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新生大鼠下丘脑GnRH免疫反应性神经元的体外发育 被引量:3
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作者 宋天保 姚向民 +2 位作者 李明众 周劲松 张芳婷 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期49-53,共5页
应用神经细胞培养、免疫细胞化学、图像分析等技术,研究了新生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元的体外发育规律。培养1d即可见GnRH-IR神经元;1~3d,GnRH-IR神经元生长最快,胞体和突起的平均生长... 应用神经细胞培养、免疫细胞化学、图像分析等技术,研究了新生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元的体外发育规律。培养1d即可见GnRH-IR神经元;1~3d,GnRH-IR神经元生长最快,胞体和突起的平均生长速度分别为45.59μm2/d和19.39μm/d,染色加深;培养7d,GnRH-IR神经元的胞体截面积、胞体染色强度和突起长度均达最高峰,分别为171.21±43.17μm2,0.289±0.034,87.01±22.33μm;培养14d,GnRH-IR神经元的胞体大小和突起长度维持在7d时的水平,但染色减弱。结果提示,培养第1周是GnRH神经元体外发育成熟的关键时期。 展开更多
关键词 促性腺释放激素神经元 下丘脑 体外发育 细胞培养 免疫细胞化学 图像分析 新生大鼠
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促性腺激素释放激素 GnRH 相关肽存在于培养的大鼠垂体前叶促性腺激素细胞 被引量:3
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作者 宋天保 葛玲 +1 位作者 王丽蓉 姚向民 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期294-296,共3页
为了探讨垂体促性腺激素细胞中GnRH相关肽(GAP)的来源,本实验选用两种特异性抗GAP抗体和抗FSH-β抗体,采用免疫细胞化学双重染色技术,研究了GAP在培养的大鼠垂体前叶细胞内的分布和定位。结果发现一些培养细胞可... 为了探讨垂体促性腺激素细胞中GnRH相关肽(GAP)的来源,本实验选用两种特异性抗GAP抗体和抗FSH-β抗体,采用免疫细胞化学双重染色技术,研究了GAP在培养的大鼠垂体前叶细胞内的分布和定位。结果发现一些培养细胞可表达GAP,而且GAP免疫反应产物和FSH免疫反应产物共存于同一种细胞。这表明GAP存在于培养的大鼠垂体前叶促性腺激素细胞内。本文讨论了GAP的来源及其可能的生物学作用。 展开更多
关键词 GnRH相关肽 促性腺激素细胞 细胞培养 垂体
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C型尼曼-匹克病小鼠小脑的胶质反应 被引量:2
3
作者 宋天保 张晓田 +2 位作者 周劲松 王丽蓉 葛玲 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第5期570-573,共4页
探讨C型尼曼 匹克病 (Niemann PickdiseasetypeC ,NPC)小脑胶质细胞的变化及其意义。应用组织蛋白酶D(Cat D)和胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)抗体以及免疫组织化学方法 ,观察生后不同年龄的NPC和正常小鼠小脑内小胶质细胞和星形胶质细胞... 探讨C型尼曼 匹克病 (Niemann PickdiseasetypeC ,NPC)小脑胶质细胞的变化及其意义。应用组织蛋白酶D(Cat D)和胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)抗体以及免疫组织化学方法 ,观察生后不同年龄的NPC和正常小鼠小脑内小胶质细胞和星形胶质细胞的变化。结果显示随着年龄的增长 ,NPC小鼠小脑内Cat D深染的小胶质细胞的数量呈进行性增加 ,细胞逐渐增大 ,尤以皮质分子层为甚。小脑髓质和颗粒层内GFAP阳性星形胶质细胞肿胀 ,数量增多 ;皮质内Bergmann胶质细胞逐渐增多 ,其放射状突起伸至分子层的表面。上述胶质细胞反应在小脑小结和蚓垂比较轻微。结果提示NPC小鼠小脑内小胶质细胞和星形胶质细胞显著激活 。 展开更多
关键词 C型尼曼-匹克病 小鼠 小脑 胶质反应 胶质细胞 组织蛋白酶D
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改革组织学实验课考试,促进学生实际能力培养 被引量:9
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作者 宋天保 周劲松 +2 位作者 葛玲 王丽蓉 武捷 《中国高等医学教育》 2006年第5期1-2,共2页
科学合理的考试是检验教学效果的客观指标之一。通过计算机辅助教学技术建立组织学实验课考试图库和题库,制作多媒体考试课件,将现代教育技术和传统考试方法相结合,改革实验课考试,客观地反映了学生的学习成绩,促进了学生观察和识别能... 科学合理的考试是检验教学效果的客观指标之一。通过计算机辅助教学技术建立组织学实验课考试图库和题库,制作多媒体考试课件,将现代教育技术和传统考试方法相结合,改革实验课考试,客观地反映了学生的学习成绩,促进了学生观察和识别能力的培养。 展开更多
关键词 考试改革 实验课 组织学 能力培养
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新生大鼠下丘脑多巴胺能神经元的体外发育 被引量:1
5
作者 宋天保 姚向民 +3 位作者 周劲松 张芳婷 葛玲 王丽蓉 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期170-173,I006,共5页
为了探讨下丘脑多巴胺(DA)能神经元的体外生长发育特性,取新生大鼠下丘脑神经元进行分散培养。用酪氨酸羟化酶(TH)抗血清和免疫细胞化学ABC法显示DA能神经元,并进行图像分析。结果发现,培养1d时即可见TH-免疫反应... 为了探讨下丘脑多巴胺(DA)能神经元的体外生长发育特性,取新生大鼠下丘脑神经元进行分散培养。用酪氨酸羟化酶(TH)抗血清和免疫细胞化学ABC法显示DA能神经元,并进行图像分析。结果发现,培养1d时即可见TH-免疫反应性(IR)神经元。此后,TH-IR神经元数量增加,迅速生长。至培养7d时,TH-IR神经元的数量、胞体截面积、胞体染色强度和突起长度均达最高峰,且多极神经元所占比例增多,神经元之间建立起多种细胞间接触。培养14d时,TH-IR神经元的胞体大小和突起长度维持在7d时的水平,但数目减少,染色减弱。结果表明,在体外培养条件下,下丘脑DA能神经元的形态和功能在第1周内发育趋于成熟,并可维持到第14d左右。 展开更多
关键词 多巴胺能神经元 下丘脑 体外发育 新生大鼠
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GnRH前体分子中的GnRH相关肽在大鼠垂体和睾丸的分布 被引量:3
6
作者 宋天保 王丽蓉 李乾五 《西安医科大学学报》 CSCD 1989年第4期305-308,共4页
GnRH 相关肽(GAP)是 GnRH 前体蛋白质分子 C-末端56个氨基酸组成的肽。本文应用3种分别抗 GAP N-末端、抗 GAP 中段和抗 GAP C-末端的抗血清,以及免疫组织化学 ABC 法,在大鼠垂体前叶细胞和睾丸间质细胞中染出 GAP 样物质。结果提示 GAP... GnRH 相关肽(GAP)是 GnRH 前体蛋白质分子 C-末端56个氨基酸组成的肽。本文应用3种分别抗 GAP N-末端、抗 GAP 中段和抗 GAP C-末端的抗血清,以及免疫组织化学 ABC 法,在大鼠垂体前叶细胞和睾丸间质细胞中染出 GAP 样物质。结果提示 GAP 或其裂解片段对垂体前叶细胞的激素分泌和睾丸间质细胞的功能具有一定的调节作用. 展开更多
关键词 GnRH相关肽 垂体 睾丸 免疫组织化学 大鼠
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酪氨酸羟化酶在C型尼曼-匹克病小鼠小脑中的异常表达 被引量:2
7
作者 宋天保 王亚利 +1 位作者 梁长林 German D C 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期320-323,T007,共5页
目的 探讨C型尼曼 匹克病 (NPC)小脑中酪氨酸羟化酶 (TH)异常表达的时间、部位及其与临床表现的关系。 方法 应用TH抗体 ,对不同周龄NPC小鼠和正常小鼠的脑组织切片进行免疫组织化学染色 ,部分相邻切片以抗维生素D依赖性钙结合蛋白... 目的 探讨C型尼曼 匹克病 (NPC)小脑中酪氨酸羟化酶 (TH)异常表达的时间、部位及其与临床表现的关系。 方法 应用TH抗体 ,对不同周龄NPC小鼠和正常小鼠的脑组织切片进行免疫组织化学染色 ,部分相邻切片以抗维生素D依赖性钙结合蛋白抗体染色。 结果  1~ 3周NPC小鼠小脑的浦肯野细胞 (PC)未见明显减少 ,TH染色阴性。 5周时PC开始减少 ,8~ 11周期间PC显著丢失 ,但小脑蚓小结和蚓垂有较多的PC存活。 8周后 ,部分存活的PC及其树突树出现TH免疫反应。其轴突局部球形膨大 ,树突不规则 ,弯曲、断裂、局部膨大 ,树突树萎缩。 结论 NPC1基因突变引起小脑PC严重丢失 ,存活的PC有形态改变和异常基因活动 ,提示其功能不正常 。 展开更多
关键词 C型尼曼-匹克病 小脑 浦肯野细胞 酪氨酸羟化酶 免疫组织化学 小鼠
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GnRH 相关肽在啮齿类前脑及下丘脑分布的免疫组织化学研究 被引量:2
8
作者 宋天保 李乾五 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第3期292-296,共5页
人和大鼠的促性腺激素释放激素原(ProGnRH),由 GnRH 和 GnRH 相关肽(GAP)组成。本文应用3种分别抗人和大鼠 GAP N-末端、中段和 C-末端的抗血清和 ABC 免疫酶法,对大鼠、小鼠和豚鼠脑 GAP 神经元进行了观察。3种动物的 GAP 神经元分布相... 人和大鼠的促性腺激素释放激素原(ProGnRH),由 GnRH 和 GnRH 相关肽(GAP)组成。本文应用3种分别抗人和大鼠 GAP N-末端、中段和 C-末端的抗血清和 ABC 免疫酶法,对大鼠、小鼠和豚鼠脑 GAP 神经元进行了观察。3种动物的 GAP 神经元分布相似,GAP 神经元胞体主要存在于隔-视前区,以终板血管器附近的斜角带最为集中。视上核附近亦有较多的 GAP神经元。GAP 纤维广泛存在于前脑和下丘脑,终止于终板血管器和正中隆起。3种 GAP 抗血清中,以抗 N-末端者染出的免疫反应阳性成分多,染色深。GAP 神经元与相邻切片上所染的 GnRH神经元的胞体、纤维和终末的形态和分布相同。本文的观察和其他有关的研究提示,哺乳类具有相同的 ProGnRH,其加工产物 GAP(或其裂解片段)与 GnRH 共同分泌到垂体门脉,调节垂体前叶的激素分泌。 展开更多
关键词 GnRH相关肽 前脑 下丘脑 免疫组化
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微波在免疫组化双重染色的抗体洗脱中的应用 被引量:2
9
作者 宋天保 姚向民 王丽蓉 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1994年第1期57-61,109,共6页
本文介绍一种新技术──微波加强抗体洗脱法。在酸洗脱液中微波辐射(最低能量档)3分钟.完全除去经PAP法染色后的垂体前叶切片上的抗体复合物;双重染色显示两种形态和颜色不同的细胞。切片在Tris缓冲盐液中微波辐射3分钟,... 本文介绍一种新技术──微波加强抗体洗脱法。在酸洗脱液中微波辐射(最低能量档)3分钟.完全除去经PAP法染色后的垂体前叶切片上的抗体复合物;双重染色显示两种形态和颜色不同的细胞。切片在Tris缓冲盐液中微波辐射3分钟,或分别浸入室温和约50℃的酸洗脱液中2小时和3分钟,抗体复合物不能被洗脱,或洗脱不完全;双重染色时出现假性双标记细胞。结果表明微波具有加强抗体洗脱的作用,是一种快速、有效的除去免疫酶双重染色中抗体复合物的方法。 展开更多
关键词 微波 抗体洗脱 免疫酶双重染色
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大鼠脑内GnRH神经元生后发育的免疫组织化学研究 被引量:1
10
作者 宋天保 李乾五 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第S1期71-75,143,共6页
应用ABC免疫组化染色方法和图像分析仪,对生后不同时间大鼠脑内的GnRH神经元的形态学进行了定量研究。所用实验动物的GnRH神经元的分布相似。生后1~7天,GnRH神经元胞体小,突起短,染色淡,多为平滑型。其数目在1天时与成年无显著差别,7... 应用ABC免疫组化染色方法和图像分析仪,对生后不同时间大鼠脑内的GnRH神经元的形态学进行了定量研究。所用实验动物的GnRH神经元的分布相似。生后1~7天,GnRH神经元胞体小,突起短,染色淡,多为平滑型。其数目在1天时与成年无显著差别,7天时则显著减少。生后14天GnRH神经元胞体增大,数目恢复,染色加深,与成年水平相近。正中隆起的GnRH纤维和终末在生后逐渐增多,至14天也达成年水平。结果提示,大鼠GnRH神经元在出生后早期即已决定,生后第二周是GnRH神经元发育的关键时期,而GnRH神经元系统的功能建立则早于其形态成熟。 展开更多
关键词 GNRH 神经元 生后发育 免疫组织化学 图像分析 大鼠
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棉酚对大鼠下丘脑超微结构影响的观察 被引量:1
11
作者 宋天保 李乾五 《解剖学报》 CAS 1986年第3期321-325,350,共6页
本文观察了棉酚对雄性成年大鼠下丘脑弓状核、视上核和室旁核细胞超微结构的影响。棉酚以每日30mg/kg体重给大鼠灌服,连续5周。结果表明服棉酚后,视上核和室旁核变化不明显;而弓状核中,部分细胞呈现一系列神经分泌功能增强的变化,高尔... 本文观察了棉酚对雄性成年大鼠下丘脑弓状核、视上核和室旁核细胞超微结构的影响。棉酚以每日30mg/kg体重给大鼠灌服,连续5周。结果表明服棉酚后,视上核和室旁核变化不明显;而弓状核中,部分细胞呈现一系列神经分泌功能增强的变化,高尔基复合体和粗面内质网轻度扩张,内充均质低电子密度物质;神经分泌颗粒、溶酶体、核仁样体和微管数量增多。本文并对以上超微结构改变的性质、意义和可能原因进行了讨论。 展开更多
关键词 棉酚 下丘脑 弓状核 视上核 室旁核 超微结构
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GnRH相关肽的研究进展 被引量:2
12
作者 宋天保 李乾五 《西安医科大学学报》 CSCD 1992年第4期396-400,共5页
应用重组DNA技术.已发现人和大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)的前体蛋白均由92个氨基酸残基组成。前GnRH原(preproGnRH)的N端为23个氨基酸的信号肽;之后紧接十肽GnRH;再后为Gly-Lys—Arg酶加工剪切部位;
关键词 GNRH GnRH相关肽 综述
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免疫酶双重染色中抗体洗脱的进一步研究 被引量:1
13
作者 宋天保 王丽蓉 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1992年第2期170-174,共5页
本实验进一步检查了三种常用的洗脱方法从切片上除去免疫酶组织化学染色后的抗体的效果。结果表明,PAP法染色后,氧化法的抗体洗脱完全,效果可靠;酸洗法和酸洗/二甲基甲酰胺法的效果视不同抗体而不同,二甲基甲酰胺单用或用于酸洗后似无... 本实验进一步检查了三种常用的洗脱方法从切片上除去免疫酶组织化学染色后的抗体的效果。结果表明,PAP法染色后,氧化法的抗体洗脱完全,效果可靠;酸洗法和酸洗/二甲基甲酰胺法的效果视不同抗体而不同,二甲基甲酰胺单用或用于酸洗后似无效。所用方法均不能从ABC法染色的垂体组织切片上完全除去抗体复合物。因之,将ABC法用于第一抗体来源于同一动物种的双重染色中,来显示第一种抗原时,要特别注意排除假性双标记。 展开更多
关键词 抗体洗脱 垂体 免疫组织化学
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棉酚对大鼠下丘脑视上核、室旁核和弓状核影响的组织学和组织化学观察 被引量:2
14
作者 宋天保 李乾五(指导) 《解剖学报》 CAS 1985年第1期79-84,122,共7页
本文应用组织学和组织化学方法,观察了喂饲棉酚(30mg/kg/d×5周及30 mg/kg/d×5周+60mg/kg/周×5周)的成年雄性大鼠下丘脑视上核、室旁核和弓状核神经元的一般形态结构,以及反映神经分泌功能的形态学指标。结果表明,饲药5... 本文应用组织学和组织化学方法,观察了喂饲棉酚(30mg/kg/d×5周及30 mg/kg/d×5周+60mg/kg/周×5周)的成年雄性大鼠下丘脑视上核、室旁核和弓状核神经元的一般形态结构,以及反映神经分泌功能的形态学指标。结果表明,饲药5及10周,上述三个核团神经分泌细胞的光镜形态学,未见明显变化;根据细胞核体积测量、尼氏体和神经分泌物质含量,硫胺素焦磷酸酶和酸性磷酸酶活性的半定量测定,三核团神经分泌活性无显著改变,仅用药5周时,室旁核尼氏体含量增加。这说明抗生育有效剂量棉酚,对大鼠下丘脑没有明显的直接作用;室旁核分泌活性一度增强,可能是大细胞性神经分泌系统,对棉酚引起机体内环境某些改变的生理性调节反应。 展开更多
关键词 棉酚 下丘脑 组织学 组织化学 大鼠
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GnRH相关肽在大鼠垂体前叶的细胞学定位
15
作者 宋天保 王丽蓉 李乾五 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1992年第1期36-41,137,共7页
本研究应用特异性抗GnRH相关肽(GAP)N端11个氨基酸的抗血清和六种垂体前叶激素的抗血清,通过免疫组织化学双重染色技术观察GAP在大鼠垂体前叶细胞的定位。结果发现,GAP样免疫反应性物质存在于LH细胞和FSH细胞,而未见于GH、PRL、TSH和ACT... 本研究应用特异性抗GnRH相关肽(GAP)N端11个氨基酸的抗血清和六种垂体前叶激素的抗血清,通过免疫组织化学双重染色技术观察GAP在大鼠垂体前叶细胞的定位。结果发现,GAP样免疫反应性物质存在于LH细胞和FSH细胞,而未见于GH、PRL、TSH和ACTH细胞。本文首次证明GAP存在于正常大鼠垂体促性腺激素细胞,为GAP调节LH和FSH的分泌提供了形态学证据;也支持GAP的功能序列在其分子的N端,或GAP进一步裂解出N端片段而发挥作用。 展开更多
关键词 GnRH相关肽 垂体前叶 促性腺激素细胞 免疫组织化学 大鼠
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二甲磺酸乙烷对大鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的影响
16
作者 宋天保 李乾五 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期83-88,共6页
本文应用组织学和免疫组织化学方法,观察了二甲磺酸乙烷单次腹腔注射(75 mg/kg 体重)对大鼠下丘脑、垂体和睾丸的影响。用药后3天,睾丸间质细胞消失,部分垂体 LH 细胞增大或免疫反应性减弱,而下丘脑 GnRH 系统无显著变化。用药后7天,生... 本文应用组织学和免疫组织化学方法,观察了二甲磺酸乙烷单次腹腔注射(75 mg/kg 体重)对大鼠下丘脑、垂体和睾丸的影响。用药后3天,睾丸间质细胞消失,部分垂体 LH 细胞增大或免疫反应性减弱,而下丘脑 GnRH 系统无显著变化。用药后7天,生精上皮明显退变,垂体 LH 细胞染色强度普遍下降,下丘脑中 GnRH 免疫反应性神经元数目、正中隆起 GnRH 纤维和终末的密度及染色强度均明显降低。睾酮替代治疗使睾丸晚期精子细胞增加,垂体和下丘脑上述改变恢复。结果提示:1.二甲磺酸乙烷引起的精子发生障碍继发于间质细胞破坏、睾酮分泌停止;2.下丘脑GnRH 系统和垂体 LH 细胞的相应激素释放增加;3.睾酮负反馈作用解除是下丘脑-垂体轴分泌活性增强的主要因素;4.二甲磺酸乙烷为研究下丘脑-垂体-睾丸轴及睾丸内局部调节,提供了有用的实验手段。 展开更多
关键词 二甲磺酸乙烷 下丘脑 垂体 睾丸
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大鼠和小鼠脑内的GnRH神经元及其纤维通路——免疫组织化学研究
17
作者 宋天保 李乾五 《西安医科大学学报》 CSCD 1990年第2期112-116,共5页
本文应用ABC免疫酶染色技术,观察了大鼠和小鼠脑内GnRH神经元及其纤维的分布。结果发现90%以上的GnRH神经元胞体集中于终板血管器附近的斜角带一视前内侧区,并向头背侧延至内侧隔核,向尾外侧伸到视上核区。内侧基底下丘脑区未见阳性胞体... 本文应用ABC免疫酶染色技术,观察了大鼠和小鼠脑内GnRH神经元及其纤维的分布。结果发现90%以上的GnRH神经元胞体集中于终板血管器附近的斜角带一视前内侧区,并向头背侧延至内侧隔核,向尾外侧伸到视上核区。内侧基底下丘脑区未见阳性胞体。GnRH纤维经室周和外侧束终止于正中隆起:在头端存在于其全层和全宽,向后渐分成两束,集中于正中隆起外侧部。对啮齿类与灵长类GnRH系统的差异及其在生殖中的意义进行了讨论。 展开更多
关键词 下丘脑 GNRH 免疫组织化学
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C型尼曼-匹克病与细胞胆固醇转运
18
作者 宋天保 《解剖科学进展》 CAS 2001年第2期167-171,188,共6页
C型尼曼 -匹克病 (NPC)是一种致命的常染色体隐性遗传性疾病 ,游离胆固醇等脂类沉积于溶酶体内 ,导致神经系统退行性变。本文综述了NPC的细胞生化表型 ,神经表型 ,NPC1基因结构及其突变 ,以及NPC1蛋白的分子结构。
关键词 C型尼曼-匹克病 细胞胆固醇 NPC 常染色本隐性遗传性疾病 神经表型
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Aβ诱导PC-12细胞凋亡建立阿尔茨海默病细胞模型 被引量:20
19
作者 王亚利 宋天保 +1 位作者 路明 许琨 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期128-132,共5页
目的 用β 淀粉样蛋白 (Aβ2 5- 35)诱导PC 1 2细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型。方法 体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC 1 2细胞 ,以不同浓度Aβ2 5 - 35诱导并于不同时间收获细胞 ,应用MTT法观察细胞活力 ,Fura 2 /AM荧光分析法检测细... 目的 用β 淀粉样蛋白 (Aβ2 5- 35)诱导PC 1 2细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型。方法 体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC 1 2细胞 ,以不同浓度Aβ2 5 - 35诱导并于不同时间收获细胞 ,应用MTT法观察细胞活力 ,Fura 2 /AM荧光分析法检测细胞内游离Ca2 +浓度 ,Hoechst332 5 8及碘化丙啶复染分析细胞凋亡。结果 Aβ2 5- 35作用于PC 1 2细胞后 ,细胞活力逐渐下降 ,并呈时间和剂量依赖性 ;同时细胞内Ca2 +浓度显著上升 ;不同浓度Aβ2 5 - 35作用后 ,PC 1 2细胞于不同时间出现凋亡的典型形态学特征 ,该时间比Ca2 +浓度上升约晚 6~ 1 2h。结论 Aβ2 5- 35诱导后PC 1 2细胞活力下降、细胞内Ca2 +浓度上升及细胞凋亡 。 展开更多
关键词 细胞凋亡 Β-淀粉样蛋白 PC-12细胞 阿尔茨海默病 细胞培养 动物模型
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人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-PCR定量检测 被引量:7
20
作者 郭颖 刘军 +2 位作者 薛采芳 吴静 宋天保 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期618-620,共3页
目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA。同时定... 目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA。同时定量测定人 β 肌动蛋白 (hBA)的mRNA作为内对照。用梯度稀释的克隆的人 β 肌动蛋白基因制作标准曲线。结果 :标准曲线的相关系数为 1.0 0。实时荧光反转录PCR方法的平均变异系数为 7.1%。HepG2细胞hTERTmRNA与hBAmRNA的比值为 (1.3± 0 .3)× 10 -4。结论 :建立了可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。 展开更多
关键词 RNA 端粒酶催化亚单位 实时荧光PCR 反转录PCR HepG2细胞 定量测定 Β-肌动蛋白 BA 稀释 特异引物
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