目的:研究多黏菌素B通过下调核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。方法:通过MTT法检测多黏菌素B在HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞中的细胞毒...目的:研究多黏菌素B通过下调核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。方法:通过MTT法检测多黏菌素B在HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞中的细胞毒性;使用10、50和100 nmol/L的多黏菌素B处理HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞,通过RT-qPCR方法检测细胞中HBV RNA和HBV DNA水平,ELISA方法检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)水平,明确多黏菌素B对HBV的调控作用。利用转录组测序筛选多黏菌素B调控HBV转录复制的效应分子NF-κB;同时检测敲减及过表达NF-κB对HBV的调控作用;利用双萤光素酶报告基因实验检测NF-κB对Cp、Xp、Sp1和Sp2启动子活性的影响;利用回补实验探究多黏菌素B调控HBV转录复制是否依赖于NF-κB。结果:MTT实验结果显示,浓度低于100μmol/L时,多黏菌素B对HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞无明显毒性。在10、50和100 nmol/L的浓度下,多黏菌素B呈浓度依赖性抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平。通过转录组测序发现,多黏菌素B可以显著抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞中NF-κB的表达水平;进一步,过表达NF-κB显著上调HBV感染的HepG2-NTCP细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平,沉默时则相反;同时,双萤光素酶报告基因实验显示NF-κB可增强HBV Sp2启动子活性。回补实验发现多黏菌素B调控HBV转录复制依赖于NF-κB。结论:多黏菌素B通过下调NF-κB进而抑制HBV Sp2启动子活性,最终抑制HBV转录复制。展开更多
文摘目的:研究多黏菌素B通过下调核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。方法:通过MTT法检测多黏菌素B在HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞中的细胞毒性;使用10、50和100 nmol/L的多黏菌素B处理HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞,通过RT-qPCR方法检测细胞中HBV RNA和HBV DNA水平,ELISA方法检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)水平,明确多黏菌素B对HBV的调控作用。利用转录组测序筛选多黏菌素B调控HBV转录复制的效应分子NF-κB;同时检测敲减及过表达NF-κB对HBV的调控作用;利用双萤光素酶报告基因实验检测NF-κB对Cp、Xp、Sp1和Sp2启动子活性的影响;利用回补实验探究多黏菌素B调控HBV转录复制是否依赖于NF-κB。结果:MTT实验结果显示,浓度低于100μmol/L时,多黏菌素B对HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞无明显毒性。在10、50和100 nmol/L的浓度下,多黏菌素B呈浓度依赖性抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平。通过转录组测序发现,多黏菌素B可以显著抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞中NF-κB的表达水平;进一步,过表达NF-κB显著上调HBV感染的HepG2-NTCP细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平,沉默时则相反;同时,双萤光素酶报告基因实验显示NF-κB可增强HBV Sp2启动子活性。回补实验发现多黏菌素B调控HBV转录复制依赖于NF-κB。结论:多黏菌素B通过下调NF-κB进而抑制HBV Sp2启动子活性,最终抑制HBV转录复制。
