目的:研究2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因5′-调控区CAG富含区的一种变异对基因表达活性的影响及其机制。方法:构建荧光素酶(luciferase,luc)报告基因重组体: pGL2.P-T3和pGL2.P-T5,T3和T5分别为野生型和缺失型等位基因。重...目的:研究2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因5′-调控区CAG富含区的一种变异对基因表达活性的影响及其机制。方法:构建荧光素酶(luciferase,luc)报告基因重组体: pGL2.P-T3和pGL2.P-T5,T3和T5分别为野生型和缺失型等位基因。重组体与pSV-β-Galactosidase Control Vector共转染Hela细胞,通过luc活性分析检测基因的转录活性;采用凝胶滞留和DNA足纹技术,确定DNA调节序列和Hela细胞核蛋白的相互作用。结果:T5的相对活性低于T3[(9.98±1.40)%和(7.76±1.05)%,P<0.05];凝胶滞留实验表明与核蛋白作用后,T3和T5在凝胶上形成一条迁移率相同的滞留区带;T5有2个反式作用因子结合位点,CGCGCCCGCGGGCGGCGGC和GGGCGGCTGGTGGCGGCTG,与T3相同。结论:尽管T5的变异未改变Hela细胞核蛋白提取物的DNA结合位点,但是它引起的转录活性的下降可能是携带者2型糖尿病发生发展的重要因素。展开更多
基金This project was supported by National Natural Science Foundation of China (39470340)
文摘目的:研究2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因5′-调控区CAG富含区的一种变异对基因表达活性的影响及其机制。方法:构建荧光素酶(luciferase,luc)报告基因重组体: pGL2.P-T3和pGL2.P-T5,T3和T5分别为野生型和缺失型等位基因。重组体与pSV-β-Galactosidase Control Vector共转染Hela细胞,通过luc活性分析检测基因的转录活性;采用凝胶滞留和DNA足纹技术,确定DNA调节序列和Hela细胞核蛋白的相互作用。结果:T5的相对活性低于T3[(9.98±1.40)%和(7.76±1.05)%,P<0.05];凝胶滞留实验表明与核蛋白作用后,T3和T5在凝胶上形成一条迁移率相同的滞留区带;T5有2个反式作用因子结合位点,CGCGCCCGCGGGCGGCGGC和GGGCGGCTGGTGGCGGCTG,与T3相同。结论:尽管T5的变异未改变Hela细胞核蛋白提取物的DNA结合位点,但是它引起的转录活性的下降可能是携带者2型糖尿病发生发展的重要因素。
