目的:应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),检测糖尿病病人外周血单个核细胞 (PBMC)中TGF-β1mRNA的表达水平。方法:分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,逆转录为cDNA,在扩增体系中加入SYBR Green I,应用FQ-RT-PCR定...目的:应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),检测糖尿病病人外周血单个核细胞 (PBMC)中TGF-β1mRNA的表达水平。方法:分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,逆转录为cDNA,在扩增体系中加入SYBR Green I,应用FQ-RT-PCR定量检测TGF-β1mRNA。结果:重组质粒测序证明插入的片断为TGF-β1特异性片断,荧光定量RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的灵敏度达105拷贝/ml, 线性范围为105-1011拷贝/ml,批内、批间变异系数分别为2.27%-2.56%和4.78%-5.22%,临床应用显示,糖尿病患者PBMC中TGF-β1 mRNA含量显著高于正常。结论:FQ-RT-PCR检测TGF-β1mRNA具有灵敏、特异、快速等特点,为临床应用提供了方法学依据。展开更多
