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上皮性卵巢癌YAP核表达及肿瘤大小与预后的关联性研究
1
作者 李泽莲 肖兰 +4 位作者 江玉 季维雪 陈颍 杨媛媛 曹云霞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第2期298-304,共7页
目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)中YES相关蛋白(YAP)核表达与肿瘤大小及预后关系及YAP作用。方法 120例EOC患者组织标本为实验组,其中早期(Ⅰ+Ⅱ)和晚期(Ⅲ+Ⅳ)EOC分别为38和82例,30例选自子宫肌瘤患者的正常卵巢组织为对照组。免疫组织化... 目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)中YES相关蛋白(YAP)核表达与肿瘤大小及预后关系及YAP作用。方法 120例EOC患者组织标本为实验组,其中早期(Ⅰ+Ⅱ)和晚期(Ⅲ+Ⅳ)EOC分别为38和82例,30例选自子宫肌瘤患者的正常卵巢组织为对照组。免疫组织化学染色法检测YAP蛋白定位及表达,回顾性分析120例EOC患者临床资料,YAP核表达与EOC病理参数及患者预后相关性;不同初始细胞量培养EOC细胞系C13K及OV2008,使用免疫荧光及克隆形成实验分别检测Ki67表达及增殖情况;EOC细胞分别培养至汇合度为60%(低密度组)和90%(高密度组),q-PCR及Western blot分别检测YAP mRNA及蛋白在EOC细胞中表达。结果 YAP蛋白在EOC组织中胞核阳性表达率高于正常卵巢组织(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期EOC肿瘤平均直径大于Ⅲ+Ⅳ期EOC (P<0.01);YAP核高表达与病理学分级、临床分期、糖类抗原125(Ca125>1 000 IU/ml)呈正相关,而与肿瘤大小呈负相关(P均<0.05);生存分析提示肿瘤直径较小(<10 cm)及YAP核高表达与EOC术后3年生存率呈负相关(P<0.01)。低密度组培养C13K及OV2008细胞克隆形成数目多,Ki67及YAP表达高(P<0.01);敲低YAP表达可降低两种培养密度细胞的增殖能力(P<0.05)。结论 YAP核高表达及肿瘤直径小与EOC患者预后负相关,降低YAP核表达可使EOC细胞增殖能力减弱。 展开更多
关键词 YAP 上皮性卵巢癌 细胞增殖 肿瘤大小 细胞密度 预后
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CAFs促进ADH1B甲基化对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响
2
作者 李泽莲 季维雪 +2 位作者 杨媛媛 肖兰 曹云霞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第8期1377-1384,共8页
目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)分泌的IL-6对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法 收取新鲜离体上皮性卵巢癌及正常卵巢上皮组织,分离纯化获得CAFs及正常卵巢成纤维细胞(NFs);蛋白质印迹和免疫荧光实验检测上皮细胞和成纤维细... 目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)分泌的IL-6对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法 收取新鲜离体上皮性卵巢癌及正常卵巢上皮组织,分离纯化获得CAFs及正常卵巢成纤维细胞(NFs);蛋白质印迹和免疫荧光实验检测上皮细胞和成纤维细胞标志物α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、上皮型钙黏附素(E-cadherin)表达;收集CAFs和NFs培养上清液与卵巢癌SKOV3细胞建立间接共培养体系,细胞分为SKOV3单独培养(SKOV3)组、SKOV3与NFs上清液(NFs)组及SKOV3与CAFs上清液(CAFs)组;细胞免疫组化检测SKOV3细胞共CAFs及NFs上清液培养后乙醇脱氢酶1B(ADH1B)表达;甲基化特异性PCR (MSP)、逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及蛋白质印迹实验分别检测甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)干预前后各组细胞ADH1B mRNA表达及甲基化状态、信号转导和激活因子3(STAT3)蛋白磷酸化水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法及Transwell实验分别检测IL-6抑制剂LMT-286及重组IL-6 (rhIL-6)对细胞增殖及侵袭能力的影响。结果 肿瘤成纤维细胞中高表达α-SMA,极低表达E-cadherin;相比较SKOV3组及NFs组,CAFs组ADH1B mRNA及蛋白表达明显下调,同时CAFs组细胞上清液中IL-6水平较SKOV3组及NFs组明显升高;5-Aza-dC作用后,ADH1B甲基化部分逆转;三组细胞ADH1B mRNA和蛋白表达均增加,CAFs组STAT3磷酸化水平下降;LMT-286及rhIL-6干预均仅抑制或促进CAFs组细胞增殖和侵袭,而SKOV3组和NFs组无明显改变。结论 CAFs通过IL-6/STAT3信号通路增强ADH1B甲基化促进卵巢癌细胞增殖和侵袭。 展开更多
关键词 乙醇脱氢酶1B 甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 白细胞介素-6 卵巢癌 细胞增殖
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肿瘤相关成纤维细胞中微小RNA-214-3p表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响
3
作者 丁叶屏 季维雪 +4 位作者 肖兰 江飞云 孙立芳 许曼 徐瑞 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第10期5-12,共8页
目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中微小RNA-214-3p(miR-214-3p)表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法选取64例卵巢癌患者作为研究对象,根据化疗后无进展生存期分为铂部分敏感组和铂敏感组,采用实时荧光定量聚合酶链反... 目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中微小RNA-214-3p(miR-214-3p)表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法选取64例卵巢癌患者作为研究对象,根据化疗后无进展生存期分为铂部分敏感组和铂敏感组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组患者卵巢癌组织中miR-214-3p相对表达量,比较不同临床特征患者的2年生存率;原代培养CAFs及正常卵巢成纤维细胞(NFs),采用qRT-PCR、免疫荧光实验检测CAFs和NFs中miR-214-3p、p62蛋白表达;通过CSIOVDB数据库检索SQSTM1基因在不同种类卵巢细胞中的表达水平;向CAFs瞬时转染miR-214-3p mimic(mimic组)和miR-214-3p mimic NC(NC组),将未转染CAFs设为对照组;留取各组细胞培养上清,建立卵巢癌细胞SKOV3与各组CAFs间接共培养模型,采用CCK-8法、DCFH-DA法、qRT-PCR及免疫印迹法分别检测不同培养条件下SKOV3细胞增殖率、顺铂半数抑制浓度(IC 50)、细胞活性氧(ROS)含量和miR-214-3p、顺铂耐药基因CCND1、自噬蛋白p62相对表达量。结果铂部分敏感组患者的miR-214-3p相对表达量低于铂敏感组,差异有统计学意义(P<0.01);不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、铂部分敏感情况、miR-214-3p低表达情况患者的2年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.01);卵巢CAFs中miR-214-3p相对表达量低于NFs,p62蛋白表达水平高于NFs,差异有统计学意义(P<0.01);CSIOVDB数据库在线分析显示,卵巢癌CAFs中的SQSTM1基因表达水平高于卵巢癌上皮细胞、NFs,差异有统计学意义(P<0.01);相较于与对照组CAFs、NC组CAFs间接共培养的SKOV3细胞,与mimic组CAFs间接共培养的SKOV3细胞的增殖率、顺铂IC 50、ROS含量降低,miR-214-3p相对表达量升高,CCND1mRNA和p62蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CAFs中miR-214-3p表达与卵巢癌细胞对顺铂的敏感性相关,CAFs中miR-214-3p低表达可促进卵巢癌细胞增殖及ROS介导的自噬,进而降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 肿瘤相关成纤维细胞 微小RNA-214-3p 自噬 上皮性卵巢癌 顺铂 耐药
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奥美拉唑抑制miR-214-3p介导自噬提高上皮性卵巢癌细胞对顺铂的敏感性
4
作者 蔡文 季维雪 +3 位作者 肖兰 江飞云 陈文刚 陶云松 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期90-93,109,共5页
目的 探讨奥美拉唑(omeprazole, OME)能否通过抑制自噬提高人卵巢上皮性癌(卵巢癌,EOC)细胞对顺铂的敏感性及其可能机制。方法 原位杂交及免疫组化检测卵巢癌组织中miR-214-3p及自噬标记物p62表达;Pearson相关分析探讨R-214-3p和p62在EO... 目的 探讨奥美拉唑(omeprazole, OME)能否通过抑制自噬提高人卵巢上皮性癌(卵巢癌,EOC)细胞对顺铂的敏感性及其可能机制。方法 原位杂交及免疫组化检测卵巢癌组织中miR-214-3p及自噬标记物p62表达;Pearson相关分析探讨R-214-3p和p62在EOC组织中表达量的相关性;CCK-8法检测各组细胞顺铂半数抑制浓度(IC50);实时定量PCR(qRT-PCR)分析miR-214-3p及多药耐药基因-1(MDR1)表达;蛋白质印迹法检测p62及耐药蛋白p-gp表达。结果 在43例卵巢癌患者的样本中,23例(53.5%)miR-214-3p表达阳性,26例(60.5%)p62表达阳性,miR-214-3p在铂相对耐药EOC中表达低于铂敏感EOC(P<0.05);相反,p62在铂相对耐药EOC中表达明显高于铂敏感EOC(P<0.01)。miR-214-3p和p62在卵巢癌中表达呈负相关(r=-0.387,P=0.005);OME(150μmol/L)预处理后,OV2008及C13K细胞对顺铂IC50均有不同程度降低,尤以顺铂耐药株C13K更为显著(P<0.01)。与空白对照组C13K及OV2008细胞比较,顺铂作用后,C13K及OV2008细胞中miR-214-3p相对表达下降,MDR1基因在mRNA及蛋白水平表达均升高,p62蛋白表达升高(均P<0.01);相反,OME(150μmol/L)预处理可使C13K及OV2008细胞对顺铂敏感性增加,细胞中miR-214-3p相对表达明显升高、MDR1在蛋白及mRNA水平表达降低、p62蛋白表达下降(均P<0.05)。结论 OME预处理可提高卵巢癌细胞对顺铂敏感性,其机制与抑制miR-214-3p介导的自噬有关。 展开更多
关键词 miR-214-3p 自噬 奥美拉唑 卵巢癌 顺铂耐药
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ADH1B基因甲基化对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响 被引量：2
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作者 季维雪 孙磊 +4 位作者 江玉 陈颍 李泽莲 李敏 肖兰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第8期1274-1278,共5页
目的探讨乙醇脱氢酶1B(ADH1B)基因甲基化对卵巢癌(OC)细胞增殖及凋亡的影响。方法生物信息学方法比较ADH1B在卵巢癌与正常卵巢上皮组织中表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌与正常卵巢组织中ADH1B相对表达量,对比两种研究结... 目的探讨乙醇脱氢酶1B(ADH1B)基因甲基化对卵巢癌(OC)细胞增殖及凋亡的影响。方法生物信息学方法比较ADH1B在卵巢癌与正常卵巢上皮组织中表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌与正常卵巢组织中ADH1B相对表达量,对比两种研究结果的一致性。两株卵巢癌细胞OV2008及C13K经不同浓度甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dc)干预48 h,CCK-8法检测5-Aza-dc对两株细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态学改变;甲基化特异性PCR(MSP)、qRT-PCR及Western blot法分别检测药物作用前后两株细胞株中ADH1B甲基化状态、ADH1B在mRNA及蛋白水平表达。结果生物信息学分析及qRT-PCR结果均显示卵巢癌中ADH1B表达量明显均低于正常卵巢组织;中、高浓度5-Aza-dc作用48 h后,两株细胞增殖受到抑制(P<0.01);高浓度5-Aza-dc作用后,两株细胞均出现典型细胞凋亡形态学改变;ADH1B在两株细胞中均呈完全甲基化,高浓度5-Aza-dc处理后,ADH1B甲基化被部分逆转,两株细胞ADH1B mRNA和蛋白表达均增加(P<0.01)。结论5-Aza-dc可下调卵巢癌细胞中ADH1B启动子区甲基化水平,使ADH1B基因重新表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖与促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 乙醇脱氢酶1B 甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 卵巢癌
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