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七鳃鳗口腔腺重组蛋白rLj-RGD3对人肝癌HepG2细胞活性的影响 被引量：2
1
作者 张丕桥 时春风 +2 位作者 金阳 王继红 李庆伟 《辽宁师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第2期236-241,共6页
七鳃鳗口腔腺含有RGD功能基因,为了确认其表达蛋白在抑制肿瘤方面的功能,在前期获得带有组氨酸标签的分子量为14.5kD的基因重组蛋白rLj-RGD3基础上,研究了不同浓度rLj-RGD3对HepG2细胞的增殖、凋亡、黏附、迁移、侵润的影响.结果显示:rL... 七鳃鳗口腔腺含有RGD功能基因,为了确认其表达蛋白在抑制肿瘤方面的功能,在前期获得带有组氨酸标签的分子量为14.5kD的基因重组蛋白rLj-RGD3基础上,研究了不同浓度rLj-RGD3对HepG2细胞的增殖、凋亡、黏附、迁移、侵润的影响.结果显示:rLj-RGD3能显著抑制HepG2细胞的增殖,IC50为3.8μmol/L,诱导HepG2细胞发生凋亡,有效抑制HepG2细胞黏附玻蛋白(VN),抑制HepG2细胞的迁移,且抑制率达58%,明显抑制以bFGF为趋化剂的HepG2细胞穿透Matrigel的侵润行为.以上研究表明,rLj-RGD3具有典型的RGD毒素蛋白抑制肿瘤细胞的功能,能够应用于抗肿瘤基因工程药物开发,具有重要的应用意义. 展开更多
关键词 七鳃鳗 RGD 整合素 基因重组 抗肿瘤
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实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系 被引量：7
2
作者 曹际娟 徐君怡 +3 位作者 曹冬梅 张丕桥 栾凤侠 刘洋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期156-159,共4页
目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他... 目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他多种转基因产品和非转基因小麦为对照进行特异性实验,以B73-6-1样品模拟制备10个含量梯度的添加样品进行灵敏度实验。结果:本研究设计的引物和探针具有很好的品系鉴定特异性,检测灵敏度可达到0.01%(m/m)。结论:该方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确地鉴定转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系。 展开更多
关键词 转基因小麦 B73-6-1 B72-8-11b B102-1-2 品系鉴定 实时荧光聚合酶链式反应
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基因重组蛋白L243诱导表达包涵体的变性、复性与纯化 被引量：13
3
作者 麻晓庆 王继红 +3 位作者 韩晓曦 褚丹 张丕桥 李庆伟 《吉林医药学院学报》 2007年第1期1-3,共3页
目的对来自于日本七鳃鳗的基因重组蛋白L243包涵体进行变性、复性与纯化,以获得成分均一的活性蛋白。方法以6mol/L尿素为变性剂,以0.1mol/L氧化型谷胱甘肽及0.9mol/L还原型谷胱甘肽为复性剂,对构建于pET23b的日本七鳃鳗L243基因在大肠杆... 目的对来自于日本七鳃鳗的基因重组蛋白L243包涵体进行变性、复性与纯化,以获得成分均一的活性蛋白。方法以6mol/L尿素为变性剂,以0.1mol/L氧化型谷胱甘肽及0.9mol/L还原型谷胱甘肽为复性剂,对构建于pET23b的日本七鳃鳗L243基因在大肠杆菌Rosetta中表达的包涵体进行了的变性、复性与组氨酸亲和层析纯化。结果经变性、复性后,获得了均质的L243纯化蛋白,该蛋白的复性率达80%。结论成功对上述重组蛋白包涵体进行了变性、复性及纯化,为后续与此蛋白相关的生物活性测定奠定了物质基础。 展开更多
关键词 重组蛋白 包涵体 亲和层析 变性、复性
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重组七鳃鳗富含半胱氨酸RGD蛋白rLj-RGD1对人肝癌HepG2细胞的抑制作用 被引量：1
4
作者 张安伟 张丕桥 +3 位作者 吕莉 勾萌 王继红 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期630-635,共6页
rLj-RGD1为源于日本七鳃鳗口腔腺的基因重组蛋白,其富含半胱氨酸并具有一个RGD(Arg-Gly-Asp)模体.前期工作表明,r Lj-RGD1具有抑制血小板聚集及血管新生的RGD毒素蛋白典型功能.为了研究rLj-RGD1是否具有RGD毒素蛋白的另一典型抗肿瘤功能... rLj-RGD1为源于日本七鳃鳗口腔腺的基因重组蛋白,其富含半胱氨酸并具有一个RGD(Arg-Gly-Asp)模体.前期工作表明,r Lj-RGD1具有抑制血小板聚集及血管新生的RGD毒素蛋白典型功能.为了研究rLj-RGD1是否具有RGD毒素蛋白的另一典型抗肿瘤功能,以人肝癌Hep G2细胞为模型,对r Lj-RGD1进行了活性研究.MTT法结果显示,r Lj-RGD1呈剂量依赖方式抑制HepG2细胞的增殖,其半抑制浓度(IC50)为3.6μmol/L;细胞迁移与浸润实验结果显示,r Lj-RGD1能以剂量依赖方式抑制Hep G2细胞碱性成纤维生长因子(b FGF)诱导的迁移与浸润.Hoechst染色和DNA Ladder等细胞凋亡实验表明,r Lj-RGD1能够以剂量依赖方式诱导Hep G2细胞发生凋亡.细胞黏附实验表明,r Lj-RGD1以剂量依赖方式抑制Hep G2细胞与玻连蛋白(vitronectin,VN)的黏附.上述结果表明,r Lj-RGD1具有抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、迁移和浸润的功能,并可诱导其发生失巢凋亡.本研究结果提示,r Lj-RGD1具有典型的RGD毒素蛋白抗肿瘤功能,其未来具有成为抗肿瘤药物的潜力. 展开更多
关键词 日本七鳃鳗 RGD毒素蛋白 抗肿瘤 迁移与浸润 失巢凋亡
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重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3表达及对Hela细胞活性的影响 被引量：7
5
作者 张丕桥 王继红 +2 位作者 刘欣 褚丹 李庆伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期686-694,共9页
为研究重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3的抗肿瘤活性,确定其生物学地位及意义,本研究提取成体七鳃鳗(Lampetra japonica)口腔腺组织总RNA,经RT-PCR获得cDNA序列长度为357bp的目的基因片段,将其克隆于pET23b载体,获得带有组氨酸标签的分... 为研究重组七鳃鳗细胞毒素蛋白rLj-RGD3的抗肿瘤活性,确定其生物学地位及意义,本研究提取成体七鳃鳗(Lampetra japonica)口腔腺组织总RNA,经RT-PCR获得cDNA序列长度为357bp的目的基因片段,将其克隆于pET23b载体,获得带有组氨酸标签的分子量为15kD的基因重组蛋白rLj-RGD3的高效可溶性表达,通过组氨酸亲和层析纯化蛋白。采用MTT法检测不同浓度rLj-RGD3对bFGF诱导下的Hela细胞增殖的抑制作用,结果表明rLj-RGD3能显著抑制Hela细胞的增殖,IC50为2.6μmol/L。rLj-RGD3作用后的Hela细胞经Hoechst染色及DNAladder检测结果显示,细胞均发生凋亡。rLj-RGD3对Hela细胞黏附玻连蛋白(VN)作用的实验结果为有效抑制。采用Transwell细胞培养板对bFGF诱导下的Hela细胞迁移实验表明,rLj-RGD3能够抑制Hela细胞的迁移,且抑制率达60%。采用人工基质膜基质Matrigel及Transwell模仿体内环境研究rLj-RGD3对Hela细胞浸润行为实验显示,以bFGF为趋化剂的Hela细胞穿透Matrigel的浸润行为明显受到抑制。以上研究表明,rLj-RGD3具有典型的RGD毒素蛋白的功能,有望应用于抗肿瘤基因工程药物开发,具有重要的生物学意义。 展开更多
关键词 七鳃鳗 RGD模体 整合素 基因重组 抗肿瘤
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