隐孢子虫的生物学特性。【方法】应用饱和蔗糖溶液漂浮法检查鸵鸟新鲜粪样404份,详细观察、测量卵囊形态大小;收集纯化阳性样品中的隐孢子虫卵囊,分别人工经口感染幼鸵鸟、雏鸡和小白鼠并利用组织病理学试验技术研究其生物学特性。【结果】检测到阳性样品10份,总阳性率为2.48%(10/404),且感染率与鸵鸟日龄有一定的关系。其卵囊平均大小为5.43×4.38μm(4.0～6.0×3.7～5.0μm),形状指数1.24(长/宽),(n=50)。分离到的卵囊能成功感染雏鸡和幼鸵鸟,但不能感染小白鼠。受试雏鸡具有明显的呼吸道症状,而幼龄鸵鸟呼吸道症状较轻微。此外,在两种动物体内的排卵囊规律差别较大,在鸵鸟体内出现多个排卵囊高峰。虫体主要寄生于雏鸡和幼鸵鸟的泄殖腔和法氏囊,引起法氏囊萎缩、微绒毛大量脱落等病理变化。【结论】根据其卵囊形态、宿主范围和虫体寄生部位等生物学特性,结合文献报道,笔者在国内发现并初步鉴定出鸵鸟源隐孢子虫为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)。 展开更多
关键词 鸵鸟 隐孢子虫 交叉感染 电镜 种类鉴定
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鹌鹑隐孢子虫流行病学调查及动物感染试验 被引量：16
12
作者 孙铭飞 闫文朝 +5 位作者 张龙现 宁长申 王进产 席镇 菅复春 姚雷 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期210-214,234,共6页
为掌握畜禽隐孢子虫病在河南省的流行动态,作者于2003年用饱和蔗糖溶液漂浮法检查了郑州、焦作2市7个鹌鹑养殖场429份粪便样品.结果有5个鹌鹑场隐孢子虫感染为阳性,根据卵囊形态初步鉴定1种为贝氏隐孢子虫(Cryptosporid iumbaileyi),另... 为掌握畜禽隐孢子虫病在河南省的流行动态,作者于2003年用饱和蔗糖溶液漂浮法检查了郑州、焦作2市7个鹌鹑养殖场429份粪便样品.结果有5个鹌鹑场隐孢子虫感染为阳性,根据卵囊形态初步鉴定1种为贝氏隐孢子虫(Cryptosporid iumbaileyi),另1种为火鸡隐孢子虫(Cryptosporidiummeleagridis);总阳性率为14.69%(63/429),其中感染贝氏隐孢子虫的阳性率4.66%(20/429),火鸡隐孢子虫的阳性率为10.02%(43/429).并分别用2种卵囊试验感染鹌鹑和雏鸡研究其致病性,观察了2种隐孢子虫在鹌鹑体内的排卵囊规律,以及火鸡隐孢子虫在免疫抑制雏鸡和非免疫抑制雏鸡体内的排卵囊规律. 展开更多
关键词 鹌鹑 隐孢子虫 流行病学 人工感染
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禽类隐孢子虫研究进展 被引量：6
13
作者 孙铭飞 张龙现 +3 位作者 宁长申 闫文朝 王进产 李慧琴 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期522-525,共4页
关键词 禽类 人兽共患寄生虫病 隐孢子虫病 呼吸道症状 公共卫生 首次发现 实验小鼠 20世纪 生产性能 全球性 哺乳类 两栖类 腹泻
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不同表达条件对Eimeria tenella丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响 被引量：7
14
作者 孙铭飞 覃宗华 +5 位作者 谢明权 袁建丰 吕敏娜 余劲术 吴彩艳 蔡建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1158-1165,共8页
为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达Eimeria tenella丙二酸单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响,以生物信息学技术预测的E.tenellaⅡ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(Et-MCAT)编码序列为基础,分别设计引物... 为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达Eimeria tenella丙二酸单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响,以生物信息学技术预测的E.tenellaⅡ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(Et-MCAT)编码序列为基础,分别设计引物扩增完整ORF,采取截除信号肽而保留转导肽以及切除信号肽和转导肽的不同策略,选择pMAL-c2x、pET-32a(+)和pProExHTa3种不同表达载体分别构建重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)后,在不同条件下诱导表达,利用酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性,以评价不同表达策略对表达效果和表达产物活性的影响。表达水平和酶活性分析结果显示,惟切除信号肽和转导肽后的功能蛋白编码区能表达,Rosseta(DE3)/pMAL-c2x-mcat体系的可溶性表达量高于Rosseta(DE3)/pET-32a(+)-mcat,但二者表达产物的酶活性相似,且均随着诱导温度的降低其可溶性蛋白表达量增加。但Rosseta(DE3)/pProExHTa-mcat体系仅能表达不溶性蛋白,且复性后无酶活性,改变诱导温度对表达效果无明显影响。结果表明不同表达载体和诱导温度对大肠杆菌所表达EtMCAT的活性及其表达形式有显著影响,其中融合标签和表达温度可能是主要的影响因素,包涵体表达的重组酶即使复性处理仍难达到酶活性分析的要求。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶 表达载体 酶活性
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鹌鹑源火鸡隐孢子虫生物学特性研究 被引量：3
15
作者 孙铭飞 张龙现 +4 位作者 宁长申 菅复春 赵金凤 王荣军 刘红英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期485-491,共7页
利用鹌鹑源火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis)分别感染雏鸡、雏鸭、雏鸵鸟和小白鼠研究其致病性。结果能成功感染雏鸡、雏鸭和小白鼠,但不能感染雏鸵鸟。2个感染组雏鸡主要在感染后第3天引起雏鸡强烈的腹泻症状,但非免疫抑制... 利用鹌鹑源火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis)分别感染雏鸡、雏鸭、雏鸵鸟和小白鼠研究其致病性。结果能成功感染雏鸡、雏鸭和小白鼠,但不能感染雏鸵鸟。2个感染组雏鸡主要在感染后第3天引起雏鸡强烈的腹泻症状,但非免疫抑制组比免疫抑制组症状稍轻,此外,免疫抑制组的鸡出现了多个排卵囊高峰;感染相同剂量的2个试验组雏鸭的排卵囊显露期均较雏鸡短,非免疫抑制组雏鸭的排卵囊规律呈一过性,2组雏鸭均未出现明显的临床症状;免疫抑制组小白鼠出现多个排卵囊高峰,显露期持续24 d,正常组小白鼠的排卵囊规律呈一过性。根据肠黏膜涂片,抗酸染色观察发现主要虫体寄生于雏鸭的回肠;通过病理组织学切片和电镜观察发现虫体主要寄生于雏鸡的回肠和小白鼠的十二指肠,但均主要引起肠绒毛的大量脱落,黏膜上皮细胞肿胀,炎性细胞浸润。试验证明鸭为鹌鹑源C.meleagridis的新宿主,但敏感性较低;鹌鹑源C.meleagridis不感染非洲雏鸵鸟。发现鹌鹑源C.meleagridis在鹌鹑、鸡和鸭体内寄生部位与小鼠体内寄生部位有明显差异。 展开更多
关键词 火鸡隐孢子虫 鹌鹑 交叉感染 电镜 生物特性
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鹌鹑源火鸡隐孢子虫在小白鼠和雏鸡体内内生发育阶段的超微结构比较 被引量：2
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作者 孙铭飞 张龙现 +5 位作者 宁长申 菅复春 邵兆霞 梁楠 王进产 王荣军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期693-699,共7页
用鹌鹑源火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis)卵囊分别感染昆明系小白鼠和固始雏鸡,用透射电镜和扫描电镜观察比较了C.meleagridis在两种试验动物体内的内生发育虫体超微结构和致病性的差异。利用扫描电镜观察发现,鹌鹑源火鸡隐... 用鹌鹑源火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis)卵囊分别感染昆明系小白鼠和固始雏鸡,用透射电镜和扫描电镜观察比较了C.meleagridis在两种试验动物体内的内生发育虫体超微结构和致病性的差异。利用扫描电镜观察发现,鹌鹑源火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)在小白鼠和雏鸡体内的寄生部位有较大差异,在小白鼠体内寄生于十二指肠,但在雏鸡体内主要寄生于回肠;C.meleagridis深嵌于小白鼠肠微绒毛丛内,微绒毛较为完整;但在雏鸡回肠,C.meleagridis似黏附在肠黏膜表面,微绒毛脱落明显,对雏鸡致病性明显比对小白鼠的致病性强。利用透射电镜在两种试验动物的样品中均观察到不同发育阶段的滋养体、裂殖体和大配子体以及正在孢子化的卵囊。滋养体和裂殖体在发育过程中可明显见到粗面内质网结构,裂殖生殖中期阶段粗面内质网尤其发达;小白鼠体内的C.meleagridis虫体与肠黏膜接触处形成一凹陷,寄生部位较深,而在雏鸡体内无此现象。此外,利用透射和扫描电镜均观察到虫体寄生部位周围微绒毛密度高而且也比其它部位长。形成这些差异的原因有待于进一步探讨。 展开更多
关键词 火鸡隐孢子虫 小白鼠 雏鸡 超微结构 内生发育
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顶复门原虫与细菌Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A:ACP转酰基酶研究进展 被引量：3
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作者 孙铭飞 廖申权 +5 位作者 吴彩艳 戚南山 吕敏娜 袁健丰 于劲术 蔡建平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第8期80-84,共5页
大部分顶复门原虫与人畜重要寄生虫病密切相关。近年来,由于各类药物在寄生虫与细菌病防治中的广泛应用,甚至是滥用,造成了这类寄生虫与细菌的严重抗药性,急需一些新型抗感染性药物的出现。由于在一些顶复门原虫与细菌中广泛存在的Ⅱ型... 大部分顶复门原虫与人畜重要寄生虫病密切相关。近年来,由于各类药物在寄生虫与细菌病防治中的广泛应用,甚至是滥用,造成了这类寄生虫与细菌的严重抗药性,急需一些新型抗感染性药物的出现。由于在一些顶复门原虫与细菌中广泛存在的Ⅱ型脂肪酸代谢途径在其脊椎动物宿主中并不存在,而丙二酰单酰辅酶A:ACP转酰基酶(malonyl-CoA:ACP transacylase,MCAT)是由mcat基因编码的一种巯基酶,负责在起始步骤把丙二酰基团从丙二酰单酰CoA上的硫酯连接部位转移到ACP的磷酸泛酰巯基乙胺臂上而形成丙二酰单酰ACP,对于顶复门原虫和细菌的脂肪酸合成代谢至关重要,成为研究开发药物的理想靶位。文章对ACP转酰基酶的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 顶复门原虫 细菌 丙二酰单酰辅酶A:ACP转酰基酶
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广东一株牛源流行性出血病病毒的分离鉴定 被引量：23
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作者 吕敏娜 朱建波 +10 位作者 李娟 杨振兴 林栩慧 陈琴苓 张健騑 廖申权 戚南山 吴彩艳 陈志虹 李华春 孙铭飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期67-70,共4页
为了解广东反刍动物流行性出血病(EHD)的感染情况,本研究对采集的牛血液样品进行EHD病毒(EHDV)的RT-PCR检测,对核酸检测为阳性的样品进行病毒分离鉴定。将阳性样品接种BHK-21细胞连续传3代时出现细胞病变,扩增出了VP7基因,进行BLAST序... 为了解广东反刍动物流行性出血病(EHD)的感染情况,本研究对采集的牛血液样品进行EHD病毒(EHDV)的RT-PCR检测,对核酸检测为阳性的样品进行病毒分离鉴定。将阳性样品接种BHK-21细胞连续传3代时出现细胞病变,扩增出了VP7基因,进行BLAST序列比对,结果表明该分离株与国内外EHDV分离株的同源性达98%~100%,TCID_(50)为10^(-6.5)/50μL,不能凝集鸡红细胞,表明该分离株为EHDV,命名为GD-N133。根据VP2基因序列的分析和微量中和试验结果,确定该病毒株为EHDV-1型。 展开更多
关键词 流行性出血病病毒 牛 血清型 分离 鉴定
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基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析 被引量：14
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作者 王进产 菅复春 +5 位作者 张龙现 宁长申 闫文朝 孙铭飞 仇书兴 卢庆斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期947-953,共7页
为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征... 为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征,以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析,其结果:河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型;河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C. parvum猪基因I型,即C. suis;河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis;河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi;河南牛源隐孢子虫分离株为C.andersoni。 展开更多
关键词 隐孢子虫 HSP70 18S RRNA 种系发育
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顶复门原虫入侵相关因子的研究进展 被引量：22
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作者 戚南山 孙铭飞 +6 位作者 廖申权 吴彩艳 吕敏娜 袁建丰 余劲术 李祥瑞 蔡建平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期167-174,共8页
顶复门原虫是一类专一性的细胞内寄生原虫,包括弓形虫(Toxoplasma gondii)、隐孢子虫(Cryptosporid-iumspp.)、疟原虫(Plasmodiumspp.)、巴贝斯虫(Babesiaspp.)及艾美耳球虫(Eimeriaspp.)等,是人和动物的重要病原。这类原虫具有相似的... 顶复门原虫是一类专一性的细胞内寄生原虫,包括弓形虫(Toxoplasma gondii)、隐孢子虫(Cryptosporid-iumspp.)、疟原虫(Plasmodiumspp.)、巴贝斯虫(Babesiaspp.)及艾美耳球虫(Eimeriaspp.)等,是人和动物的重要病原。这类原虫具有相似的亚细胞结构和保守的入侵机制。研究结果表明,入侵过程是由大量的入侵相关蛋白分子所介导的,包括微线、棒状体及致密颗粒所分泌的相关蛋白等。随着生物信息学及分子生物学的发展,顶复门原虫入侵相关蛋白分子的研究资料也日益增多。笔者结合最近几年本课题组的研究成果,综述了顶复门原虫入侵相关蛋白因子的最新进展。 展开更多
关键词 顶复门原虫 入侵机制 入侵相关因子
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