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8-Br-cAMP和^(60)Co照射诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相关基因表达的研究 被引量：1
1
作者 宫璀璀 吴景兰 王红梅 《解放军医学高等专科学校学报》 1999年第3期1-3,共3页
应用８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射体外诱导 Ｈｅｌａ 细胞凋亡。探讨ｂｘ Ｌ２ ，ｗ ｐ５３ ，ｍ ｐ５３ ，ｃｍ ｙｃｉ Ｎｏｓ 的基因表达和ｉ Ｎｏｓ ， Ｆａｓ 蛋白表达之间的关系，为探讨无毒性８ Ｂｒｃ Ａ ... 应用８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射体外诱导 Ｈｅｌａ 细胞凋亡。探讨ｂｘ Ｌ２ ，ｗ ｐ５３ ，ｍ ｐ５３ ，ｃｍ ｙｃｉ Ｎｏｓ 的基因表达和ｉ Ｎｏｓ ， Ｆａｓ 蛋白表达之间的关系，为探讨无毒性８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 对宫颈癌治疗的新途径提供依据。采用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法和 Ｆｅｕｌｇｅｎ 法进行细胞凋亡实验；采用本实验室创新的完整细胞原位 Ｒ Ｎ Ａ 斑点印迹技术检测 Ｆａｓ 和ｉ Ｎｏｓ蛋白，应用高速薄层色谱扫描仪对斑点印迹信号进行定量测定。结果８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射均可上调 Ｈｅｌａ ｗｐ５３ ，ｉ Ｎｏｓ 的基因表达；下调ｍ ｐ５３ ，ｂｃｌ２ ，ｃｍｙｃ 的基因表达。可增强ｉ Ｎｏｓ 蛋白质的酶活性，降低 Ｆａｓ 蛋白质的免疫反应性。显示出８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 可能代替放疗作为一种治疗宫颈癌的新途径。 展开更多
关键词 细胞凋亡 原位杂交 斑点印迹 宫颈癌
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8-Br-cAMP诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的实验研究
2
作者 宫璀璀 吴景兰 +2 位作者 邓新国 王红梅 赖泽仁 《中国肿瘤临床与康复》 2001年第5期18-20,共3页
目的　探讨以 8 Br cAMP体外诱导Hela细胞凋亡中 ,相关基因及蛋白质表达与凋亡之间的关系 ,为使用无毒性 8 Br cAMP治疗宫颈癌提供依据。方法　采用TUNEL法检测凋亡细胞 ,采用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术检测凋亡相关基因及蛋... 目的　探讨以 8 Br cAMP体外诱导Hela细胞凋亡中 ,相关基因及蛋白质表达与凋亡之间的关系 ,为使用无毒性 8 Br cAMP治疗宫颈癌提供依据。方法　采用TUNEL法检测凋亡细胞 ,采用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术检测凋亡相关基因及蛋白质的表达。结果　 8 Br cAMP试验组细胞凋亡率为 ( 40 .0± 1.32 ) % ,对照组 ( 5 .2± 0 .74) % ;8 Br cAMP可上调wp5 3,iNOS基因表达 ,下调mp5 3,bcl 2 ,c myc基因表达 ,可增强iNOS和FasL的酶活性 ,降低Fas免疫反应性。以上各结果 ,试验组与对照组相比P <0 .0 1。结论　 8 Br cAMP能诱导Hela细胞凋亡 ,可作为一种治疗宫颈癌的新途径。 展开更多
关键词 凋亡 原位杂交 斑点印迹 HELA细胞 8-BR-CAMP 宫颈癌
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金银花对大鼠体内和体外RBL细胞的抗氧化保护作用及其机制 被引量：11
3
作者 宫璀璀 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 赖泽仁 何培霞 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1074-1078,共5页
目的:从细胞和分子水平探讨金银花(HS)对机体内外的抗氧化作用及其机制,为金银花的临床应用提供理论依据。方法:体外培养的人肝RBL细胞与0.25g·L-1的金银花共培养前或后加H2O2(氧化剂),应用MTT和TUNEL实验检测细胞生存率和凋亡率,... 目的:从细胞和分子水平探讨金银花(HS)对机体内外的抗氧化作用及其机制,为金银花的临床应用提供理论依据。方法:体外培养的人肝RBL细胞与0.25g·L-1的金银花共培养前或后加H2O2(氧化剂),应用MTT和TUNEL实验检测细胞生存率和凋亡率,免疫组织化学/免疫印迹检测NF-κB、HSP-70、Bcl-2、Bax及Caspase-3表达水平,检测细胞内抗氧化酶体系的水平。建立金银花大、小剂量灌胃的大鼠动物模型,检测血浆抗氧化酶体系的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱苷肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平。结果:金银花对RBL细胞的抗氧化和抗凋亡作用中,前保护(先加金银花,后加H2O2)高于后保护(先加H2O2,后加金银花)的效应;下调NF-κB和HSP-70的表达和Bcl-2/Bax比值,且前保护组凋亡率低于后保护组;同时也上调细胞内抗氧化酶体系的水平。金银花灌胃1～2h后,大鼠血浆中T-AOC、GSH-Px、GSH、SOD含量较灌胃前显著增高(P<0.05),而MDA含量明显减低(P<0.05)。结论:金银花可通过上调体内抗氧化酶体系并下调NF-kB信号传导途径呈现抗氧化、抗凋亡的保护作用。 展开更多
关键词 金银花 过氧化氢 抗氧化酶体系 抗凋亡信号传导 人肝RBL细胞系
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槲皮素对小鼠体内和体外NIH-3T3细胞的抗氧化作用及其机理 被引量：5
4
作者 宫璀璀 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 何培霞 王一菱 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2009年第1期52-58,共7页
目的比较槲皮素对小鼠体内和体外H2O2处理前/后的NIH-3T3细胞抗氧化效应的差异并探讨其作用机理。方法将NIH-3T3细胞分为4组,槲皮素前保护组(Qb)、槲皮素后保护组(Qa)、H2O2组(H2O2)和对照组(C)。用试剂盒检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px... 目的比较槲皮素对小鼠体内和体外H2O2处理前/后的NIH-3T3细胞抗氧化效应的差异并探讨其作用机理。方法将NIH-3T3细胞分为4组,槲皮素前保护组(Qb)、槲皮素后保护组(Qa)、H2O2组(H2O2)和对照组(C)。用试剂盒检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平;MTT和TUNEL法检测细胞凋亡率和生存率;免疫印迹和免疫组化技术检测细胞的cyclin D1、PTEN、NF-κB、HSP-70、BCl-2、BAX、及caspase-3的表达。另将20只Wistar大鼠等分为对照组和实验组,检测槲皮素灌胃前、后1、2及24 h血浆内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平。结果H2O2组细胞凋亡率增高,cyclin D1、PTEN及BCl-2的表达下调;BAX、HSP-70、NF-κB及caspase-3的表达上调;T-AOC,SOD,GSH-Px及GSH水平降低,NOS、NO2-/NO3-及MDA增高。动物灌胃后1 h、2 h血浆中T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH,NOS及NO2-/NO3-的水平增高,MDA降低;24 h后基本恢复。结论槲皮素在体内外皆可通过调节抗氧化酶体系发挥抗氧化作用,其效应依据H2O2处理与否和处理前/后等细胞的异质性而呈现一定差异。 展开更多
关键词 槲皮素 H2O2氧化应激 抗凋亡信号传导 NIH-3T3细胞系 抗氧化酶体系
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8-Br-cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca-109细胞凋亡和Bcl-2、Bax、XRCC1等凋亡相关蛋白的作用 被引量：3
5
作者 宫璀璀 王文丽 +1 位作者 吴景兰 刘影 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期698-700,共3页
目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素联合应用对Eca 10 9细胞的凋亡和Bcl 2、Bax、XRCC1等凋亡相关蛋白的作用。方法 :将Eca 10 9细胞随机分为 4组 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②槲皮素组 (Q组 ) ;③ (Br+Q)组 ;④不加药物的对照 (C)组。同时培... 目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素联合应用对Eca 10 9细胞的凋亡和Bcl 2、Bax、XRCC1等凋亡相关蛋白的作用。方法 :将Eca 10 9细胞随机分为 4组 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②槲皮素组 (Q组 ) ;③ (Br+Q)组 ;④不加药物的对照 (C)组。同时培养 4 8h ,对以上 4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜 (NCM)滴膜 2种标本 ,分别进行Bcl 2、Bax、XRCC1的免疫组化和免疫斑点印迹实验 ,并以TUNEL法检测各组细胞凋亡率。结果 :细胞凋亡率 ,C组为 4 % ,(Br +Q)组为 70 % ,Br组为 4 2 % ,Q组为 35 % ,(Br+Q)组 >Br组或Q组 >C组 ,P <0 .0 0 1。Br、Q及 (Br+Q)组与对照组相比 ,Bcl 2 IR及XRCC1 IR皆低于C组 ,P <0 .0 0 1,而Bax IR则高于C组 ,P <0 .0 0 1;Br组 :Q组或Br组 :(Br +Q)组 ,P >0 .0 5。Bcl 2 IR与XRCC1 IR呈显著正相关 ,与Bax IR和Bax IR与XRCC1皆呈显著负相关。结论 :Br与Q联合用药与单独用药皆可下调Bcl 2及XRCC1表达 ,上调Bax表达 ;联合用药的细胞凋亡率显著高于单用Br或Q。提示 。 展开更多
关键词 Bcl-2 Bax XRCC1 8-BR-CAMP 槲皮素 ECA-109细胞 细胞凋亡
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8-Br-cAMP对Hela细胞wtp53,mtp53,c-myc和iNOS基因表达的影响 被引量：1
6
作者 宫璀璀 任伟宏 +2 位作者 吴景兰 王文丽 刘影 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期666-669,共4页
目的 :探讨 8 Br cAMP对Hela细胞癌基因和抑癌基因等表达的影响。方法 :将培养的Hela细胞分为 3组 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) :加至 8 Br cAMP终浓度为 2× 10 -5mol/L ;②阳性对照组 (60 Co组 ) :给予60 Co照射量 4Gy ,72 0s;③阴... 目的 :探讨 8 Br cAMP对Hela细胞癌基因和抑癌基因等表达的影响。方法 :将培养的Hela细胞分为 3组 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) :加至 8 Br cAMP终浓度为 2× 10 -5mol/L ;②阳性对照组 (60 Co组 ) :给予60 Co照射量 4Gy ,72 0s;③阴性对照组 (C组 ) :仅加含体积分数为 10 %胎牛血清的DMEM培养液。各组细胞均培养 4 8h后 ,将 1× 10 7ml-1细胞悬液滴加至预先处理过的硝酸纤维素膜和载玻片上。应用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术分别检测 3组Hela细胞中野生型p5 3(wtp5 3)、突变型p5 3(mtp5 3)、c myc和iNOS基因的表达。结果 :8 Br cAMP组与阳性对照组相比 ,差异无统计学意义 ,P >0 .0 5 ;与阴性对照组相比 ,上调wtp5 3和iNOS基因的表达 ,同时下调mtp5 3和cmyc基因的表达 ,P <0 .0 1。结论 :结果提示 8 Br 展开更多
关键词 癌基因 抑癌基因 8-BR-CAMP HELA细胞
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8-Br-cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca-109细胞POLB及多药耐受相关蛋白的影响 被引量：1
7
作者 宫璀璀 王文丽 +1 位作者 吴景兰 刘影 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期701-702,共2页
目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca 10 9细胞耐药性的影响。方法 :将培养的Eca 10 9细胞随机分为 4组 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②槲皮素组 (Q组 ) ;③ (Br+Q)组 ;④不加药物的对照组 (C)组。同时培养 4 8h ,对以上 4... 目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素单独和联合应用对Eca 10 9细胞耐药性的影响。方法 :将培养的Eca 10 9细胞随机分为 4组 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②槲皮素组 (Q组 ) ;③ (Br+Q)组 ;④不加药物的对照组 (C)组。同时培养 4 8h ,对以上 4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜 (NCM)滴膜 2种标本 ,分别进行MRP和POLB的免疫组化染色和免疫斑点印迹阵列及TLC扫描。结果 :免疫组化染色显示 :C组的MRP IR、POLB IR强于Br组、Q组或 (Br+Q)组 ,P <0 .0 1。TLC扫描OD值 :C组MRP IR高于Br、Q(Br+Q)组约 3倍 ;POLB IR高于Br、Q或 (Br+Q)组约 2倍 ;MRP与POLB呈显著正相关r=0 .9838,P <0 .0 1。结论 :8 Br cAMP和槲皮素联合用药或单独用药均可降低Eca 10 9细胞的多药耐受性而提高药物的敏感性 。 展开更多
关键词 MRP POLB 8-BR-CAMP 槲皮素 ECA-109细胞
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8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞增变基因表型的影响 被引量：1
8
作者 宫璀璀 郑乃刚 +2 位作者 王广兰 吴景兰 李璇 《河南医学研究》 CAS 2010年第3期281-284,共4页
目的:探讨8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞增变基因表型变动的影响。方法:将Eca-109细胞分为4组:①8-Br-cAMP组(Br组);②槲皮素组(Q组);③(Br+Q)组;④不加药物的对照组(C)。同时培养48 h,对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素... 目的:探讨8-Br-cAMP和槲皮素联合应用对Eca-109细胞增变基因表型变动的影响。方法:将Eca-109细胞分为4组:①8-Br-cAMP组(Br组);②槲皮素组(Q组);③(Br+Q)组;④不加药物的对照组(C)。同时培养48 h,对以上4组细胞制备细胞滴片及硝酸纤维素膜(NCM)滴膜2种标本,分别进行Bcl-2、Bax、XRCC1、MRP和POLB的免疫组化和免疫斑点印迹实验,并以TUNEL法检测各组细胞凋亡率。结果:细胞凋亡率,C组为4%,(Br+Q)组为70%,Br组为42%,Q组为35%,(Br+Q)组>Br组或Q组>C组,(P<0.001)。Br、Q及(Br+Q)组与对照组相比,Bcl-2-IR及XRCC1-IR皆低于C组(P<0.001),而Bax-IR则高于C组(P<0.001);Br组:Q组或Br组:(Br+Q)组(P>0.05)。Bcl-2-IR与XRCC1-IR呈显著正相关,与Bax-IR和Bax-IR与XRCC1皆呈显著负相关。C组的MRP-IR、POLB-IR强于Br组、Q组或(Br+Q)组(P<0.01。)TLC扫描OD值:C组MRP-IR高于Br、Q或(Br+Q)组约3倍;POLB-IR高于Br、Q或(Br+Q)组约2倍;MRP与POLB呈显著正相关r=0.9838(P<0.01)。结论:Br与Q联合用药或单独用药皆可下调Bcl-2,XRCC1,MRP与POLB的表达,上调Bax的表达,提示Br与Q联合用药与单独用药皆可下调Eca-109细胞的增变基因表型。 展开更多
关键词 增变基因表型 8-BR-CAMP 槲皮素 ECA-109细胞
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抗谷胱甘肽还原酶单克隆抗体的研制及鉴定
9
作者 宫璀璀 韩玉春 +5 位作者 胡延基 王大明 王文丽 杨书豪 李明 胡哲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期136-137,共2页
关键词 谷胱甘肽还原酶 单克隆抗体 研制 鉴定
原文传递
槲皮素抗NIH-3T3细胞凋亡的作用
10
作者 宫璀璀 郑乃刚 +3 位作者 张成德 曹阳 孟明利 吴景兰 《河南医学研究》 CAS 2007年第2期108-110,共3页
目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮... 目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h,再换含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in。槲皮素后保护组(Qa):先用0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h。H2O2实验组(H2):先用含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24 h。取培养细胞提取DNA和制备1×107/m l细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率;应用细胞免疫组化技术检测Bc l-2、Bax、Caspase-3蛋白质的表达。结果:由TUNEL和Ladder实验得出,Qb组的细胞凋亡率明显低于H2组和Qa组。由细胞免疫组化技术检测分析得出,Qb组与Qa、H2组相比,Bc l-2的表达增高,Bax、Caspase-3的表达减低。结论:槲皮素可能是通过上调Bc l-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达,对H2O2诱导NIH-3T3细胞的凋亡起到抑制作用。 展开更多
关键词 槲皮素 凋亡 NIH-3T3细胞系
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维生素E在体内外具有抗氧化作用 被引量：47
11
作者 仓宝成 宫璀璀 +2 位作者 王莉 何佩 赖泽仁 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第1期80-84,共5页
目的探讨维生素E在体内外的应激损伤。方法体外实验:人肝RBL细胞系根据H_2O_2损伤及损伤前后给予维生素E分为4组,对照组(C)、H_2O_2损伤组(Ec)、H_2O_2损伤前(Eb)及后(Ea)给维生素E组;体内实验:将20只清洁级雄性Wistar大鼠分为对照组和... 目的探讨维生素E在体内外的应激损伤。方法体外实验:人肝RBL细胞系根据H_2O_2损伤及损伤前后给予维生素E分为4组,对照组(C)、H_2O_2损伤组(Ec)、H_2O_2损伤前(Eb)及后(Ea)给维生素E组;体内实验:将20只清洁级雄性Wistar大鼠分为对照组和大及小剂量维生素E组,每天进行一次35和15 mg/kg溶液2 m L灌胃,连续3 d。体外实验应用MTT和TUNEL法检测细胞存活率和凋亡率,免疫印迹和免疫组化方法检测细胞中NF-κB、Hsp-70、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达水平;体内实验应用生化法检测3和6 d后血浆内T-AOC、SOD、GSH和MDA的水平。结果 H_2O_2损伤组(Ec)细胞凋亡率增加(P<0.01),细胞内Bax、Hsp-70、NF-κB及caspase-3显著升高(P<0.01),而Bcl-2显著下降(P<0.01),维生素E干预后能显著缓解上述变化(P<0.01),H_2O_2损伤前干预效果优于后干预。灌胃后3 d血浆中T-AOC、SOD、GSH的水平增高,MDA降低(P<0.01),6 d后其相关指标变化更加显著(P<0.05)。结论维生素E可通过调节人肝RBL细胞相关蛋白表达水平和Wistar大鼠血浆中抗氧化酶体系而发挥抗氧化作用。 展开更多
关键词 维生素E H2O2 抗氧化酶体系 抗凋亡信号传导
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8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响 被引量：10
12
作者 王红梅 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 王一菱 宫璀璀 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期672-674,共3页
目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞凋亡中P38、Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 3组 :①对照组 :只加DMEM(Sigma)培养液 (含体积分数 10 %胎牛血清 )培养 4 8h。②Br组 :终浓度为 2× 10 -5... 目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞凋亡中P38、Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 3组 :①对照组 :只加DMEM(Sigma)培养液 (含体积分数 10 %胎牛血清 )培养 4 8h。②Br组 :终浓度为 2× 10 -5mol/L 8 Br cAMP的培养液培养 4 8h。③Q组 :终浓度为 4 3μmol/L槲皮素的培养液培养 4 8h。对以上 3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率。以免疫组化方法观察 3组细胞的P38MAPK IR和Caspase 3 IR反应性。结果 :Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组 ;Br组及Q组细胞的P38MAPK IR高于对照组 ;Br组及Q组细胞的Caspase 3 IR亦高于对照组。P38MAPK IR与Caspase 3 IR呈正相关。P均 <0 .0 5。结论 :P38MAPK及Caspase 3参与了 8 Br cAMP及槲皮素诱导的Eca 10 展开更多
关键词 P38 MAPK Caspase-3 细胞凋亡 ECA-109细胞 8-BR-CAMP 槲皮素
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重组人sCR1在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定 被引量：12
13
作者 王广兰 宫璀璀 +5 位作者 王文丽 张长远 王炳南 关晓峰 王轩 李璇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1066-1068,共3页
目的:酵母细胞SMD1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母... 目的:酵母细胞SMD1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48～72hsCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为Mr约31000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。 展开更多
关键词 毕赤酵母细胞 酵母载体 可溶性补体受体1 蛋白表达
原文传递
8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞周期及凋亡的影响 被引量：10
14
作者 任伟宏 宫璀璀 +3 位作者 吴景兰 赵素玲 赵志娟 苏安英 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期678-681,共4页
目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素 (quercetin)对Eca 10 9细胞周期及凋亡的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药... 目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素 (quercetin)对Eca 10 9细胞周期及凋亡的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组在同等条件下继续培养 4 8h。采用流式细胞仪检测细胞的周期 ,采用TUNEL法检测细胞凋亡百分率 ,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA降解情况。结果 :2实验组细胞中G2 M期细胞比例较对照组显著上升 (P <0 .0 1)。细胞凋亡百分率 :2实验组显著高于对照组 (P <0 .0 1) ;Br组和Q组相比 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。DNA琼脂糖凝胶电泳中Br组和Q组皆呈DNA“梯样型”带 ,对照组未呈现DNA降解。结论 :8 Br cAMP和槲皮素皆可阻滞Eca 10 9细胞于G2 M期 ,并进一步诱导Eca 10 9细胞凋亡。 展开更多
关键词 细胞凋亡 8-BR-CAMP 槲皮素 ECA-109细胞 食管癌
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重组人sCR1真核表达载体的构建、表达及其生物学活性 被引量：4
15
作者 王广兰 宫璀璀 +5 位作者 王文丽 张长远 刘亚利 何培霞 郑淑娜 陈湘林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期453-456,共4页
目的:采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCR1),研究重组人sCR1融合蛋白的体外生物学活性。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k中,构建含人sCR... 目的:采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCR1),研究重组人sCR1融合蛋白的体外生物学活性。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9k-sCR1),经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母细胞SMD1168中,将经G418抗性筛选出的重组sCR1酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后进行生物学活性鉴定。结果:获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCR1,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株,经甲醇诱导含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168细胞表达出重组sCR1融合蛋白。此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr约31000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白及较高的生物学活性。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性。 展开更多
关键词 可溶性补体受体1 毕赤酵母细胞 生物学活性 真核表达载体
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HIF-1α和RelA基因在急进高原正常人外周血单个核细胞中的表达及其与急性高原反应的关联性 被引量：2
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作者 方盼盼 宫璀璀 +5 位作者 仓宝成 李正民 李宗杰 李文莉 朱传杰 王迎涛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期781-785,共5页
目的:观察急进高原前后正常人单个核细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和核转录因子NF-κB p65亚基(RelA)表达水平的变化,探讨HIF-1α和RelA在急性高原反应(AMS)发生中的作用及机制。方法:对某部赴玉树抗震的士兵分别于进入高原前和进入... 目的:观察急进高原前后正常人单个核细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和核转录因子NF-κB p65亚基(RelA)表达水平的变化,探讨HIF-1α和RelA在急性高原反应(AMS)发生中的作用及机制。方法:对某部赴玉树抗震的士兵分别于进入高原前和进入高原后48h采集外周血,提取单个核细胞中的mRNA和蛋白,采用RT-PCR方法检测RelA和HIF-1αmRNA表达水平,Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达水平。Spearman相关分析法分析RelA和HIF-1α基因表达与AMS发生的相关性。结果:与急进高原前比较,进入高原后HIF-1α和RelA mRNA及HIF-1α蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);HIF-1αmRNA和RelA mRNA表达呈正相关关系(r=0.806,P<0.01);HIF-1α蛋白表达与AMS的发生率呈正相关关系(r=0.875,P<0.01);HIF-1α和RelA表达不同性别之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HIF-1α蛋白表达水平可作为预测和干预AMS的监测指标。急进高原后HIF-1α和RelA mRNA表达水平显著增加且呈显著正相关关系,提示在其信号传导通路之间存在cross-talk现象。 展开更多
关键词 急性高原反应 缺氧诱导因子1α 核转录因子KAPPAB p65亚基 缺氧 CROSS-TALK
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加味小柴胡汤对顺铂诱导的BRL细胞相关凋亡蛋白表达的影响 被引量：4
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作者 刘应柯 李合国 宫璀璀 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期665-667,共3页
目的:探讨加味小柴胡汤对顺铂诱导的大鼠肝BRL细胞凋亡蛋白表达的调控作用。方法:将培养的BRL细胞分为空白组、顺铂组、实验1组(加味小柴胡汤大剂量)、实验2组(小剂量)4组。采用MTT、TUNEL、DNA琼脂糖凝胶电泳、免疫组化、完整细胞蛋白... 目的:探讨加味小柴胡汤对顺铂诱导的大鼠肝BRL细胞凋亡蛋白表达的调控作用。方法:将培养的BRL细胞分为空白组、顺铂组、实验1组(加味小柴胡汤大剂量)、实验2组(小剂量)4组。采用MTT、TUNEL、DNA琼脂糖凝胶电泳、免疫组化、完整细胞蛋白质斑点印迹等方法,检测各组细胞存活率、凋亡率及细胞相关凋亡蛋白的变化。结果:顺铂组细胞凋亡率比空白组明显升高,Rb、p21、Caspase-3、Bax、wp53蛋白表达上调;存活率显著降低,Bcl-2、mp53表达下调;实验1组、2组凋亡率明显较顺铂组降低,存活率升高,其他各指标皆与顺铂组有明显差异,1组作用更明显。结论:加味小柴胡汤可使顺铂诱导的BRL细胞存活率升高,凋亡率降低,对顺铂诱导BRL细胞凋亡蛋白的异常表达有调控作用。 展开更多
关键词 顺铂 加味小柴胡汤 BRL细胞 存活率 凋亡率 凋亡蛋白
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8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞内游离钙离子浓度的影响 被引量：2
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作者 任伟宏 宫璀璀 +2 位作者 吴景兰 赵素玲 顾侦芳 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期682-684,共3页
目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素对人食管癌Eca 10 9细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C... 目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素对人食管癌Eca 10 9细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组细胞同时培养 4 8h ,用激光共聚焦显微镜观察 3组细胞内钙离子的荧光强度。结果 :对照组细胞内游离钙离子荧光强度为 5 9.2± 8.1,Br组细胞内游离钙离子荧光强度为6 3.3± 8.5 ,与对照组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;Q组细胞内游离钙离子荧光强度为 113.3± 12 .5 ,与对照组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 展开更多
关键词 CA^2+ 8-BR-CAMP 槲皮素 ECA-109细胞 食管癌
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8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞iNOS基因拷贝及Caspase-3表达的影响 被引量：2
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作者 任伟宏 宫璀璀 +3 位作者 吴景兰 赵志娟 顾侦芳 苏安英 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期684-686,共3页
目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞iNOS基因拷贝及Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任... 目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞iNOS基因拷贝及Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组细胞同时培养 4 8h。采用原位斑点印迹法显示iNOS基因拷贝和mRNA的表达 ,采用细胞免疫化学技术显示Caspase 3的表达。结果 :Br和Q组较C组iNOS基因拷贝和mRNA表达信号较强。Br和Q组细胞内Caspase 3免疫反应 (IR)性较强 ,Br和Q组与对照组相比 ,存在显著性差异 (P 0 .0 1) ;Br组的Caspase 3 IR强于槲皮素组 (P <0 .0 1)。结论 :8 Br cAMP和槲皮素皆可上调iNOS基因的扩增和表达 ,最终可都通过上调Caspase 3的表达 ,诱导Eca 10 9细胞凋亡。 展开更多
关键词 细胞凋亡 INOS CASPASE-3 ECA-109细胞
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加味小柴胡汤对顺铂诱导BRL细胞核转录因子和热休克蛋白70表达的影响 被引量：2
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作者 刘应柯 张玉峰 +1 位作者 宫璀璀 刘尚岭 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2009年第6期31-32,共2页
目的观察加味小柴胡汤对顺铂诱导的大鼠肝BRL细胞核转录因子-kB(NF-kB)、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将BRL细胞分为4组:空白组、顺铂组及加味小柴胡汤大、小剂量组。采用完整细胞蛋白质斑点印迹、免疫组织化学等方法,检测各组... 目的观察加味小柴胡汤对顺铂诱导的大鼠肝BRL细胞核转录因子-kB(NF-kB)、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将BRL细胞分为4组:空白组、顺铂组及加味小柴胡汤大、小剂量组。采用完整细胞蛋白质斑点印迹、免疫组织化学等方法,检测各组细胞NF-kB、HSP70变化。结果顺铂组NF-kB表达明显较空白组升高,HSP70表达降低,组间比较差异有统计学意义;加味小柴胡汤大、小剂量组NF-kB明显较顺铂组低,差异有统计学意义;加味小柴胡汤大、小剂量组HSP70表达均升高,但仅加味小柴胡汤大剂量组差异明显。结论加味小柴胡汤可下调顺铂诱导的BRL细胞NF-kB表达,上调HSP70表达,此作用可能是该方减轻细胞氧化损伤、抑制细胞凋亡重要机理之一。 展开更多
关键词 BRL细胞 顺铂 加味小柴胡汤 细胞核转录因子-kB 热休克蛋白70
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