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复合式蝎形引物实时定量检测端粒酶延伸产物 被引量:7
1
作者 黄艳萍 孔德明 +2 位作者 张晓滨 沈含熙 宓怀风 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期274-278,共5页
针对端粒酶延伸产物中靶基因序列的特殊性 ,开发了一种可产生荧光的复合式蝎形引物 ,该引物的 5′端带有可特异性检测靶基因的探针序列 ,PCR阻断剂将其与引物序列连接 .当复合式蝎形引物延伸 ,探针序列与同一分子内的靶基因杂交 ,荧光... 针对端粒酶延伸产物中靶基因序列的特殊性 ,开发了一种可产生荧光的复合式蝎形引物 ,该引物的 5′端带有可特异性检测靶基因的探针序列 ,PCR阻断剂将其与引物序列连接 .当复合式蝎形引物延伸 ,探针序列与同一分子内的靶基因杂交 ,荧光信号产生 .运用该技术 ,建立了定量检测端粒酶延伸产物的实时荧光PCR方法 .该法可在快速PCR循环条件下 ,对 0 .15~ 1.5 0× 10 3 amol/ μL范围内的样品进行定量检测 ,线性相关系数R2 =0 .9992 .该法操作简便 。 展开更多
关键词 复合式蝎形引物 实时检测 定量检测 端粒酶 延伸产物 荧光定量PCR技术 恶性肿瘤 诊断
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TaqMan-分子灯标:一种新型的荧光基因检测探针 被引量:12
2
作者 孔德明 古珑 +1 位作者 沈含熙 宓怀风 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期755-759,共5页
在TaqMan及分子灯标的基础上开发了一类新型的均相荧光检测探针———TaqMan 分子灯标 (TaqMan MB) ,该探针集合了分子灯标的发夹结构及TaqMan探针降解作用的工作原理 ,使检测效果更好 .与实时PCR仪联用 ,可用于靶基因的定量检测 .
关键词 TaqMan-分子灯标 荧光基因检测探针 均相荧光检测探针 聚合酶链式反应
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尿毒症患者血清中中分子物质的提取及性质的初步表征 被引量:8
3
作者 袁直 张霁 +2 位作者 赵芬芝 宓怀风 何炳林 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1989年第4期401-405,共5页
从尿毒症患者血清及腹透液中得到的中分子量物质,具有相同的凝胶色谱行为及紫外、红外吸收行为,它们在206和235nm处,有特征紫外吸收峰;在波数为3246,1516,1122和613cm^(-1)处,有特征红外吸收峰。中分子物经离子交换色谱进一步分离,发现... 从尿毒症患者血清及腹透液中得到的中分子量物质,具有相同的凝胶色谱行为及紫外、红外吸收行为,它们在206和235nm处,有特征紫外吸收峰;在波数为3246,1516,1122和613cm^(-1)处,有特征红外吸收峰。中分子物经离子交换色谱进一步分离,发现起决定紫外及红外吸收行为的成分集中于第3子峰;其自由氨基酸和肽类物质含量均低于3%。 展开更多
关键词 尿毒症 中分子量物质 凝胶色谱
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亲环素的研究进展 被引量:11
4
作者 郭敏杰 张晓滨 宓怀风 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期321-325,327,共6页
亲环素Cyclophilins(CyPs)是十分广谱的与免疫抑制剂药物环孢菌素A(CsA)结合的细胞内蛋白质家族 ,它们存在于从细菌到哺乳动物的几乎所有生命体中 ,并存在于细胞液和各个细胞器中。CyPs与CsA结合 ,阻断T细胞信号传递而实现免疫抑制。CyP... 亲环素Cyclophilins(CyPs)是十分广谱的与免疫抑制剂药物环孢菌素A(CsA)结合的细胞内蛋白质家族 ,它们存在于从细菌到哺乳动物的几乎所有生命体中 ,并存在于细胞液和各个细胞器中。CyPs与CsA结合 ,阻断T细胞信号传递而实现免疫抑制。CyPs具有肽脯氨酰顺反异构酶活性 ,催化蛋白质折叠过程 ,尤其是富含脯氨酸的蛋白质折叠 ,并且起着分子伴侣的作用 ,同时参与相关的生物学过程如细胞繁殖和细胞间信号传导。本文综述了人亲环素 (hCyPs)家族成员和CyPs生物学功能的最新研究进展 。 展开更多
关键词 亲环素 细胞内功能 细胞外功能
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分子信标用于不对称PCR检测乙型肝炎病毒 被引量:4
5
作者 孔德明 蒋海燕 +1 位作者 沈含熙 宓怀风 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期7-10,共4页
为了缓解竞争杂交对分子信标检测的影响, 将分子信标与不对称聚合酶链式反应(PCR)联用进行血清中乙型肝炎病毒(HBV)的检测。并采用更为直接的荧光方法, 将不对称PCR扩增中的引物浓度比确定为5∶1, 该结果与电泳方法得到的结果有所不同... 为了缓解竞争杂交对分子信标检测的影响, 将分子信标与不对称聚合酶链式反应(PCR)联用进行血清中乙型肝炎病毒(HBV)的检测。并采用更为直接的荧光方法, 将不对称PCR扩增中的引物浓度比确定为5∶1, 该结果与电泳方法得到的结果有所不同。文中结合对称及不对称PCR过程中荧光强度的变化情况, 对其原因进行了详细的探讨。分子信标与不对称PCR联用, 可以专一地检测出血清中HBV的存在, 与分子信标/对称PCR相比, 其检测效果明显增强。 展开更多
关键词 分子信标 不对称PCR 乙型肝炎病毒(HBV)
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亲免素结合类免疫抑制剂作用的分子机理 被引量:1
6
作者 张万起 元云峰 宓怀风 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期155-160,共6页
随着环孢素、FK5 0 6及雷帕霉素等生物制剂类免疫抑制剂在器官移植时的免疫抑制及治疗自身免疫性疾病的成功应用 ,对其生物作用机理有了一定认识。发现了生物体内存在其天然配基亲免素 ,并通过形成药物 亲免素复合物发挥免疫抑制作用 ... 随着环孢素、FK5 0 6及雷帕霉素等生物制剂类免疫抑制剂在器官移植时的免疫抑制及治疗自身免疫性疾病的成功应用 ,对其生物作用机理有了一定认识。发现了生物体内存在其天然配基亲免素 ,并通过形成药物 亲免素复合物发挥免疫抑制作用 ,故又称为亲免素结合类免疫抑制剂。近年来研究证实 ,药物 亲免素复合物分别作用于细胞信号传递体系中的钙调磷酸酶与雷帕霉素靶蛋白 ,从而影响免疫细胞的蛋白质生物合成 ,细胞的增殖和生存 ,达到免疫抑制的作用。 展开更多
关键词 亲免素 免疫抑制剂 钙调磷酸酶 雷帕霉素 环孢菌素
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增塑剂对可吸收缝合线后处理工艺条件和降解性能的影响
7
作者 郭敏杰 宓怀风 刘振 《高分子学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期829-833,共5页
分别在对二氧环己酮均聚物和对二氧环己酮-乙交酯共聚物中加入增塑剂进行纺丝,制得聚对二氧环己酮单丝缝合线(PDS)和对二氧环己酮-乙交酯共聚物单丝缝合线(PDG).用DSC方法研究了增塑剂含量对PDS缝合线热性能的影响和不同热定型条件的PD... 分别在对二氧环己酮均聚物和对二氧环己酮-乙交酯共聚物中加入增塑剂进行纺丝,制得聚对二氧环己酮单丝缝合线(PDS)和对二氧环己酮-乙交酯共聚物单丝缝合线(PDG).用DSC方法研究了增塑剂含量对PDS缝合线热性能的影响和不同热定型条件的PDG缝合线的热性能,测试了热定型温度对PDG缝合线初始强度、模量及柔量的影响,考察了增塑剂含量对两种缝合线的生物降解性能和力学降解性能影响.研究结果表明,PDS缝合线的玻璃化转变温度Tg、结晶温度Tc以及熔融温度Tm均随着增塑剂含量的增加而降低,但其结晶能力增加.随着热定型温度的增加,PDG缝合线的初始打结强度、熔融热均提高,熔融温度Tm基本保持不变.两种缝合线的强度保留率随着增塑剂含量的增加均先增加后减小,而重量保留率随着增塑剂含量增加始终减小. 展开更多
关键词 对二氧环己酮 乙交酯 缝合线 增塑剂 降解性能
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用凝胶电泳研究发夹型引物检测端粒酶活性
8
作者 黄艳萍 孔德明 +2 位作者 柴鼎赓 沈含熙 宓怀风 《现代仪器》 CAS 2004年第4期41-43,共3页
端粒酶是目前最广谱的恶性肿瘤的预警标志物 ,其活性对大多数恶性肿瘤的诊断均具有较高的敏感性和特异性。本文针对端粒酶延伸产物序列的特殊性 ,开发一类新型发夹型引物。该引物具有的发夹结构使得PCR扩增只能在加热条件下启动。运用... 端粒酶是目前最广谱的恶性肿瘤的预警标志物 ,其活性对大多数恶性肿瘤的诊断均具有较高的敏感性和特异性。本文针对端粒酶延伸产物序列的特殊性 ,开发一类新型发夹型引物。该引物具有的发夹结构使得PCR扩增只能在加热条件下启动。运用这项技术 ,建立用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性的新方法。减少非特异性扩增产物及引物二聚体的生成 ,提高检测的专一性。将该法用于恶性肿瘤细胞提取物中端粒酶活性的检测 ,取得满意的结果。 展开更多
关键词 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 发夹型引物 端粒酶 聚合酶链式反应 基因检测 恶性肿瘤
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猪亲环素18的基因克隆与融合蛋白的表达
9
作者 马慧 陈琛 +1 位作者 王影 宓怀风 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期103-107,共5页
亲环素18(CyP18)具有肽脯氨酰顺/反异构酶活性,广泛存在于不同物种中,是一种高度保守的蛋白质.它能和免疫抑制性药物环孢菌素 A 结合,参与免疫抑制;此外,作为分子伴侣,它还加速蛋白质的折叠、组装和分解.从猪肝中提取总 RNA,首次通过 RT... 亲环素18(CyP18)具有肽脯氨酰顺/反异构酶活性,广泛存在于不同物种中,是一种高度保守的蛋白质.它能和免疫抑制性药物环孢菌素 A 结合,参与免疫抑制;此外,作为分子伴侣,它还加速蛋白质的折叠、组装和分解.从猪肝中提取总 RNA,首次通过 RT-PCR 扩增出 pCyP18,对其基因进行克隆和序列测定,并转入大肠杆菌中进行高效表达,得到纯化的 pCyP18蛋白. 展开更多
关键词 亲环素18 环孢菌素A RNA RT—PCR 大肠杆菌
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正常人和SLE患者血清中抗DNA抗体的研究
10
作者 王遒宾 陈国敏 +2 位作者 刘文丽 宓怀风 何炳林 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1989年第2期176-181,共6页
用亲和层析法对6例正常人和4例SLE患者血清中抗DNA抗体进行提取和定量研究,发现正常人血清中抗DNA抗体的组成IgM/IgG大于1,是以IgM为主的抗体,SLE患者血清中抗DNA抗体含量高,IgM/IgG小于1,是以IgG为主的抗体。用胰蛋白酶降解提取的抗DN... 用亲和层析法对6例正常人和4例SLE患者血清中抗DNA抗体进行提取和定量研究,发现正常人血清中抗DNA抗体的组成IgM/IgG大于1,是以IgM为主的抗体,SLE患者血清中抗DNA抗体含量高,IgM/IgG小于1,是以IgG为主的抗体。用胰蛋白酶降解提取的抗DNA抗体再借助于SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳对正常人和SLE患者抗DNA抗体的结构进行初步探讨,电泳结果表明正常人和SLE患者纯化抗DNA抗体经胰蛋白酶降解以后,正常人在52.2Kd区有一特异性降解片段,而SLE患者则在33.6Kd区有明显的降解片段富集,且表明它们是抗DNA—IgG所产生的。这说明SLE患者血清中抗DNA—IgG不仅在数量上比正常人有所增加,而且在结构上也有所不同。此外,这两种不同的抗DNA—IgG被胰蛋白酶降解的速度也有差异。 展开更多
关键词 正常人 SLE 抗DNA抗体
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尿毒症患者血清及正常人尿液内中分子物质的分离分析 被引量:10
11
作者 储结根 袁直 +2 位作者 腾欣莲 宓怀风 何炳林 《中国科学(B辑)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期250-255,共6页
采用凝胶色谱法,以206nm处的紫外吸收为检测手段,分别从尿毒症患者血 清及正常人尿液内分离出A,B两个中分子峰,而从正常人血清中分离出来的A峰远低 于尿毒症患者血清的A峰;在B峰的位置正常人血清未出现明显的吸收.运用... 采用凝胶色谱法,以206nm处的紫外吸收为检测手段,分别从尿毒症患者血 清及正常人尿液内分离出A,B两个中分子峰,而从正常人血清中分离出来的A峰远低 于尿毒症患者血清的A峰;在B峰的位置正常人血清未出现明显的吸收.运用该方法 不仅提高了凝胶色谱的分离效果,且能方便地得到中分子级分的纯品.对清除了淋洗 液组分的中分子级分进行紫外和红外扫描,结果发现来源于尿毒症患者血清及正常人 尿液的A峰物质具有相同的紫外吸收且红外吸收光谱极其相似,而不同来源的B峰物 质虽然紫外吸收相同,但它们的红外吸收却存在一定的差异.采用离子交换色谱法对B 峰物质进行进一步的分离,以230nm处的紫外吸收为检测手段,正常人尿液的B峰物 质被分离成17个亚峰,尿毒症血清的B峰物质被分离成13个亚峰.其中绝大部分亚峰 的出峰位置(洗脱体积)相同. 展开更多
关键词 尿毒症 中分子物质 正常人 尿液 血清 分离
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利用辅助识别聚合物链制备牛血清白蛋白分子印迹聚合物 被引量:1
12
作者 郭敏杰 高婷 +3 位作者 樊志 么敬霞 夏建军 宓怀风 《中国科学:化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期282-290,共9页
论文提出了一种新的蛋白质分子印迹方法,即以聚乙烯醇接枝聚合物作为辅助识别聚合物链(ARPCs),以丙烯酰胺为单体,在丙烯酸酯树脂载体表面进行聚合,制备牛血清白蛋白分子印迹树脂.实验使用2.00mol·L-1氯化钾(KC1)溶液除去模板蛋白质... 论文提出了一种新的蛋白质分子印迹方法,即以聚乙烯醇接枝聚合物作为辅助识别聚合物链(ARPCs),以丙烯酰胺为单体,在丙烯酸酯树脂载体表面进行聚合,制备牛血清白蛋白分子印迹树脂.实验使用2.00mol·L-1氯化钾(KC1)溶液除去模板蛋白质,使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测吸附蛋白质,并设计使用0.150,0.500和2.00mol·L-1KC1溶液分别对吸附蛋白质进行梯度洗提.电泳实验结果表明,2.00mol·L-1KC1溶液洗脱的蛋白质是大孔树脂的吸附效应;0.500mol·L-1KC1溶液洗脱掉的是印迹蛋白质.引入ARPCs制得的分子印迹树脂,用于混合蛋白质体系吸附时,对模板蛋白质的吸附量为80~100μg·g-1,其特异性吸附能力较未引入ARPCs之前有明显提高. 展开更多
关键词 聚乙烯醇 辅助识别聚合物链 分子印迹 蛋白质
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人T细胞中核酸结合亲环素(hCyP33)与poly(A)^+RNA(mRNA)特异性结合 被引量:1
13
作者 张万起 元云峰 +3 位作者 王亦农 袁直 宓怀风 何炳林 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 2002年第2期134-139,共6页
人亲环素33(human cyclophilin 33,hCyP 33)是1996年发现的一个蛋白质.它由1个N-端的RNA结合团块、1个C-端的亲环素团块和两者之间的连接部分组成.RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP)是参与真核生物RNA转录后剪接(splicing)、... 人亲环素33(human cyclophilin 33,hCyP 33)是1996年发现的一个蛋白质.它由1个N-端的RNA结合团块、1个C-端的亲环素团块和两者之间的连接部分组成.RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP)是参与真核生物RNA转录后剪接(splicing)、修饰(modification)和输送(transport)等功能的一类蛋白质.亲环素具有肽脯氨酸顺反异构酶活性,在蛋白质折叠、输送和相互作用过程中起着关键作用.器官移植时使用的免疫抑制剂环胞菌素A(cyclosporin A,CsA)能与亲环素类蛋白质结合,并抑制它们的酶活性.但是同时具有这两种不同功能的亲环素33在细胞生理过程中到底起了什么作用,至今尚不清楚.用离子交换色谱法和亲和吸附的方法研究了人亲环素33与各种细胞RNA的结合特异性,证实了人亲环素33只同具有poly(A)尾序列结构的mRNA,即poly(A)+RNA发生特异性结合. 展开更多
关键词 人T细胞 核酸 人亲环素33 离子交换色谱 RNA结合特异性 蛋白质
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基于克隆表达的芳香烃受体系统的二噁[口英]生物检测方法研究
14
作者 王卓 赵娜 +5 位作者 沈钧 王影 汤乃军 吴蕴棠 张万起 宓怀风 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期705-709,共5页
目的研究人工克隆表达的芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)与天然芳香烃受体(AhR)特异性结合及其对制备的多克隆抗体识别的情况,通过两者结合与二噁[口英](TCDD)的剂量反应关系,探索TCDD生物检测方法。方法(1)以小鼠肝组织总RNA为... 目的研究人工克隆表达的芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)与天然芳香烃受体(AhR)特异性结合及其对制备的多克隆抗体识别的情况,通过两者结合与二噁[口英](TCDD)的剂量反应关系,探索TCDD生物检测方法。方法(1)以小鼠肝组织总RNA为模板,通过RT—PCR扩增目的基因AhR—PAS[periodicity (Per)/Aryl hydrocarbon nuclear translocator(ARNT)/single—minded(Sim)]端、AhR羧基末端(AhR—C端)、ARNT—PAS端,构建含有目的基因的pGEX-5XI重组表达质粒,并采用大肠杆菌原核系统进行克隆表达。(2)用上述克隆表达的AhR片段蛋白(AhR—PAS、AhR—C)作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体。(3)从C57BL/6J纯系小鼠肝组织中提取具有结合活性的天然AhR复合物,将天然AhR复合物与结合在谷胱甘肽硫转移酶(GST)上面的融合蛋白GST—ARNT—PAS,分别在0.25、0.50、1.00、2.00pmol TCDD存在的条件下进行结合,通过亲和吸附和免疫印迹观察所形成的蛋白复合物的量。结果(1)成功构建含有目的基因AhR—PAS、AhR—C和ARNT—PAS的重组质粒,并通过大肠杆菌原核系统表达出具有结合活性的目的蛋白;(2)免疫家兔制得的多克隆抗体AhR—PAS、AhR-C的检测下限分别为5、1ng;(3)测得该法制备的小鼠肝脏匀浆中总蛋白质的浓度为60.5mg/ml;在TCDD存在的条件下,克隆得到的融合蛋白GST—ARNT—PAS能够与天然AhR复合物特异性地结合,并测得检测下限为0.25pmol,约80pg TCDD。结论成功地建立了基于克隆表达的芳香烃受体系统的TCDD生物检测方法,且检测下限达到pg级别。 展开更多
关键词 受体 芳香烃 芳香烃受体核转位子 克隆 分子 抗体 四氯二苯并二噁[口英]
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内质网体中FKBP23与BiP特异性结合
15
作者 张万起 李慧 +4 位作者 张晓滨 沈晔 王亦农 宓怀风 何炳林 《中国科学(B辑)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期459-466,共8页
FKBP23是1998年在小鼠的内质网体(endoplasmic reticulum,ER)中发现的一个FKBP家族的蛋白质。它由一个N端的肽脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis/transisomerase,PPIase)结构域和一个C端的含有钙离子结合功能的结构域组成。文中在... FKBP23是1998年在小鼠的内质网体(endoplasmic reticulum,ER)中发现的一个FKBP家族的蛋白质。它由一个N端的肽脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis/transisomerase,PPIase)结构域和一个C端的含有钙离子结合功能的结构域组成。文中在大肠杆菌中克隆表达并纯化了小鼠FKBP23与谷胱甘肽转硫酶(glutathione S-transferase,GST)的融合蛋白GST-FKBP23及内质肉体中热激蛋白70(heat shock protein 70,Hsp 70)的成员BiP(immunoglobulin binding protein)的融合蛋白GST-BiP,并用Factor Xa因子酶切制备游离的FKBP23及BiP。将结合在还原型谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶上的两种融合蛋白分别交叉地亲和吸附克隆制备的两种游离蛋白,经免疫印迹证实FKBP23与BiP特异性结合。进而再用克隆的FKBP23与内质肉体蛋白提取液进行上述实验,进一步证实了FKBP23可与内质肉体中天然的BiP结合。这是首次发现哺乳动物内质肉体中肽脯氨酰顺反异构酶的家族成员与分子伴侣(molecular chaperone)的主要成员热激蛋白70具有相互结合的作用。 展开更多
关键词 内质网体 FKBP23 BIP 特异性结合 蛋白质 肽脯氨酰顺反异构酶 融合蛋白
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Human cyclophilin 33 (hCyP33) in T-cell binds specifically to poly(A)^+RNA (mRNA) 被引量:1
16
作者 张万起 袁直 +3 位作者 宓怀风 元云峰 何炳林 王亦农 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2002年第3期275-281,共7页
Human cyclophilin 33 (hCyP33), found in 1996, consists of an RNA-binding domain in N-terminus, a cyclophilin domain in C-terminus and a connected part between the two domains. RNA-binding proteins concern functions, s... Human cyclophilin 33 (hCyP33), found in 1996, consists of an RNA-binding domain in N-terminus, a cyclophilin domain in C-terminus and a connected part between the two domains. RNA-binding proteins concern functions, such as splicing, modification and transport, after transcription in eukaryotic cells. Cyclophilins (CyPs) possess enzymatic activity, namely peptidyl-proryl cis-trans isomerase (PPIase). They are involved in folding, transport and interaction of proteins. Cyclosporin A (CsA), an immunosuppressant used by organ transplantation, binds to CyPs and suppresses their enzymatic activity. However, up to now it is unknown that which cellular and physiological roles hCyP33, which possesses the above-mentioned both functions, plays. In this paper the binding specificity of hCyP33 to different cellular RNA is investigated by means of ion-exchange chromatography and affinity adsorption. The results show that it binds specifically to poly(A) tailed mRNA, namely poly(A)+RNA. 展开更多
关键词 HUMAN CYCLOPHILIN 33 (hCyP33) ion-exchange chromatography RNA-BINDING specificity.
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Detection of Hepatitis B Virus DNA by Duplex Scorpion Primer-based PCR Assay 被引量:1
17
作者 孔德明 沈含熙 宓怀风 《Chinese Journal of Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2004年第9期903-907,共5页
The application of a new fluorogenic probe-based PCR assay (PCR duplex scorpion primer assay) to the detection of Hepatitis B virus (HBV) DNA in human sera was described. Duplex scorpion primer is a modified variant o... The application of a new fluorogenic probe-based PCR assay (PCR duplex scorpion primer assay) to the detection of Hepatitis B virus (HBV) DNA in human sera was described. Duplex scorpion primer is a modified variant of duplex Amplifluor, and the incorporation of a PCR stopper between probe and primer sequences improve the detection specificity and sensitivity. Combined with PCR amplification, this probe can give unambiguous positive results for the reactions initiated with more than 20 HBV molecules. In addition, the particular unimolecular probing mechanism of this probe makes the use of short target-specific probe sequence possible, which will render this probe applicable in some specific systems. 展开更多
关键词 duplex scorpion primer hepatitis B virus (HBV) DNA fluorogenic probe
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用辅助识别聚合物链制备蛋白质印迹聚合物分离/富集大分子量天然微量蛋白质
18
作者 夏建军 龙毅 +2 位作者 郭敏杰 王影 宓怀风 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 2009年第9期987-987,共1页
在本工作中我们介绍了一种基于分子印迹技术分离/富集大分子量天然微量蛋白的新方法.以细菌克隆的免疫球蛋白结合蛋白(BiP)为模板蛋白,选择性地与辅助识别聚合物链(ARPCs)库中的ARPCs进行自组装.ARPCs库含有大量的带有随机分布... 在本工作中我们介绍了一种基于分子印迹技术分离/富集大分子量天然微量蛋白的新方法.以细菌克隆的免疫球蛋白结合蛋白(BiP)为模板蛋白,选择性地与辅助识别聚合物链(ARPCs)库中的ARPCs进行自组装.ARPCs库含有大量的带有随机分布识别位点和锚定位点的限长聚合物链.蛋白质和ARPCs的自组装体被大孔微球吸附后通过交联聚合固定在微球上.除去模板后,合成的印迹聚合物用以从内质网体提取物中富集天然的BiP,BiP的含量可以提高45倍.这是大分子量的天然微量蛋白(分子量达78kD)首次通过分子印迹法富集. 展开更多
关键词 分子印迹技术 辅助识别聚合物链 细菌克隆蛋白质 大分子量蛋白质
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