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2019—2022年广西鸭圆环病毒分子流行病学研究
1
作者 熊陈勇 曾素先 +11 位作者 刘惠心 赵康 施开创 施喻文 谢守玉 韦显凯 龙凤 冯淑萍 屈素洁 王露霞 林昌华 尹彦文 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期373-381,共9页
【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株... 【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株核苷酸和氨基酸序列相似性,使用RDP4和SimPlot 3.5.1软件分析DuCV重组事件,采用Mega 7.0软件构建遗传进化树,应用BioEdit软件分析DuCV Cap蛋白氨基酸变异位点。【结果】DuCV阳性率为22.5%,基因组大小为1988~1996 bp。广西DuCV毒株全基因组、Rep和Cap基因与参考毒株核苷酸序列相似性分别为71.9%~99.6%、83.1%~99.9%和52.8%~99.9%。基因重组分析显示,DuCV-GX13-2019和DuCV-GX14-2020存在重组事件。Cap蛋白共有78个氨基酸位点发生突变,与DuCV-1相比,DuCV-2在第3、12、15、23、31、42、56和64位氨基酸处完全变异。广西毒株为DuCV-1和DuCV-2基因型,DuCV-1为主要优势毒株,且DuCV-1b亚型流行最为广泛。【结论】广西地区DuCV发病较严重,部分毒株存在重组事件,Cap蛋白突变率高,DuCV多种亚型均有流行。研究结果为广西地区DuCV流行病学调查提供基本数据。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒(DuCV) 遗传进化 相似性 流行病学
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鹅细小病毒、番鸭细小病毒及鸭圆环病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用 被引量：1
2
作者 谢守玉 刘惠心 +11 位作者 熊陈勇 郑敏 施开创 韦显凯 冯淑萍 龙凤 梁凤 吕思明 屈素洁 陆文俊 尹彦文 李军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期38-44,共7页
为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光... 为建立鉴别检测鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)及鸭圆环病毒(DuCV)的方法,本研究分别针对GPV、MDPV NS基因与DuCV Rep基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时鉴别检测GPV、MDPV及DuCV的TaqMan荧光定量PCR方法。利用该方法检测GPV、MDPV、DuCV及禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、鸭坦布苏病毒、番鸭呼肠孤病毒等主要水禽源病毒,结果显示,该方法仅能扩增出GPV、MDPV及DuCV,与其他主要水禽源病毒均无交叉反应,特异性强;利用该方法检测等体积混合后的GPV、MDPV及DuCV质粒标准品混合物,结果显示,该方法对3种质粒标准品的检测限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,普通单一PCR对上述3种质粒标准品混合物的检测限均为7.5×10^(3)拷贝/μL,表明本研究建立方法的敏感性高于普通PCR;该方法组内与组间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性好。利用该方法与MDPV和GPV双重荧光定量PCR方法及DuCV荧光定量PCR方法同时检测96份临床发病鸭的组织样品,该方法检测结果显示,共检出58份阳性样品,其中GPV检出率为18.75%(18/96),MDPV检出率为4.17%(4/96),DuCV检出率为37.50%(36/96),GPV与DuCV混合感染率为8.33%(8/96),阴性样品38份。与GPV和MDPV双重荧光定量PCR及DuCV荧光定量PCR方法的检测结果均一致,三者的符合率达100%。本研究建立的GPV、MDPV及DuCV多重TaqMan荧光定量PCR方法为临床鉴别检测该3种病原及其流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术手段。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 鸭圆环病毒 荧光定量PCR 临床应用
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2016-2021年广西H9亚型禽流感病毒HA和NA基因遗传进化动态分析 被引量：1
3
作者 龙凤 谢守玉 +8 位作者 崔鹏飞 施开创 韦显凯 冯淑萍 屈素洁 陆文俊 李剑锋 尹彦文 邓国华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1947-1958,共12页
【目的】研究H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)广西毒株的遗传进化动态,以期掌握其地域流行新特点,为及时优化调整有效防控措施提供数据支持。【方法】采集2016-2021年广西各地的家禽喉头、泄殖腔及环境拭子样品3600份,接种... 【目的】研究H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)广西毒株的遗传进化动态,以期掌握其地域流行新特点,为及时优化调整有效防控措施提供数据支持。【方法】采集2016-2021年广西各地的家禽喉头、泄殖腔及环境拭子样品3600份,接种9~11日龄SPF鸡胚分离病毒,并结合血凝和血凝抑制试验及实时荧光定量RT-PCR方法鉴定AIV亚型,根据毒株检测年限和来源地选取部分H9亚型AIV核酸阳性样品进行HA、NA基因扩增、测序及进化动态分析。【结果】共获得46株H9亚型AIV广西毒株的HA、NA基因序列,其中HA基因全长1683 bp,编码560个氨基酸;4株NA基因全长1410 bp,编码469个氨基酸,42株缺失3个氨基酸,编码466个氨基酸。BLAST分析结果显示,越南及国内多个省份的毒株与本研究获得的广西毒株HA、NA基因相似性最高,分别为97.62%~99.88%和93.13%~99.79%,宿主源也不尽相同,表现遗传多样性特征。广西毒株之间HA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为93.0%~99.1%和94.6%~99.1%,NA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为83.9%~98.2%和86.1%~98.2%,表明HA基因较NA基因更为保守;与同期的参考毒株相似性高于早期,表明毒株存在持续进化。遗传进化分析结果显示,广西毒株的HA、NA基因属于当前优势流行的G57基因型分支,与疫苗株遗传关系较远。进化速率估算结果显示,HA、NA基因的平均进化速率分别为3.99×10^(-3)和4.59×10^(-3)替换/位点/年,最近共同祖先估算时间(tMRCA)分别为66.77和58.24年,表明HA基因比NA基因进化缓慢。重组分析结果显示,从鸡、鸭及环境中各分离到的毒株HA基因存在重组现象,主要亲本和次要亲本毒株均为人源的A/Beijing/1/2017株和禽源的A/quail/Hainan/250/2012株。【结论】当前H9亚型AIV广西流行毒株HA、NA基因与越南及国内省份的毒株相似性较高,具有遗传多样性特征,进化趋势以G57为优势基因型,与人源流感毒株发生基因重组,为新型流感产生创造条件。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 遗传变异 进化动态
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2株海鸭源H3亚型禽流感病毒全基因组分子特征分析
4
作者 谢守玉 王睿敏 +11 位作者 崔鹏飞 施开创 韦显凯 冯淑萍 龙凤 屈素洁 陆文俊 黄金山 黄凤梅 温新瑞 尹彦文 邓国华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1319-1328,共10页
【目的】了解广西沿海地区水禽H3亚型禽流感病毒的基因组分子特征。【方法】本研究通过RT-PCR一步法分段扩增法,对2020年从广西沿海地区分离到的2株海鸭源H3亚型禽流感病毒A/duck/Guangxi/S11359/2020(H3N1)与A/duck/Guangxi/S11374/202... 【目的】了解广西沿海地区水禽H3亚型禽流感病毒的基因组分子特征。【方法】本研究通过RT-PCR一步法分段扩增法,对2020年从广西沿海地区分离到的2株海鸭源H3亚型禽流感病毒A/duck/Guangxi/S11359/2020(H3N1)与A/duck/Guangxi/S11374/2020(H3N8)进行全基因组测序与进化分析。【结果】2株H3亚型禽流感病毒的HA蛋白裂解位点序列均为340 PEKQTR↓GLFG 349,为低致病性禽流感病毒的分子特征,与受体嗜性关联的第226、228位氨基酸均为Q和T,可能仍主要结合禽类受体;BLAST分析结果显示,本研究H3N1亚型禽流感病毒的M、NP基因及H3N8亚型禽流感病毒的PA基因,与H7亚型禽流感病毒相似性最高,分别为99.5%、98.7%和98.9%,表明H3可能与H7亚型禽流感病毒发生了基因交换;2株H3亚型禽流感病毒与越南、孟加拉国、韩国等周边国家水禽源的H3、H4、H6、H7、H9等亚型相似性较高,可能拥有相同的进化来源;遗传进化分析表明,H3亚型禽流感病毒各基因进化分支均属于欧亚谱系,与水禽源毒株遗传距离较近,犬源、猫源的毒株次之,人源、猪源的毒株较远,但H3N1亚型禽流感病毒的NS基因与日本早期人源流感毒株A/Aichi/2/1968遗传关系最近,可能发生了基因置换。H3N8亚型禽流感病毒的HA基因检测有重组信号,重组的亲本毒株分别为A/duck/Beijing/40/04(相似性为93.1%)和A/canine/Beijing/20121215-34/2012(相似性为97.1%)。【结论】广西沿海地区的2株H3亚型禽流感病毒基因来源复杂,表现出遗传多样性特征。 展开更多
关键词 海鸭 H3亚型禽流感病毒 遗传进化
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广西部分地区鸭圆环病毒感染情况调查 被引量：10
5
作者 屈素洁 粟艳琼 +5 位作者 郑敏 覃勇 莫胜兰 陆文俊 梁媛 严斯刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第11期156-158,共3页
为了解广西鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)感染情况,根据已发表的鸭圆环病毒序列合成了1对PCR引物,利用该引物对采集于百色、柳州和桂林3个市的321份鸭组织样品进行了检测。结果表明,58份样品能扩增出228bp的特异条带,总阳性率为18.0... 为了解广西鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)感染情况,根据已发表的鸭圆环病毒序列合成了1对PCR引物,利用该引物对采集于百色、柳州和桂林3个市的321份鸭组织样品进行了检测。结果表明,58份样品能扩增出228bp的特异条带,总阳性率为18.07%;且3个市均能检出阳性样品,阳性率分别为18%(54/300)、5.6%(1/18)和100%(3/3)。结果证实,广西百色、柳州、桂林地区的鸭群中不同程度地存在鸭圆环病毒感染现象。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 聚合酶链式反应 流行病学调查
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2株H3N8亚型禽流感病毒HA和NA基因遗传变异分析 被引量：5
6
作者 屈素洁 郑敏 +6 位作者 梁媛 莫胜兰 陆文俊 粟艳琼 胡杰 李军 刘棋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第9期41-45,共5页
采用RT-PCR技术扩增了2株H3N8亚型流感毒株A/duck/Guangxi/69/2009和A/chicken/Guangxi/2117/2010的HA和NA基因,并与GenBank中收录的其他毒株序列进行比较分析和遗传进化分析。结果表明,分离株的HA与NA基因全长分别为1 733 bp、1 432 bp... 采用RT-PCR技术扩增了2株H3N8亚型流感毒株A/duck/Guangxi/69/2009和A/chicken/Guangxi/2117/2010的HA和NA基因,并与GenBank中收录的其他毒株序列进行比较分析和遗传进化分析。结果表明,分离株的HA与NA基因全长分别为1 733 bp、1 432 bp。A/duck/Guangxi/69/2009株的HA基因与A/duck/Siberia/100/01株的相似性最高,A/chicken/Guangxi/2117/2010株的HA基因与A/white munia/HongKong/4519/00株的相似性最高;而A/duck/Guangxi/69/2009株的NA基因与A/duck/Eastern China/91/09株的相似性最高,A/chicken/Guangxi/2117/2010株的NA基因与A/aquaticbird/Korea/KN-1/04株的相似性最高。2株H3N8禽流感病毒位于同一分支,同源关系较近。2株H3N8禽流感病毒的HA推导的氨基酸剪切位点序列均为P-E-K-Q-T-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列。 展开更多
关键词 禽流感病毒 HA基因 NA基因 序列分析
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鸡马立克氏病病毒广西株Meq基因的克隆与序列分析 被引量：4
7
作者 屈素洁 邹联斌 +6 位作者 胡杰 粟艳琼 莫胜兰 施开创 尹彦文 李军 张步娴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第1期45-49,共5页
为研究鸡马立克氏病病毒（MDV）广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了3株MDV。参照GenBank中MDV的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR技术对分离毒株的Meq基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株... 为研究鸡马立克氏病病毒（MDV）广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了3株MDV。参照GenBank中MDV的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR技术对分离毒株的Meq基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析。结果显示,Meq基因序列全长为1 020bp,编码一条由339个氨基酸组成的多肽,分离株与国内外MDV参考毒株相比,不同MDV株的Meq基因序列相对较保守,它们之间核苷酸同源性为83.8%~99.9%,氨基酸同源性为88.4%~99.6%。3株MDV分离株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变。3株分离株与国内参考株YL、GXY2关系较近,与参考株RB1B、GA、Md5、648A及疫苗株亲缘关系较远。该研究为中国MDV的流行、遗传变异及防控研究提供了材料。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 MEQ基因 基因克隆 序列分析
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鸡传染性支气管炎病毒广西株N、M基因的克隆与序列分析 被引量：1
8
作者 屈素洁 施开创 +5 位作者 粟艳琼 胡杰 莫胜兰 张步娴 李军 邹联斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3119-3125,共7页
为研究鸡传染性支气管炎病毒（IBV）广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了1株IBV。参照GenBank中IBV的核苷酸序列设计2对引物,利用RT-PCR技术对分离毒株的N、M基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外... 为研究鸡传染性支气管炎病毒（IBV）广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了1株IBV。参照GenBank中IBV的核苷酸序列设计2对引物,利用RT-PCR技术对分离毒株的N、M基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析。结果显示,N基因序列全长为1 230bp,编码409个氨基酸,M基因序列全长为678bp,编码225个氨基酸。与参考毒株相比,分离株的N基因核苷酸序列同源性为87.2%~93.3%,推导的氨基酸序列同源性为90.0%~94.4%;M基因的核苷酸序列同源性为83.6%~91.0%,推导的氨基酸序列同源性为82.7%~92.9%。在遗传进化树中,本试验分离株Guangxi156株与BJ株和LX4株两个参考株位于同一个分支上,亲缘关系较近,而与其他参考株属于不同的分支,亲缘关系较远。结果表明,本试验分离株是一株新的IBV变异株。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 N基因 M基因 基因克隆 序列分析
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猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达及间接ELISA诊断方法的初步建立
9
作者 屈素洁 何苹萍 +3 位作者 秦毅斌 朱芸 陈琼 黄伟坚 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2008年第3期201-205,共5页
根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成3对引物,通过PCR扩增PCV2的3个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到pET-32a载体中,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,表达并纯化了重组蛋白。Western-blot分析表明,重组蛋白可以与PCV2阳性血清反应... 根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成3对引物,通过PCR扩增PCV2的3个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到pET-32a载体中,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,表达并纯化了重组蛋白。Western-blot分析表明,重组蛋白可以与PCV2阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白初步建立了间接酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,经方阵滴定确定最佳包被浓度为0.24μg/mL,血清最佳的稀释度为1∶40。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) ORF2片段 原核表达 间接ELISA方法
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猪圆环病毒2型ORF2基因及片段的原核表达
10
作者 屈素洁 黄伟坚 +3 位作者 冯建远 朱芸 陈琼 谢丽华 《实验动物科学》 2007年第6期89-92,共4页
目的表达猪圆环病毒2型ORF2抗原,为研制猪圆环病毒2型血清学诊断方法以及生物制品生物安全性检验,提供技术支持。方法根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成5对引物,采用PCR方法从全序列重组质粒PCV2-LC中扩增出了ORF2基因和4个不同... 目的表达猪圆环病毒2型ORF2抗原,为研制猪圆环病毒2型血清学诊断方法以及生物制品生物安全性检验,提供技术支持。方法根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成5对引物,采用PCR方法从全序列重组质粒PCV2-LC中扩增出了ORF2基因和4个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到原核表达载体PET-32a上,再分别将各个重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21中,用终浓度1 mmol/LIPTG诱导。结果表达产物以包涵体的形式存在,经Western-blot检测表明,表达的重组蛋白ORF2b、ORF2c、ORF2d能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。表达的重组蛋白为ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF2基因 原核表达
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PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：17
11
作者 施开创 王睿敏 +4 位作者 黎宗强 谢守玉 尹彦文 陆文俊 屈素洁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期595-600,共6页
为建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)的方法,本研究分别针对PEDVN基因、TGEVM基因、PDCoVM基因和PRoVVP6基因设计特异性引物和TaqMan探针,经过优化反应条件,... 为建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)的方法,本研究分别针对PEDVN基因、TGEVM基因、PDCoVM基因和PRoVVP6基因设计特异性引物和TaqMan探针,经过优化反应条件,建立了同时检测4种病毒的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法仅特异性扩增PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV,与猪其它主要病毒无交叉反应,特异性较强;对PEDV、TGEV、PDCoV和PRoV的质粒标准品的最低检出限分别为2.06×10^2拷贝/μL、2.06×10^2拷贝/μL、2.06×10^1拷贝/μL、2.06×10^3拷贝/μL,具有较高敏感性;组内与组间变异系数均小于1.1%,具有良好的重复性。应用该方法和普通多重RT-PCR检测临床采集的243份腹泻病料样品,两者的符合率为96.71%。本研究建立的方法为临床PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的鉴别检测及流行病学调查提供了一种快速、特异、敏感、高效的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪德尔塔冠状病毒 猪轮状病毒 荧光定量RT-PCR
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2015—2017年广西鸡源沙门氏菌耐药性与致病性的相关性分析 被引量：11
12
作者 张珍 施开创 +4 位作者 王孝德 黎宗强 尹彦文 屈素洁 陆文俊 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2350-2358,共9页
【目的】明确鸡源致病性沙门氏菌耐药表型与致病性的相关性,为有效防控鸡沙门氏菌病提供科学依据。【方法】采用玻片凝集试验对55株鸡源沙门氏菌广西分离株进行血清型鉴定,以纸片扩散(K-B)法和PCR分别测定其耐药表型及耐药基因,通过小... 【目的】明确鸡源致病性沙门氏菌耐药表型与致病性的相关性,为有效防控鸡沙门氏菌病提供科学依据。【方法】采用玻片凝集试验对55株鸡源沙门氏菌广西分离株进行血清型鉴定,以纸片扩散(K-B)法和PCR分别测定其耐药表型及耐药基因,通过小鼠攻毒试验检测其致病性,并分析鸡源沙门氏菌广西分离株耐药表型与致病性的相关性。【结果】55株沙门氏菌广西分离株以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,对青霉素G、阿莫西林、苯唑西林、头孢噻吩、红霉素和利福平的耐药率均达100.00%,而对庆大霉素和大观霉素较敏感(耐药率在10.00%以下)。55株沙门氏菌广西分离株中有1株(占1.82%)携带7种耐药基因、6株(占10.91%)携带6种耐药基因、20株(占36.36%)携带5种耐药基因、12株(占21.82%)携带4种耐药基因、13株(占23.64%)携带3种耐药基因、3株(占5.45%)携带2种耐药基因;16种耐药基因中,blaTEM、tetX、sul3和aadA1基因检出率较高,qepA、blaCMY和tetB基因检出率较低,而qnrA、qnrB、Aph(3)-IIa、blaPSE和aadA2基因等未被检出。55株沙门氏菌广西分离株对昆明小白鼠均具有致病性,致死率为20%~100%;随机选取10株分离株对昆明小白鼠的半数致死量(LD50)为4.00×107~3.18×108 CFU/mL。沙门氏菌分离株耐药种类数量与LD50对数值的线性回归方程为y=-0.086x+8.971(R2=0.9329),耐药基因数量与LD50对数值的线性回归方程为y=-0.148x+8.673(R2=0.5748),即沙门氏菌的耐药性与其致病性呈正相关。【结论】2015—2017年从广西发病鸡分离获得的致病性沙门氏菌以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,普遍存在耐药性,且多重耐药现象严重。鸡源致病性沙门氏菌的耐药表型与其致病性间呈正相关,因此,生产上要加强临床用药管理,加大细菌耐药监测与防范。 展开更多
关键词 鸡 沙门氏菌 耐药表型 耐药基因 致病性 相关性
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同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：11
13
作者 施开创 莫胜兰 +3 位作者 张步娴 屈素洁 赵日浪 钟诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期810-814,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 欧洲型病毒株 多重RT.PCR 检测方法
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猪脑心肌炎病毒SYBR GreenⅠ real-time PCR检测方法的建立 被引量：7
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作者 施开创 陈进喜 +5 位作者 屈素洁 许瑞胜 熊毅 刘棋 陈汉忠 李刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期135-139,共5页
针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;... 针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×101copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%。应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性。表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 猪 荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ
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广西部分地区猪群主要疫病免疫抗体监测和免疫效果分析 被引量：14
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作者 韦显凯 邹联斌 +6 位作者 屈素洁 梁媛 赵国明 何贻坚 莫胜兰 郑列丰 郭建刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期161-163,共3页
从广西5个地市33家养殖场随机采集免疫过猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪瘟(CSF)、猪伪狂犬病(PR)疫苗的血清样品393份,使用免疫胶体金方法对样品的抗体水平进行检测。结果显示,不同养殖规模的猪场抗体阳性率总体较高的是猪瘟,达75.06%;... 从广西5个地市33家养殖场随机采集免疫过猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪瘟(CSF)、猪伪狂犬病(PR)疫苗的血清样品393份,使用免疫胶体金方法对样品的抗体水平进行检测。结果显示,不同养殖规模的猪场抗体阳性率总体较高的是猪瘟,达75.06%;其次是猪伪狂犬病,为71.25%;而猪繁殖与呼吸综合征抗体最低,仅为42.24%。各种病原抗体在不同规模的猪场有较大的差别,规模猪场的猪群某些疫病的抗体未必比散养猪群高。通过对不同类型的疫苗所产生的抗体水平进行比较,结果发现,使用猪繁殖与呼吸综合征灭活苗和弱毒苗、猪瘟脾淋苗和细胞苗、猪伪狂犬病国产苗和进口苗免疫所产生的抗体水平没有明显差异。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 猪瘟 猪伪狂犬病 抗体监测
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黏菌素耐药基因mcr-1 TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：8
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作者 施开创 尹彦文 +3 位作者 温丽霞 屈素洁 王海清 胡杰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1447-1452,共6页
【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料... 【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料用量、退火温度等反应条件,建立针对mcr-1基因的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】Taq Man-MGB荧光定量PCR最佳反应体系20.00μL:Premix Ex Taq^(TM)10.00μL,Rox参比染料(50×)0.25μL,引物MCR-1F/MCR-1R(10μmol/L)各0.50μL,MCR-1-P探针(10μmol/L)0.50μL,重组质粒pMCR-1(模板)2.00μL,灭菌双蒸水6.25μL。扩增程序:95℃预变性20 s;95℃10 s,60℃20 s,进行40个循环。该检测方法能特异性扩增出mcr-1基因,其检测敏感性为2.85拷贝/μL,是常规PCR的100倍,组内和组间重复性试验的变异系数为0.37%~1.18%,均小于1.20%。采用建立的Taq Man-MGB荧光定量PCR对82株广西鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果未发现有携带mcr-1基因的菌株。【结论】针对mcr-1基因建立的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于临床筛查mcr-1基因,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。 展开更多
关键词 黏菌素 mcr-1基因 TAQMAN-MGB探针 荧光定量PCR
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2018年广西重要猪源病毒性疫病流行病学调查 被引量：13
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作者 施开创 尹彦文 +7 位作者 王孝德 谢守玉 石永胜 刘宏梅 陆文俊 屈素洁 冯淑萍 粟艳琼 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期174-181,共8页
为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病... 为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪圆环病毒3型(PCV3),应用多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)。结果显示,所检测的694份组织样品中,CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV1、PCV2、PCV3的阳性率分别为11.10%、18.88%、7.20%、5.19%、2.45%、67.00%和5.76%;2种病原混合感染率为41.21%,3种病原混合感染率为4.32%,其中PRRSV和PCV2混合感染率最高。所检测的792份肠内容物及拭子腹泻样品中,PEDV、PDCoV、TGEV、PRoV的阳性率分别为9.72%、5.81%、1.77%和6.31%;2种病原混合感染率为5.30%,其中PEDV和PRoV混合感染率最高。结果表明,当前多种重要病毒性疫病仍在广西猪群发生和流行,并且多重感染普遍存在,应进一步加强监测和防控。 展开更多
关键词 猪 病毒性疫病 流行病学调查 监测
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广西鸭源H6N6亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析 被引量：8
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作者 莫胜兰 郑敏 +9 位作者 陈义祥 胡杰 屈素洁 梁媛 粟艳琼 陆文俊 苏凯 陈玉华 李军 刘棋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第12期11-15,共5页
为了明确H6亚型禽流感病毒在广西地区的流行情况,广西自治区动物疫病预防控制中心从健康家鸭体内分离鉴定了一株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/GX/038/2009(H6N6)(Dk/GX/038/09),对其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进行了克隆和序列分析,... 为了明确H6亚型禽流感病毒在广西地区的流行情况,广西自治区动物疫病预防控制中心从健康家鸭体内分离鉴定了一株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/GX/038/2009(H6N6)(Dk/GX/038/09),对其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进行了克隆和序列分析,并绘制了基因遗传进化树。结果显示,Dk/GX/038/09的HA和NA基因核苷酸与2005年广东鸭源H6N6亚型禽流感病毒的同源性最高,达97%;但其NA基因核苷酸与江苏2009年鸭源H6N6毒株同源性则较低,只有88.6%;Dk/GX/038/09与2005年从广东分离的多株鸭源H6N6禽流感病毒位于同一分支,具有较近的亲缘关系,而与2009年江苏分离H6N6鸭源禽流感病毒的亲缘关系相对较远。表明两广地区流行的H6N6毒株可能来自同一祖先病毒,这也许与两广地区禽类交易频繁相关;而与江苏H6N6毒株相应基因差异较大,表明当前我国流行的鸭源H6N6毒株存在一定的地域差异和明显的遗传多样性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 鸭 H6N6亚型 血凝素 神经氨酸酶 序列分析
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不同免疫方式对仔猪免疫高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪口蹄疫三种疫苗抗体水平的影响 被引量：8
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作者 胡杰 张步娴 +5 位作者 屈素洁 莫胜兰 粟艳琼 陆文俊 施开创 李军 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期61-67,共7页
采用不同的免疫方式,对38头36~38日龄健康仔猪进行高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪口蹄疫3种疫苗进行免疫,分别于免疫前（0 d）和免疫后15、30、45、60、90 d采血进行这3种疫病抗体检测。结果发现效果最好的方法是先免疫猪瘟和口... 采用不同的免疫方式,对38头36~38日龄健康仔猪进行高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪口蹄疫3种疫苗进行免疫,分别于免疫前（0 d）和免疫后15、30、45、60、90 d采血进行这3种疫病抗体检测。结果发现效果最好的方法是先免疫猪瘟和口蹄疫疫苗14 d后再免疫高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗;其次是猪瘟疫苗和高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗分别释稀后混合为1针,口蹄疫疫苗另作1针同时分点注射;免疫效果最差的是高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪口蹄疫3种疫苗同时分3点注射。 展开更多
关键词 免疫程序 高致病性猪繁殖与呼吸综合征 猪瘟 猪口蹄疫 抗体
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9株猪圆环病毒Ⅱ型流行毒株全基因组克隆及序列分析 被引量：5
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作者 尹业师 黄伟坚 +8 位作者 屈素洁 谢丽华 刘海鹏 罗廷荣 陆芹章 余克伦 刘芳 温荣辉 廖素环 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2007年第2期101-105,共5页
参考GenBank上发表的猪圆环病毒Ⅱ型（porcine circovirus2，PCV2）全基因组序列，设计一对引物，通过反向PCR技术扩增出9株PCV2流行株的全基因，并进行了序列测定与分析，结果表明：9株PCV2的基因组全长为1768bp或1767bp，同源性比较... 参考GenBank上发表的猪圆环病毒Ⅱ型（porcine circovirus2，PCV2）全基因组序列，设计一对引物，通过反向PCR技术扩增出9株PCV2流行株的全基因，并进行了序列测定与分析，结果表明：9株PCV2的基因组全长为1768bp或1767bp，同源性比较发现，本研究的9株PCV2之间的核苷酸同源性为95．6％～100％，与GenBank上已发表的PCV2分离株之间的同源性为95．1％～99．8％，与法国和新西兰代表株的亲缘关系较近，与美国、加拿大和澳大利亚代表株的亲缘关系较远。所得9株PCV2的ORF2核苷酸及其所推导的氨基酸序列同源性分别为93．1％～100％和91．8％～99．6％，存在较大的变异。 展开更多
关键词 猪圆环病毒Ⅱ型 全基因组 同源性 变异
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