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miR-9-5P靶向CDH1、CTNNA1和ITGA6对脉络膜黑色素瘤细胞功能的影响 被引量：2
1
作者 应曼曼 张晓楠 +1 位作者 刘然 宁宏 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期893-898,共6页
目的探讨miR-9-5P对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡及迁移、侵袭的调控作用,并探寻其发挥作用的靶基因CDH1,CTNNA1和ITGA6。方法体外给予脉络膜黑色素瘤细胞转染阴性对照(NC)和miR-9-5p mimics。采用RTCA实时增殖实验检测细胞的增殖情况;... 目的探讨miR-9-5P对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡及迁移、侵袭的调控作用,并探寻其发挥作用的靶基因CDH1,CTNNA1和ITGA6。方法体外给予脉络膜黑色素瘤细胞转染阴性对照(NC)和miR-9-5p mimics。采用RTCA实时增殖实验检测细胞的增殖情况;EDU实验进一步检测细胞的增殖变化;流式细胞技术检测细胞的凋亡变化;Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化情况;Targetscan生物信息学网站分析预测miR-9-5P的靶基因,并通过GO分类和KEGG富集分析找到与迁移和侵袭相关靶基因;Western blotting检测CDH1蛋白表达情况。结果RTCA实时增殖实验结果显示,miR-9-5p能够抑制脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B(t=6.925,P<0.05)及MUM-2C(t=4.762,P<0.05)的增殖;EDU实验结果显示,miR-9-5p能够抑制脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B(t=4.779,P<0.05)和MUM-2C(t=4.514,P<0.05)的增殖;流式细胞检测结果表明,miR-9-5p能够促进脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B(t=7.385,P<0.05)和MUM-2C(t=4.893,P<0.05)的凋亡;Transwell实验结果显示,miR-9-5p能够抑制细胞的迁移和侵袭;生物信息学预测及分析得出与细胞迁移侵袭相关的3个miR-9-5p的靶基因CDH1,CTNNA1和ITGA6;Western blotting证明CDH1是miR-9-5p的靶基因。结论miR-9-5p能抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,促进脉络膜黑色素瘤细胞的凋亡,并通过调节CDH1,CTNNA1和ITGA6表达发挥调控作用。 展开更多
关键词 脉络膜黑色素瘤 miR-9-5p CDH1 CTNNA1 ITGA6
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miR-15b-5p靶向CDK4抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖 被引量：5
2
作者 张晓楠 冯浩 +3 位作者 白雪 应曼曼 孙胜男 宁宏 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期230-235,共6页
目的探讨miR-15b-5p通过靶向抑制细胞周期素依赖性激酶4 (CDK4)的表达进而发挥负向调节脉络膜黑色素瘤细胞增殖的作用。方法使用荧光素酶报告分析检测miR-15b-5p与CDK4结合情况。体外培养人眼侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系MUM-2B,分别转染... 目的探讨miR-15b-5p通过靶向抑制细胞周期素依赖性激酶4 (CDK4)的表达进而发挥负向调节脉络膜黑色素瘤细胞增殖的作用。方法使用荧光素酶报告分析检测miR-15b-5p与CDK4结合情况。体外培养人眼侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系MUM-2B,分别转染negative control RNA、miR-15b-5p mimics、inhibitor nc RNA和miR-15b-5p inhibitor;采用实时定量PCR检测转染后miR-15b-5p的表达水平;采用Western blotting检测4组细胞中CDK4蛋白的表达量;采用CCK8检测4组细胞的增殖能力;采用流式细胞术检测4组细胞周期情况。结果荧光素酶报告基因分析验证miR-15b-5p能够与CDK4 m RNA 3’UTR结合。与阴性对照组相比,mimics组miR-15b-5p表达显著增加(t=25.01,P <0.000 1),CDK4的蛋白表达水平降低,细胞增殖能力降低,细胞G1期比例增高。而与inhibitor nc组相比,inhibitor组miR-15b-5p表达减少,CDK4表达水平升高,细胞增殖能力增强,细胞G1期比例降低。结论miR-15b-5p能够靶向抑制CDK4的表达,造成肿瘤细胞发生G1期阻滞,从而有效抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖。 展开更多
关键词 脉络膜黑色素瘤 细胞周期素依赖性激酶4 miR-15b-5p
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miR-147a靶向MCM3抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭 被引量：2
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作者 刘然 应曼曼 +1 位作者 张晓楠 宁宏 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第12期2024-2029,共6页
目的:研究miR-147a对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探究其作用机制。方法:采用脂质体转染人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞,设置miR-NC、miR-147a mimics、inhibitor-NC、miR-147a inhibitor四组。采用EDU染色法检测细胞增殖;... 目的:研究miR-147a对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探究其作用机制。方法:采用脂质体转染人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞,设置miR-NC、miR-147a mimics、inhibitor-NC、miR-147a inhibitor四组。采用EDU染色法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭;Targetscan生物信息学网站预测分析miR-147a下游靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-147a是否靶向结合MCM3 mRNA 3'UTR区;蛋白质印迹法(Western Blot)检测靶基因MCM3蛋白表达。结果:过表达miR-147a可显著降低MUM-2B细胞的增殖数、迁移数和侵袭数,相反,敲减miR-147a提高细胞增殖数、迁移数和侵袭数。miR-147a直接靶向并负向调控MCM3蛋白表达。沉默MCM3可抑制MUM-2B细胞增殖、迁移和侵袭。结论:miR-147a通过直接靶向MCM3抑制脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-147a/MCM3轴可能是治疗脉络膜黑色素瘤的新靶标。 展开更多
关键词 miR-147a MCM3 脉络膜黑色素瘤 细胞增殖 迁移 侵袭
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