文摘目的观察小鼠肝多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)感染模型中细胞焦亡NLRP3/Caspase-1通路中关键蛋白的表达并探讨其相关性。方法选取25只BALB/c小鼠按随机数字表分为对照组和感染组,感染组以0.2 mL原头节悬液(含原头节3000个)注射于肝脏被膜下,建立肝Em感染模型,对照组不予处理,常规饲养。分别于模型建模后1、2、3及5个月处死小鼠,摘取肝脏,观察肝脏大体形态,行HE染色、透射电镜观察组织病理学改变;行免疫组化和免疫印迹法检测肝脏组织中细胞焦亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)/Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)通路中关键蛋白的表达,采用ELISA测定细胞焦亡下游因子IL-1β的表达水平。结果与对照组相比,感染组小鼠肝组织表面囊性病灶随时间延长逐渐增大并凸出于肝脏表面;HE染色可见肝脏病灶出现不同程度的炎性细胞浸润、纤维增生等多种病理改变。Em感染2个月组透射电镜观察可看到肝细胞的细胞膜断裂、不连续,符合细胞焦亡的“打孔”现象。ELISA检测结果显示Em感染1、2、3和5个月后小鼠肝脏组织匀浆中IL-1β浓度均高于对照组的浓度,差异有统计学意义(F=127.2,P<0.05)。免疫组化检测结果显示,Caspase-1和NLRP3在Em感染1、2、3及5个月的小鼠肝脏中阳性细胞比率均高于对照组,差异有统计学意义(F=114.6,P<0.05;F=85.89,P<0.05)。蛋白免疫印迹结果显示,Caspase-1、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)和NLRP3蛋白在感染组小鼠肝脏中的相对表达水平呈现先升高(其中Caspase-1和GSDMD的表达于感染1个月时升至最高,NLRP3的表达于感染2个月时升至最高),后降低的趋势,各时相感染组与对照组比较以及各时相感染组之间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论采用“切开皮肤经腹壁肌层肝穿刺法”建立小鼠Em感染模型是可行的;小鼠肝Em感染后存在细胞焦亡现象,可能通过细胞焦亡NLRP3/Caspase-1通路发挥炎症作用。
