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F81细胞无血清悬浮驯化后培养猫泛白细胞减少症病毒的研究
1
作者 张久鑫 邵宝顺 +6 位作者 朱辉 贾浩苒 梁琳 汤新明 崔尚金 梁瑞英 王龙涛 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期48-53,共6页
为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^... 为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^(6)cells/mL时,培养48 h后细胞密度可达到7.02×10^(6)cells/mL。对培养猫泛白细胞减少症病毒工艺进行摸索,确定最佳接毒工艺为同步接毒法,初始接毒细胞密度为1×10^(6)cells/mL、MOI为3.5×10^(-2),培养72 h后收毒,病毒滴度可达到10^(7.25)TCID_(50)/0.1 mL。该方法使用同源细胞系且未添加动物血清,为猫泛白细胞减少症生物制品生产降低了下游生产纯化难度,同时降低了生产成本,可显著提高产品核心竞争力。研究结果可为其他猫用生物制品相关研究提供参考。 展开更多
关键词 F81细胞 细胞驯化 无血清悬浮培养 猫泛白细胞减少症病毒
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猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用 被引量：23
2
作者 崔尚金 姜建宏 +2 位作者 周艳君 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期213-217,共5页
用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA)。特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性。与其他方... 用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA)。特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性。与其他方法对比检测证实了其敏感性。生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性。猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法。 展开更多
关键词 猪繁殖呼吸综合征 胶体金免疫层析法 ELISA 抗体检测 猪繁殖呼吸综合征病毒
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猪断奶后多系统衰竭综合征诊断方法的系列研究 被引量：14
3
作者 崔尚金 全艳平 +6 位作者 李曦 蔡阳 符芳 胡守萍 付德霞 吴东来 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期146-149,共4页
本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断... 本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断奶后多系统衰竭综合征的诊断。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 病毒分离 聚合酶链反应 免疫组化 酶联免疫吸附试验
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猪断奶后多系统衰竭综合征诊断方法及标准的建立 被引量：13
4
作者 崔尚金 李曦 +2 位作者 符芳 曲连东 童光志 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第11期68-72,共5页
关键词 猪 断奶多系统衰竭综合征 症状 病理变化 诊断 PCR 间接免疫荧光试验 间接酶联免疫吸附试验 免疫组织化学试验
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猪圆环病毒间接免疫荧光方法的建立 被引量：27
5
作者 崔尚金 全滟平 +3 位作者 李曦 符芳 姜艳玲 张莉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期63-66,共4页
将接种PCV2且经多次传代的PK-15带毒细胞分散到96孔细胞培养板上,制成抗原诊断板,应用间接免疫荧光技术检测血清中PCV2的抗体。通过对各种反应物的工作浓度与作用时间的优化,建立了PCV2抗体的间接免疫荧光检测技术,可用于PCV2抗体水平... 将接种PCV2且经多次传代的PK-15带毒细胞分散到96孔细胞培养板上,制成抗原诊断板,应用间接免疫荧光技术检测血清中PCV2的抗体。通过对各种反应物的工作浓度与作用时间的优化,建立了PCV2抗体的间接免疫荧光检测技术,可用于PCV2抗体水平的监测,为今后的猪圆环病毒疫苗抗体检测的研究提供了检测方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 间接免疫荧光技术
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人与动物流行性感冒病毒 被引量：4
6
作者 崔尚金 宋晓华 +2 位作者 王凯波 于康震 刘尚高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期185-188,共4页
关键词 流感病毒 亚型 抗原性 动物 宿主范围 编码 流感 病毒病 流行性感冒 聚合酶蛋白 宿主蛋白 血凝素 亚单位疫苗
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禽流感RT-PCR诊断法的建立 被引量：54
7
作者 崔尚金 陈化兰 +3 位作者 唐秀英 邓国华 田国斌 于康震 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第2期105-107,共3页
根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物，并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ，建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－... 根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物，并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ，建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测，并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明，ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性，ＳＰＦ感染鸡粪便８７份，ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性，样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份，电镜检测了２３份样品，仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释，可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天，而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性，且节约时间（只需８小时左右）。 展开更多
关键词 禽 RT-PCR 诊断 流行性感冒
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猪圆环病毒多重PCR诊断方法的建立 被引量：15
8
作者 崔尚金 全滟平 +3 位作者 李曦 符芳 姜艳玲 张莉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期581-584,共4页
根据GenBank中20株猪圆环病毒(PCV2)核苷酸序列设计两对引物,建立的检测猪圆环病毒的多重PCR方法,其中引物P1、P2为PCV特异性,扩增938bp片段。P3、P4为PCV2特异性扩增490bp,因此本方法不仅可以扩增PCV片段,还可以同时区分PCV1和PCV2。... 根据GenBank中20株猪圆环病毒(PCV2)核苷酸序列设计两对引物,建立的检测猪圆环病毒的多重PCR方法,其中引物P1、P2为PCV特异性,扩增938bp片段。P3、P4为PCV2特异性扩增490bp,因此本方法不仅可以扩增PCV片段,还可以同时区分PCV1和PCV2。该方法具有良好的特异性和敏感性,为猪圆环病毒的临床诊断与流行病学调查等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 多重PCR
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中国H3亚型流感病毒生态学与分子进化的研究 被引量：5
9
作者 崔尚金 李建伟 +8 位作者 金红 李海燕 唐秀英 于康震 王秀荣 刘尚高 Y Guan K F Shortridge M Deries 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期144-146,共3页
病毒生态学与分子进化是一门新兴的学科 ,研究病毒在各种环境中的关系 ,可以为今后病毒的研究与防治奠定基础。本研究首次详细对我国 14株鸭、鸡等禽流感和马、猪等动物的流感病毒的生态学与分子进化进行了分析研究 ,初步摸清了这些病... 病毒生态学与分子进化是一门新兴的学科 ,研究病毒在各种环境中的关系 ,可以为今后病毒的研究与防治奠定基础。本研究首次详细对我国 14株鸭、鸡等禽流感和马、猪等动物的流感病毒的生态学与分子进化进行了分析研究 ,初步摸清了这些病毒在我国的流行与进化情况 ,为今后流感病毒疫苗的应用奠定了理论基础 。 展开更多
关键词 中国 H3亚型 流感病毒 生态学 分子进化
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检测猪圆环病毒DNA的竞争定量PCR方法的建立及初步应用 被引量：21
10
作者 崔尚金 蔡阳 陈欣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期347-351,共5页
建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法.应用PCR扩增PCV-2 ORF2上490 bp片段P3P4,克隆到pMD 18-T载体获得目标模板.构建含692 bp的c-P3P4 DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区.以定量的竞争模板同一系列稀释... 建立了定量检测猪圆环病毒DNA的竞争PCR方法.应用PCR扩增PCV-2 ORF2上490 bp片段P3P4,克隆到pMD 18-T载体获得目标模板.构建含692 bp的c-P3P4 DNA片段的竞争模板,其携带与目标DNA和靶DNA相同的引物结合区.以定量的竞争模板同一系列稀释的竞争模板进行竞争PCR扩增,以产物的荧光强度(IOD)绘制标准曲线,结果当反应体系中起始模板的量为1.0×107 cop/μL,循环次数小于或等于30时,原始模板数以指数增长.由此确定目标模板和竞争模板的最适工作浓度并用该方法检测感染细胞内的PCV-2基因组的拷贝数和临床样品中的PCV-2 DNA含量,结果发现临床样品中的PCV-2 DNA含量达到一定程度(肺中1.0145×108 copies/mL,血中0.8×107 copies/mL,淋巴中9.698×108 copies/mL),猪表现临床症状,而病毒在感染细胞内的复制在80 h基因的拷贝数达到最高,这为今后的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 检测技术 猪圆环病毒 DNA 竞争定量 PCR方法
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H3亚型禽流感病毒分离株与变异株的生物学特性 被引量：5
11
作者 崔尚金 于康震 +4 位作者 唐秀英 刘明 田国彬 李建伟 刘尚高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期85-89,共5页
本研究对分离到的Ｈ３Ｎ８禽流感病毒株（分离株Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９８，以下简称Ｊ１株）和传代过程中发生变异的变异株（Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９９，以下简称Ｊ２株）进行了生物学和病理学特性的初步研究，发现在... 本研究对分离到的Ｈ３Ｎ８禽流感病毒株（分离株Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９８，以下简称Ｊ１株）和传代过程中发生变异的变异株（Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９９，以下简称Ｊ２株）进行了生物学和病理学特性的初步研究，发现在相同的时间内，Ｊ１株病毒致死鸡胚数量明显高于Ｊ２株病毒，病毒ＨＡ的滴度也明显高于Ｊ２；Ｊ１株的ＩＰＶＩ为１．４４，而Ｊ２为０．６４；毒株的致病性试验与ＳＰＦ感染鸡的器官变化表明Ｊ１组的病理学变化较Ｊ２组明显，且主要的嗜器官为肺、肝、法氏囊、胸腺、脾等主要的免疫器官；本研究还对ＳＰＦ感染鸡的病变器官进行了病原学检测、病理组织检测和电镜观察。结果表明两者存在较明显的差异。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N8 生物学特征
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非洲猪瘟病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：33
12
作者 崔尚金 胡泉博 刘业兵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期807-809,共3页
为将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测,本研究建立了ASFV的高效纳米PCR检测方法,该方法采用纳米金颗粒作为热导介子,提高了PCR反应效率,采用该方法同时检测ASFV、大肠杆菌、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与... 为将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测,本研究建立了ASFV的高效纳米PCR检测方法,该方法采用纳米金颗粒作为热导介子,提高了PCR反应效率,采用该方法同时检测ASFV、大肠杆菌、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪捷申病毒、猪脑心肌炎病毒等,结果只有ASFV能够扩增出552 bp的目的片段。敏感性试验表明纳米PCR检测技术是常规PCR检测技术敏感性的1 000倍以上,最低核酸拷贝数检出量可以达到10个拷贝。采用该方法对黑龙江、吉林和河南3个省份的8个地区临床送检的69份样品进行检测,检测结果显示均为阴性,在以上3个地区均未发现ASFV感染情况。 展开更多
关键词 纳米PCR 非洲猪瘟病毒 P54基因
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东北地区新城疫流行株的分子生物学特性调查 被引量：7
13
作者 崔尚金 刘文斌 +6 位作者 李建伟 王凯波 李秀云 刘果 潘家鸣 张寰波 董玉光 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第12期26-31,共6页
从东北地区发生新城疫 (ND)的病鸡、病鸽和产蛋下降鸡分离到 19株NDV ,对其融合蛋白 (F)基因 5 32bp或 2 80bp片段进行了克隆、测序 (在GenBank中的登录号为AY2 0 86 80～AY2 0 86 98) ,并对各株的F基因序列进行了比较。结果 ,各毒株之... 从东北地区发生新城疫 (ND)的病鸡、病鸽和产蛋下降鸡分离到 19株NDV ,对其融合蛋白 (F)基因 5 32bp或 2 80bp片段进行了克隆、测序 (在GenBank中的登录号为AY2 0 86 80～AY2 0 86 98) ,并对各株的F基因序列进行了比较。结果 ,各毒株之间的核苷酸同源性为 83.1%～10 0 % ,氨基酸同源性为 85 .5 %～ 10 0 % ;系统发育进化树分析表明 ,其中 2株与疫苗株V4同属基因Ⅰ型 ,为弱毒株 ;其余 17株为强毒株 ,其中 2株为基因Ⅵ型 ,其余为基因Ⅶ型。表明东北地区目前由 3种基因型的NDV毒株 (Ⅰ型、Ⅵ型、Ⅶ型 )所引发 ,并以基因Ⅶ型为主。另外 ,对其中的代表毒株APMV1/chicken/China/JL 11/ 0 2进行了免疫学试验 ,结果显示 ,LaSota疫苗的免疫保护效果不理想 ,可能是LaSota疫苗免疫鸡群发生ND的主要原因。 展开更多
关键词 东北地区 鸡 新城疫 流行株 分子生物学
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禽流感免疫与流行的生物数学模型初析 被引量：3
14
作者 崔尚金 于康震 毕可东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第1期73-73,共1页
关键词 禽流感病毒 免疫 流行 生物数学模型
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应用单克隆抗体进行兔轮状病毒的抗原分析 被引量：4
15
作者 崔尚金 王云峰 +1 位作者 王翠兰 王西川 《中国兽医科技》 CSCD 1997年第5期24-25,共2页
应用单克隆抗体进行兔轮状病毒的抗原分析崔尚金王云峰王翠兰王西川（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）兔轮状病毒是引起幼兔腹泻的重要病原之一，其研究起步较晚，但自Ｓａｔｏ分离到该病毒后取得了较大进展。国内徐春厚... 应用单克隆抗体进行兔轮状病毒的抗原分析崔尚金王云峰王翠兰王西川（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所１５０００１）兔轮状病毒是引起幼兔腹泻的重要病原之一，其研究起步较晚，但自Ｓａｔｏ分离到该病毒后取得了较大进展。国内徐春厚作了初步研究后中国农业科学院哈尔滨... 展开更多
关键词 单克隆抗体 兔病 轮状病毒 抗原分析
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禽轮状病毒的分离鉴定及部分特性研究 被引量：2
16
作者 崔尚金 王云峰 +1 位作者 邓国华 于康震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第1期1-2,共2页
从北京某自然腹泻的鸡场中成功地分离到一株禽轮状病毒,并经鸡胚单层肝细胞和MA104 细胞进行了传代培养,对其生物学特性作了部分研究,从而为我国禽轮状病毒的毒株鉴定。
关键词 禽轮状病毒 分离 鉴定
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禽流感发生的流行病学分析 被引量：2
17
作者 崔尚金 李曦 童光志 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第4期26-29,共4页
关键词 禽流感 流行病学 免疫 环境因素 养殖方式 主动监测 预警预报
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猪细小病毒Z株NS部分基因的扩增及序列分析 被引量：1
18
作者 崔尚金 符芳 +2 位作者 宋波 李媛 韩孝成 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期19-22,共4页
从猪细小病毒Z株提取基因组DNA ,利用PCR扩增部分基因 ,并对该扩增片段进行测序与分析。结果表明 ,扩增的NS基因长 330bp ,编码 10 9个氨基酸。氨基酸序列中含有猪细小病毒的重要保守序列 ,并有 1个潜在的糖基化位点NFSN。Z株NS基因与... 从猪细小病毒Z株提取基因组DNA ,利用PCR扩增部分基因 ,并对该扩增片段进行测序与分析。结果表明 ,扩增的NS基因长 330bp ,编码 10 9个氨基酸。氨基酸序列中含有猪细小病毒的重要保守序列 ,并有 1个潜在的糖基化位点NFSN。Z株NS基因与其他猪细小病毒Kresse、NADL2 2、NADL2 1株的核苷酸同源性分别为 99%、98%、98% ,氨基酸同源性均为 99%。 展开更多
关键词 猪细小病毒Z株 NS基因 基因扩增 序列分析 PCR 同源性 疫苗株 流行株
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反义技术研究简述 被引量：1
19
作者 崔尚金 宋晓华 +1 位作者 于康震 刘尚高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第2期159-160,共2页
关键词 反义技术 抗病毒制剂 抗病转基因育种 畜禽疾病
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单抗-ELISA一步法检测兔粪样中的轮状病毒 被引量：2
20
作者 崔尚金 王云峰 +1 位作者 王翠兰 王西川 《中国畜禽传染病》 CSCD 1997年第3期15-18,共4页
用单抗２Ｂ４包被ＥＬＩＳＡ微孔反应板，将处理后的粪样和酶标兔抗ＬａＲＶＩｇＧ同时加入包被孔内孵育，置微型振荡器上振摇，建立了检测粪样中兔轮状病毒（ＬａＲＶ）抗原的单抗－ＥＬＩＳＡ一步法快速诊断技术，与常规ＥＬＳＩＡ、... 用单抗２Ｂ４包被ＥＬＩＳＡ微孔反应板，将处理后的粪样和酶标兔抗ＬａＲＶＩｇＧ同时加入包被孔内孵育，置微型振荡器上振摇，建立了检测粪样中兔轮状病毒（ＬａＲＶ）抗原的单抗－ＥＬＩＳＡ一步法快速诊断技术，与常规ＥＬＳＩＡ、病毒分离培养、电镜、荧光抗体等作了实验室和临床应用比较，结果证明单抗－ＥＬＩＳＡ一步法敏感、特异、快速、简便。 展开更多
关键词 兔病 腹泻 轮状病毒 ELISA
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