目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SIL对肺炎链球菌感染的肺上皮细胞细胞增殖、凋亡及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响。方法:运用反转录PCR(RT-PCR)检测lncRNA SIL在人肺泡上皮细胞株A549、HEPApiC、肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)以及...目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SIL对肺炎链球菌感染的肺上皮细胞细胞增殖、凋亡及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响。方法:运用反转录PCR(RT-PCR)检测lncRNA SIL在人肺泡上皮细胞株A549、HEPApiC、肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)以及被肺炎链球菌R6感染的A549、HEPApiC、AECⅡ细胞的表达,显示其表达在R6感染的A549细胞中最高,故应用A549细胞进行后续实验。将A549细胞随机分为A549组(常规培养)、A549+R6组(用R6感染A549细胞)、lncRNA SIL mimic组(在A549细胞中转染lncRNA SIL mimic,并用R6感染细胞)和lncRNA SIL siRNA组(在A549细胞中转染lncRNA SIL siRNA,并用R6感染细胞)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达,并设立TGF-β1/Smads通路抑制剂组进行对照。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组炎症因子表达。结果:与A549组比较,A549+R6组lncRNA SIL表达升高(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组lncRNA SIL表达升高,lncRNA SIL siRNA组表达降低(均P<0.05)。与lncRNA SIL mimic组比较,lncRNA SIL siRNA组lncRNA SIL表达降低(P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组不同时间细胞增殖率降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组不同时间细胞增殖率降低,lncRNA SIL siRNA组不同时间细胞增殖率升高(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组细胞凋亡率增加(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组细胞凋亡率增加,lncRNA SIL siRNA组细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL siRNA组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达降低,Smad 6、Smad 7蛋白表达升高(均P<0.05)。lncRNA SIL siRNA组与抑制剂组各指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与A549组比较,A549+R6组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素细胞-1β(IL-1β)、IL-6水平升高(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,lncRNA SIL siRNA组TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(均P<0.05)。结论:肺炎链球菌感染后,沉默lncRNA SIL可逆转肺上皮细胞凋亡增加及增殖减少的情况,并抑制TGF-β1/Smads通路激活,减少炎症因子释放,从而抑制炎性反应。展开更多
文摘目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SIL对肺炎链球菌感染的肺上皮细胞细胞增殖、凋亡及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响。方法:运用反转录PCR(RT-PCR)检测lncRNA SIL在人肺泡上皮细胞株A549、HEPApiC、肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)以及被肺炎链球菌R6感染的A549、HEPApiC、AECⅡ细胞的表达,显示其表达在R6感染的A549细胞中最高,故应用A549细胞进行后续实验。将A549细胞随机分为A549组(常规培养)、A549+R6组(用R6感染A549细胞)、lncRNA SIL mimic组(在A549细胞中转染lncRNA SIL mimic,并用R6感染细胞)和lncRNA SIL siRNA组(在A549细胞中转染lncRNA SIL siRNA,并用R6感染细胞)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达,并设立TGF-β1/Smads通路抑制剂组进行对照。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组炎症因子表达。结果:与A549组比较,A549+R6组lncRNA SIL表达升高(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组lncRNA SIL表达升高,lncRNA SIL siRNA组表达降低(均P<0.05)。与lncRNA SIL mimic组比较,lncRNA SIL siRNA组lncRNA SIL表达降低(P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组不同时间细胞增殖率降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组不同时间细胞增殖率降低,lncRNA SIL siRNA组不同时间细胞增殖率升高(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组细胞凋亡率增加(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组细胞凋亡率增加,lncRNA SIL siRNA组细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL siRNA组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达降低,Smad 6、Smad 7蛋白表达升高(均P<0.05)。lncRNA SIL siRNA组与抑制剂组各指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与A549组比较,A549+R6组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素细胞-1β(IL-1β)、IL-6水平升高(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,lncRNA SIL siRNA组TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(均P<0.05)。结论:肺炎链球菌感染后,沉默lncRNA SIL可逆转肺上皮细胞凋亡增加及增殖减少的情况,并抑制TGF-β1/Smads通路激活,减少炎症因子释放,从而抑制炎性反应。
