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ST3Gal参与肠道致病菌对肠上皮细胞黏附和侵袭的影响
1
作者 尚杨杨 蒋涛 +2 位作者 冉郦键 刘韵 叶钧 《西部医学》 2024年第7期957-962,共6页
目的探讨ST3Gal合成的α2,3-唾液酸残基修饰对肠道致病菌黏附和侵袭肠上皮细胞的影响。方法通过促分化技术获得分化的结肠上皮细胞株(HT-29-Gal),再通过腺病毒转染技术,获得ST3Gal过表达细胞株(ST3Gal/HT-29-Gal)和干扰细胞株(ST3Gal-sh... 目的探讨ST3Gal合成的α2,3-唾液酸残基修饰对肠道致病菌黏附和侵袭肠上皮细胞的影响。方法通过促分化技术获得分化的结肠上皮细胞株(HT-29-Gal),再通过腺病毒转染技术,获得ST3Gal过表达细胞株(ST3Gal/HT-29-Gal)和干扰细胞株(ST3Gal-sh/HT-29-Gal)及其对照细胞株(Ctr/HT-29-Gal),获得的上述细胞株与肠道致病菌(EPEC或EHEC O157∶H7)共孵育2 h后,通过荧光显微镜和琼脂糖克隆法计数黏附于上述细胞株表面的肠道致病菌数;获得的上述细胞株与肠道致病菌(EIEC)共培养2 h后,通过庆大霉素杀灭粘附于细胞表面的肠道致病菌,再采用琼脂糖克隆计数法计数侵袭入上述细胞株内的肠道致病菌数。最后通过细胞通透性(FD4)实验和跨膜电阻(TEER)实验评价ST3Gal对肠上皮细胞屏障功能的影响。结果荧光显微镜和琼脂糖克隆法计数均显示,黏附于ST3Gal/HT-29-Gal细胞表面的肠道致病菌(EPEC或EHEC O157∶H7)数低于其对照细胞(P<0.05或P<0.01);侵袭入ST3Gal/HT-29-Gal细胞内肠道致病菌(EIEC)数高于其对照细胞(P<0.01);ST3Gal/HT-29-Gal细胞TEER值低于其对照细胞(P<0.01);ST3Gal/HT-29-Gal细胞通透性高于其对照细胞(P<0.01);ST3Gal/HT-29-Gal细胞中MUC2的RNA和蛋白表达量均低于其对照细胞(P<0.01),相反结果在ST3Gal-sh/HT-29-Gal细胞中被证实。结论ST3Gal抑制肠道致病菌黏附于结肠上皮细胞表面,促进肠道致病菌侵袭入结肠上皮细胞内。 展开更多
关键词 α2 3唾液酸 大肠杆菌 通透性 黏附 侵袭
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结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中HIF-1α与miRNA-200b表达的相关性 被引量：10
2
作者 郭靖 尚杨杨 汪荣泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期545-549,共5页
目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α与miRNA-200b在结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中的表达以及两者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结直肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α与miRNA-200b的表达。利用Co Cl_2构建结肠癌细胞系... 目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α与miRNA-200b在结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中的表达以及两者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结直肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α与miRNA-200b的表达。利用Co Cl_2构建结肠癌细胞系的缺氧诱导模型,通过实时定量PCR和Western blot分别测定缺氧的Caco-2细胞中HIF-1α和miRNA-200b基因表达并确立两者相关性。结果 HIF-1α在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P〈0.01）,miRNA-200b在癌组织中的表达显著低于癌旁组织（P〈0.01）,且HIF-1α和miRNA-200b在癌组织中的表达呈负相关（r=-0.324,P〈0.05）。缺氧处理2 h后,HIF-1α表达升高,miRNA-200b表达降低;随着缺氧时间延长（4~12 h）HIF-1α表达逐渐降低,miRNA-200b的表达缓慢上升;缺氧16 h,HIF-1α的表达回升且达到另一个高峰,miRNA-200b的表达降至最低。Real-time PCR和Western blot联合检测发现,HIF-1α和miRNA-200b表达呈相反的趋势。结论 HIF-1α可能通过抑制miRNA-200b的表达从而参与结直肠癌上皮细胞EMT的过程。 展开更多
关键词 结肠癌 HIF-1Α MiRNA-200b EMT
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Ascl2转录调控人结肠癌上皮细胞内CDX2基因表达的研究 被引量：1
3
作者 钟小莉 尚杨杨 +7 位作者 潘琼 李姗姗 刘韵 叶钧 宋丽丽 赵晶京 彭志红 汪荣泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期1867-1871,共5页
目的探讨Ascl2对人结肠癌上皮细胞中CDX2基因的转录调控作用。方法预测CDX2启动子的转录因子结合位点,构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒,分别命名为pGL3-CDX2-C1-8;将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和sh... 目的探讨Ascl2对人结肠癌上皮细胞中CDX2基因的转录调控作用。方法预测CDX2启动子的转录因子结合位点,构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒,分别命名为pGL3-CDX2-C1-8;将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T细胞中,检测细胞中的双荧光素酶活性。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术,用Ascl2抗体免疫沉淀与CDX2启动子区DNA片段相结合的Ascl2,PCR扩增CDX2启动子的特异性序列。结果转录因子数据库预测到CDX2近端启动子区含多个E-box结合位点和潜在的Nkx-2、GATA-1、CdxA、Sox-5、SRY等顺式作用元件。双酶切及测序结果证实pGL3-CDX2-C1-8重组质粒插入片段序列均正确。重组质粒在shRNAAscl2/LS174T细胞中的荧光素酶活性明显高于shRNA-Ctr/LS174T细胞(P<0.01)。随着CDX2启动子片段的缩短,荧光素酶活性呈升高趋势。ChIP实验证实在CDX2近端启动子存在与Ascl2相结合的片段,在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中,Ascl2与CDX2启动子区域中-841^-646、-291^-134、-7^+138片段结合的DNA片段明显少于对照shRNA-Ctr/LS174T细胞。结论 Ascl2在结肠癌上皮细胞中可能通过与CDX2近端启动子的直接结合而达到转录阻遏CDX2基因表达的目的。 展开更多
关键词 Ascl2 CDX2启动子 结肠肿瘤 荧光素酶报告基因
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结肠癌组织miR-200c／141定量表达的临床病理学意义 被引量：2
4
作者 孟令宽 钟小莉 +4 位作者 潘琼 叶钧 尚杨杨 郭靖 汪荣泉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期987-992,共6页
目的探讨结肠癌组织mi R-200c/141定量表达与患者临床病理学特征之间的联系。方法实时定量PCR检测49例结肠癌患者癌组织和癌旁组织中的mi R-200c/141的表达水平。分析mi R-200c/141表达量、联合mi R-200c和mi R-141表达量与患者临床病... 目的探讨结肠癌组织mi R-200c/141定量表达与患者临床病理学特征之间的联系。方法实时定量PCR检测49例结肠癌患者癌组织和癌旁组织中的mi R-200c/141的表达水平。分析mi R-200c/141表达量、联合mi R-200c和mi R-141表达量与患者临床病理学特征之间的关系,以及mi R-200c/141表达量在判断患者术后1年预后中的意义。结果结肠癌组织中mi R-200c/141表达水平较癌旁组织明显降低(P=0.0002,P=0.0058)。mi R-141表达量与肿瘤大小和淋巴结转移呈负相关(P<0.05),有淋巴结转移或临床Ⅲ-Ⅳ期患者结肠癌组织中mi R-141的表达量明显低于没有淋巴结转移或临床Ⅰ-Ⅱ期患者癌组织的表达量(P=0.035,P=0.042)。mi R-200c/141表达量与肿瘤大小之间明显相关(P<0.05)。mi R-200c/141的表达量与患者术后1年的生存率无相关关系(P>0.05)。结论结肠癌组织中表达下调的mi R-200c/141与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期有关。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 病理学 临床 微RNAS
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转录因子Ascl2调控Acss1/3的表达影响结直肠癌患者预后
5
作者 冉鹂键 汪荣泉 +1 位作者 蒋涛 尚杨杨 《西部医学》 2023年第7期943-950,958,共9页
目的 转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌(CRC)前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞(sh-Ascl2/LS174T)的mRNA及miRNA差异表达数据(GSE69036... 目的 转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌(CRC)前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞(sh-Ascl2/LS174T)的mRNA及miRNA差异表达数据(GSE69036和GSE34926)分析其靶基因;应用RT-PCR方法和Western印迹定量检测sh-Ascl2/LS174T及对照细胞中的Ascl2、Acss1和Acss3的mRNA表达水平,以及Ascl2和Acss1蛋白表达水平,从GSE44076表达数据和UALCAN数据比较在正常结直肠粘膜、CRC组织和不同临床病理分期的肿瘤组织的表达水平差异;TCGA数据库下载548例CRC患者基因mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析表达相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析评估危险因素。结果 sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA较对照细胞下调2.08倍,miR-4282表达水平下调2.069倍。RT-PCR定量检测sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA和miR-4282水平明显下降(P<0.01),Acss3的mRNA水平明显升高(P<0.05);Acss1和Ascl2蛋白水平较对照细胞均明显下降。CRC组织Ascl2和Acss1的mRNA水平明显高于癌旁结直肠粘膜组织(P<0.001),而Acss3明显低于癌旁结直肠粘膜组织(P<0.001);CRC组织中Ascl2与Acss1的mRNA表达水平呈正相关,与Acss3的表达水平呈负相关(均P<0.001)。Ascl2和Acss3表达水平与疾病特异性生存期(DSS)、总体生存期(OS)、无进展生存期(PFS)无关,Acss1高表达组比低表达组的DSS (P=0.0389)和OS (P=0.04)明显降低。Ascl2与Acss1基因异常表达、Ascl2、Acss1和Acss3基因异常联合表达与CRC患者的DSS存在显著的联系(P=0.0377和P=0.0161),Ascl2、Acss1和Acss3三个基因的联合异常表达是影响CRC患者DSS的危险因素之一(P=0.043)。结论 Ascl2对CRC细胞中的Acss1/3的表达可能具有调控作用而导致其短链脂肪酸β-氧化的重编程,它们的联合异常表达可以一定程度预测CRC患者的预后。 展开更多
关键词 Ascl2 Acss1/3 结直肠癌 生存预后
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结直肠癌miRNA相关的Ascl2靶基因中的预后标志物 被引量：2
6
作者 武赟 胡文静 +1 位作者 尚杨杨 汪荣泉 《西南国防医药》 CAS 2021年第4期286-291,共6页
目的探讨结直肠癌细胞中miRNA相关的Ascl2靶基因对结直肠癌患者的临床预后价值。方法分析GEO数据库中干扰结肠癌LS174T细胞Ascl2表达的miRNA芯片数据(GSE34926)和基因RNA-Seq数据进行差异基因表达分析(GSE69036),通过对miRNA靶基因预测... 目的探讨结直肠癌细胞中miRNA相关的Ascl2靶基因对结直肠癌患者的临床预后价值。方法分析GEO数据库中干扰结肠癌LS174T细胞Ascl2表达的miRNA芯片数据(GSE34926)和基因RNA-Seq数据进行差异基因表达分析(GSE69036),通过对miRNA靶基因预测和差异基因表达对比,获得miRNA相关的Ascl2靶基因DEGs并行GO和KEGG分析,通过蛋白质互作网络图而筛选关键基因。用Kaplan-Meier方法进行生存分析。结果干扰Ascl2的LS174T细胞内存在符合条件的350个miRNA及其4640靶基因(DEG1);干扰Ascl2的LS174T细胞内出现1582个差异表达基因(DEG2);交集的534个基因定义为miRNA相关的Ascl2靶基因;GO分析这些基因富集在蛋白结合和转录抑制,KEGG分析这些基因集中在代谢相关通路和癌症相关的miRNA等通路;PPI网络得到43个关键基因,其中4个关键基因COPS3、DYNLL2、RAB6A与COPG1与结直肠癌患者的生存有相关性,并且未见文献报道。结论结直肠癌细胞Ascl2可通过miRNA调控具有不同的生物学功能的靶基因,其中COPS3、DYNLL2、RAB6A与COPG1可成为预测结直肠癌患者预后的新标志物。 展开更多
关键词 结直肠癌 Ascl2 MIRNA 总体生存率
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转化生长因子β1诱导胃癌细胞AGS分泌VEGF-C的机制研究 被引量：2
7
作者 田音 胡文静 +2 位作者 尚杨杨 武赟 刘韵 《局解手术学杂志》 2020年第3期180-184,共5页
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导胃癌细胞AGS分泌血管内皮生长因子C(VEGF-C)的分子机制。方法体外培养胃癌细胞系AGS细胞,将其分为未刺激组、TGF-β1刺激组、TGF-βR抑制剂组、DMSO组、Smad3抑制剂组、NF-κB抑制剂组、MEK1/2抑... 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导胃癌细胞AGS分泌血管内皮生长因子C(VEGF-C)的分子机制。方法体外培养胃癌细胞系AGS细胞,将其分为未刺激组、TGF-β1刺激组、TGF-βR抑制剂组、DMSO组、Smad3抑制剂组、NF-κB抑制剂组、MEK1/2抑制剂组、p38/MAPK抑制剂组以及JNK抑制剂组。除未刺激组外,其余各组均用TGF-β1刺激细胞,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF-C的水平。结果TGF-β1刺激组的VEGF-C分泌水平显著高于未刺激组,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1能够诱导AGS细胞分泌VEGF-C,并具有剂量和时间依赖性。在TGF-β1刺激的条件下,TGF-βR抑制剂组及Smad3抑制剂组AGS细胞分泌的VEGF-C水平均显著低于DMSO组,差异有统计学意义(P<0.01);而NF-κB、MEK1/2、p38/MAPK和JNK抑制剂组中VEGF-C水平与DMSO组比较差异则无统计学意义(P>0.05)。结论TGF-β1可通过其受体及下游的Smad3信号通路诱导AGS细胞分泌VEGF-C,从而有助于胃癌的淋巴转移。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 血管内皮生长因子C SMAD3 胃癌 AGS 分子机制
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GCNT3在结直肠癌中的表达及临床意义 被引量：1
8
作者 刘陕西 叶钧 +2 位作者 尚杨杨 陈颢元 汪荣泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期913-917,共5页
目的探讨GCNT3在结直肠癌中表达的水平变化及其对结直肠癌患者预后的影响。方法国际癌症和肿瘤基因数据库(TCGA)中下载结直肠癌患者GCNT3基因(编码C2GnT-2)的mRNA表达数据及临床信息,整理分析其表达水平变化对结直肠癌临床相关性及预后... 目的探讨GCNT3在结直肠癌中表达的水平变化及其对结直肠癌患者预后的影响。方法国际癌症和肿瘤基因数据库(TCGA)中下载结直肠癌患者GCNT3基因(编码C2GnT-2)的mRNA表达数据及临床信息,整理分析其表达水平变化对结直肠癌临床相关性及预后的影响,并通过细胞增殖实验观察干扰C2GnT-2合成后结直肠癌细胞增殖能力的变化情况。结果 GCNT3在癌组织中较癌旁组织低表达(P<0.001);GCNT3低表达组病人无病生存率显著低于高表达组(P<0.05);干扰C2GnT-2合成后结直肠癌细胞增殖能力显著增强(P<0.01)。结论 GCNT3在结直肠癌中低表达,其低表达可能提示直肠癌患者无病生存率低。 展开更多
关键词 结直肠癌 癌症和肿瘤基因数据库 GCNT3 无病生存率
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改性钠基蒙脱石散治疗CAG的临床疗效及安全性
9
作者 胡文静 汪荣泉 +1 位作者 武赟 尚杨杨 《西南国防医药》 CAS 2021年第6期511-515,共5页
目的探讨改性钠基蒙脱石散治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效和安全性。方法本试验为开放性、治疗前后对照、单中心的初步研究。患者接受改性钠基蒙脱石散1g口服,每日3次,共12 w。比较治疗前后患者的症状、内镜及病理改变,其中胃窦粘膜萎缩... 目的探讨改性钠基蒙脱石散治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效和安全性。方法本试验为开放性、治疗前后对照、单中心的初步研究。患者接受改性钠基蒙脱石散1g口服,每日3次,共12 w。比较治疗前后患者的症状、内镜及病理改变,其中胃窦粘膜萎缩的改变情况是主要的研究终点。结果治疗后上腹痛、上腹胀、早饱嗳气、恶心等症状明显改善(P<0.05);内镜下表现包括粘膜萎缩、红斑、糜烂较治疗前明显改善(P<0.05);治疗前后胃窦黏膜活检的病理切片固定由两个医院病理科的两名高年资病理医师独立评判,取均值。萎缩评分明显下降(P<0.05);慢性炎症评分存在下降的趋势,其中--组病理评价其下降达到显著差异(P<0.05),而另一组没有达到显著差异(P>0.05);活动性炎症和肠化评分比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论这项初步研究表明,改性钠基蒙脱石散治疗慢性萎缩性胃炎是安全的,可以改善患者的症状、内镜和病理学特性。 展开更多
关键词 改性钠基蒙脱石散 慢性萎缩性胃炎 胃窦 萎缩 慢性炎症
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结直肠癌细胞中TAZ调控MUC13和GXYLT1表达及其对结直肠癌患者的临床预后价值
10
作者 胡文静 武赟 +1 位作者 尚杨杨 汪荣泉 《临床消化病杂志》 CAS 2021年第3期174-181,共8页
[目的]探索TAZ,MUC13/GXYLT1在结直肠癌组织的表达相关性及其对结直肠癌患者的临床预后价值。[方法]从GSE数据库(GSE39904)下载结直肠癌SW480细胞干扰TAZ表达后mRNA表达芯片的数据,用热图显示差异表达基因结果。从TCGA数据库下载结直肠... [目的]探索TAZ,MUC13/GXYLT1在结直肠癌组织的表达相关性及其对结直肠癌患者的临床预后价值。[方法]从GSE数据库(GSE39904)下载结直肠癌SW480细胞干扰TAZ表达后mRNA表达芯片的数据,用热图显示差异表达基因结果。从TCGA数据库下载结直肠癌患者基因mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析方法分析TAZ与MUC13/GXYLT1的mRNA表达水平的相关性。TAZ、MUC13和GXYLT1 mRNA定量采用Real-time PCR检测。生存分析采用Kaplan-Meier方法,Cox回归分析用于危险因素评估。[结果]结直肠癌组织TAZ与MUC13的mRNA表达呈负相关(P=0.0033),TAZ与GXYLT1的mRNA表达呈正相关(P=0.0103);干扰SW480和HCT116细胞TAZ表达导致MUC13 mRNA水平明显升高(P<0.01),GXYLT1 mRNA水平明显下降(P<0.01);TAZ高表达组比低表达组的无进展生存期(P=0.0002)、疾病特异性生存期(P=0.0059)、总体生存期(P=0.0011)明显低;MUC13高表达组比低表达组的无进展生存期(P=0.0331)、疾病特异性生存期(P=0.0219)明显高;GXYLT1高表达组比低表达组的无进展生存期(P=0.0249)明显低。TAZ、MUC13和GXYLT13个基因的联合异常表达是影响结直肠癌患者无进展生存期的危险因素之一(P=0.004)。[结论]结直肠癌细胞TAZ对MUC13/GXYLT1的表达可能具有调控作用,单独或联合TAZ、MUC13和GXYLT1的异常表达分析可以一定程度预测结直肠癌患者预后。 展开更多
关键词 结直肠癌 TAZ MUC13 GXYLT1 无进展生存期
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