生长抑素Ⅱ型受体SSTR2蛋白的理化性质及生物信息学分析 被引量：4

1

作者 张丽萌 李闰婷 +5 位作者 聂晓宁 李玉华 李林 李亚蒙 陈龙欣 王林青 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第1期164-173,共10页

利用生物信息学方法在线分析生长抑素Ⅱ型受体SSTR2的理化性质、信号肽、跨膜结构、分泌蛋白类型、亚细胞定位、磷酸化位点修饰、空间结构及蛋白互作网络等,并通过MEGA5.0软件建立SSTR2蛋白的系统进化树。结果显示,该基因编码369个氨基... 利用生物信息学方法在线分析生长抑素Ⅱ型受体SSTR2的理化性质、信号肽、跨膜结构、分泌蛋白类型、亚细胞定位、磷酸化位点修饰、空间结构及蛋白互作网络等,并通过MEGA5.0软件建立SSTR2蛋白的系统进化树。结果显示,该基因编码369个氨基酸,分子式为C_(1898)H_(2984)N_(470)O_(513)S_(23),相对分子质量为41332.79,等电点理论值为9.15,不稳定系数为37.16。SSTR2是一种碱性稳定亲水蛋白,无信号肽,存在7个跨膜区,作用于质膜结构;二级结构主要为α-螺旋,属7tmGPCRs超家族,且含有1个7tmA_SSTR2结构域;与SSTR2相互作用的蛋白质包括CORT、SST、NPY、GHRL、GNAI1、GNAI2、GNAI3、SHANK1、HIVEP2。SSTR2基因及其编码蛋白在进化上高度保守,可能参与G蛋白偶联受体信号通路,进而发挥其作用。本研究通过对SSTR2蛋白的理化性质及生物学功能进行分析,为深入研究该蛋白在疾病发生中的机制以及为靶向治疗神经内分泌肿瘤等肿瘤药物研发提供理论依据。 展开更多

关键词 生长抑素Ⅱ型受体 SSTR2蛋白 神经内分泌肿瘤 生物信息学 生物学功能

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停乳链球菌GapC_(1-150aa)蛋白单克隆抗体的制备及其线性表位鉴定 被引量：3

2

作者 张丽萌 周雪 +17 位作者 魏玉华 樊自尧 汤炜 代建 杨轩 张建新 杨汐静 刘道龙 王成 王健南 于永忠 吴志军 于立权 孙虎男 马金柱 宋佰芬 朱战波 崔玉东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期875-880,共6页

链球菌GapC蛋白是表达于各种链球菌的膜蛋白，具有良好的免疫原性。为研制预防链球菌感染的表位疫苗和研发以单克隆抗体（MAb）为基础的检测试剂盒，本研究利用表达的停乳链球菌GapC蛋白aa1～aa150片段制备了3株MAbs，并利用噬菌体展示... 链球菌GapC蛋白是表达于各种链球菌的膜蛋白，具有良好的免疫原性。为研制预防链球菌感染的表位疫苗和研发以单克隆抗体（MAb）为基础的检测试剂盒，本研究利用表达的停乳链球菌GapC蛋白aa1～aa150片段制备了3株MAbs，并利用噬菌体展示技术对这3株MAbs的抗原表位进行分析，获得一个线性表位1377HDILDG142。该研究不仅有助于了解链球菌GapC的免疫保护作用机制，也有助于进一步研究表位疫苗和建立检测方法。 展开更多

关键词 停乳链球菌 GAPC 单克隆抗体 B细胞抗原表位

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两个玉米品种在萌芽期和苗期的干旱耐性比较分析 被引量：8

3

作者 李玉华 范春丽 +3 位作者 雷志华 张丽萌 卢园园 王同朝 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期703-710,共8页

以登海605(DH)和伟科702(WK)2个抗旱性不同的玉米品种为材料,分别在萌芽期采用精确称重控水,在苗期采用20%PEG-600溶液模拟田间土壤干旱胁迫的方法,对2个玉米品种萌芽期的生长量特征参数,苗期叶片光合作用特征参数、叶绿素荧光及多项生... 以登海605(DH)和伟科702(WK)2个抗旱性不同的玉米品种为材料,分别在萌芽期采用精确称重控水,在苗期采用20%PEG-600溶液模拟田间土壤干旱胁迫的方法,对2个玉米品种萌芽期的生长量特征参数,苗期叶片光合作用特征参数、叶绿素荧光及多项生理指标进行测定,比较研究干旱胁迫对这2个玉米品种种子萌发和幼苗生理性状的影响。研究结果表明,在干旱胁迫条件下,2个玉米品种在萌芽期的发芽率、发芽势、发芽指数、种子萌发抗旱指数、株高、胚根长、贮藏物质转运率、地上和地下部分干重(与对照相比)均下降,且DH各指标降低的幅度均低于WK下降的幅度;干旱胁迫使2个玉米品种苗期叶片的净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和气孔导度(Gs)均降低,且DH的Pn,Tr和Gs下降幅度均低于WK,但对2个品种玉米叶片的荧光参数几乎没影响;干旱处理使2个玉米品种叶片的过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)和质膜透性均升高,且DH叶片中H2O2,MDA含量和质膜透性升高幅度均小于WK,同时,干旱处理使2个玉米品种叶片的抗氧化酶CAT和POD活性、脯氨酸、还原型抗坏血酸(AsA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及可溶性蛋白含量均升高,DH叶片中这些指标升高幅度均较大。综上分析得出,干旱胁迫主要抑制2个玉米品种叶片的光合作用和碳水代谢速率,进而抑制其生长,二者均通过提高保护酶SOD,POD,CAT和APX活性,增加渗透调节物质等策略来缓解干旱胁迫造成的伤害。DH多项参数比WK受干旱影响小,较耐旱,研究结果为农业生产选育抗旱玉米品种提供了一定的理论依据。 展开更多

关键词 玉米 干旱胁迫 生长特征 光合特性 抗氧化酶

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绵羊CREBRF基因克隆、生物信息学及组织表达分析 被引量：1

4

作者 张丽萌 刘爱菊 +5 位作者 李闰婷 李玉华 李林 聂晓宁 王林青 陈龙欣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第5期1599-1609,共11页

【目的】对绵羊Luman/CREB3募集因子(CREBRF)基因进行克隆和生物信息学分析,并检测其在绵羊不同组织中的表达量,为探究CREBRF基因在绵羊中的生物学功能提供理论参考。【方法】以绵羊卵巢cDNA为模板,通过PCR扩增和克隆绵羊CREBRF基因完整... 【目的】对绵羊Luman/CREB3募集因子(CREBRF)基因进行克隆和生物信息学分析,并检测其在绵羊不同组织中的表达量,为探究CREBRF基因在绵羊中的生物学功能提供理论参考。【方法】以绵羊卵巢cDNA为模板,通过PCR扩增和克隆绵羊CREBRF基因完整CDS区序列,并进行相似性比对、系统进化树构建及生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR方法检测CREBRF基因在绵羊不同组织中的表达水平。【结果】绵羊CREBRF基因CDS区序列全长1920 bp,编码639个氨基酸。相似性比对结果表明,绵羊CREBRF氨基酸序列与山羊、牛、人、小鼠、猪、犬、马、鸡、鸭和斑马鱼的相似性分别为99.8%、99.1%、95.4%、93.6%、98.3%、97.5%、98.4%、88.0%、87.5%和61.3%。系统进化树分析结果显示,绵羊与山羊、牛的亲缘关系最近,与斑马鱼亲缘关系最远。生物信息学分析发现,绵羊CREBRF蛋白分子式为C_(3126)H_(4914)N_(858)O_(1056)S_(21),分子质量为72.08 ku,等电点(pI)为4.77,半衰期为30 h,肽链N-端为蛋氨酸(Met),不稳定系数为54.83;CREBRF蛋白存在于细胞核内,不具备跨膜性,无信号肽,为亲水性不稳定蛋白。CREBRF蛋白二级结构主要以无规则卷曲(47.57%)为主,其次为α-螺旋(37.09%)。实时荧光定量PCR结果显示,CREBRF基因在绵羊不同组织中均有表达,其中在心脏、肾脏和卵巢中表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本试验获得了绵羊CREBRF基因CDS区全长序列,并初步研究了其组织表达规律,为研究绵羊胚胎发育的调控机制及提高繁殖力等提供了材料。 展开更多

关键词 绵羊 CREBRF基因 生物信息学分析 表达

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绵羊FHL2基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定 被引量：2

5

作者 张丽萌 聂晓宁 +7 位作者 李闰婷 陈龙欣 王林青 邢真真 宋月 刘爱菊 田树军 马润林 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第21期25-29,175-176,共7页

为了利用绵羊卵巢酵母双杂交cDNA文库筛选与FHL2蛋白相互作用的宿主蛋白,构建重组诱饵载体pGBKT7-FHL2,试验从绵羊卵巢组织中提取总RNA并反转录为cDNA,依据FHL2基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增FHL2目的片段,连接到经限制... 为了利用绵羊卵巢酵母双杂交cDNA文库筛选与FHL2蛋白相互作用的宿主蛋白,构建重组诱饵载体pGBKT7-FHL2,试验从绵羊卵巢组织中提取总RNA并反转录为cDNA,依据FHL2基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增FHL2目的片段,连接到经限制性内切酶EocRⅠ和BamHⅠ酶切后的酵母空载体pGBKT7上,并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,进行PCR鉴定及测序比对分析,将构建好的重组诱饵载体pGBKT7-FHL2转化到酵母Y2HGlod感受态细胞中,利用酵母双杂交系统检测其表达情况、自激活活性及细胞毒性。结果表明:PCR扩增出大小约为876 bp的目的条带;成功构建出重组诱饵载体pGBKT7-FHL2,测序结果与NCBI中预测的FHL2碱基序列同源性为100%;重组诱饵载体pGBKT7-FHL2可在酵母Y2HGold感受态细胞中表达FHL2蛋白,对酵母Y2HGold感受态细胞无自激活活性和毒性作用。说明试验成功构建出重组诱饵载体pGBKT7-FHL2,通过检测证明该重组诱饵载体能够用于酵母双杂交系统筛选互作蛋白。 展开更多

关键词 FHL2 诱饵载体 酵母双杂交 自激活活性 毒性检测

原文传递

发酵香肠中亚硝酸盐替代品研究综述 被引量：16

6

作者 樊娟 张丽萌 +1 位作者 王玉娇 秦倩 《安徽农学通报》 2010年第3期177-179,共3页

亚硝酸盐是一种重要的食品添加剂,它赋予肉制品诱人的色泽,并对肉毒梭状芽孢杆菌有抑制作用,但亚硝酸盐具有毒性,可与胺类物质生成强致癌物质亚硝胺。综述了亚硝酸盐在发酵香肠中的重要作用及其带来的安全性问题,同时对降低发酵香肠中... 亚硝酸盐是一种重要的食品添加剂,它赋予肉制品诱人的色泽,并对肉毒梭状芽孢杆菌有抑制作用,但亚硝酸盐具有毒性,可与胺类物质生成强致癌物质亚硝胺。综述了亚硝酸盐在发酵香肠中的重要作用及其带来的安全性问题,同时对降低发酵香肠中亚硝酸盐含量的方法作了介绍,并对低亚硝发酵香肠的发展前景作出展望。 展开更多

关键词 发酵香肠 亚硝酸盐 替代品

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金黄色葡萄球菌TraP蛋白单克隆抗体制备 被引量：2

7

作者 周雪 范志勇 +4 位作者 汤炜 张丽萌 李闰婷 周瑜 崔玉东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2012年第2期48-51,99,共5页

研究通过骨髓瘤细胞SP2/0与经金黄色葡萄球菌(S.aureus)TraP蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,并进一步筛选和单克隆化,获得了11株稳定分泌抗TraP蛋白的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,其中8株McAb(2A1、3A6、3B1、1B4、2C5、4C7、5C3和2D8)亚类... 研究通过骨髓瘤细胞SP2/0与经金黄色葡萄球菌(S.aureus)TraP蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,并进一步筛选和单克隆化,获得了11株稳定分泌抗TraP蛋白的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,其中8株McAb(2A1、3A6、3B1、1B4、2C5、4C7、5C3和2D8)亚类为IgG1,3株McAb(2A7、3A1和1C4)亚类为IgM,轻链均为κ链。8株IgG1型McAb的小鼠腹水的抗体效价均达到1∶128 000,交叉实验结果显示这8株McAb不与S.aureus的ClfA、ClfB、Cna、FnbPA和IsdB蛋白以及链球菌的GapC蛋白反应,具有良好的特异性,Western-blotting结果显示这8株McAb识别的都是TraP的线性表位。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 TRAP 单克隆抗体

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非天然氨基酸pBpa在IL1β抗原表位的嵌入及其表征

8

作者 李闰婷 马韩轲 +4 位作者 张丽萌 聂晓宁 代冰雪 王林青 陈龙欣 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第6期23-28,共6页

为了探究表位中嵌入光敏型非天然氨基酸的蛋白质与其特异性抗体的光交联反应及其产物,基于基因密码子扩展技术,原核表达嵌入携带功能基团的非天然氨基酸蛋白质IL1β-L67pBpa,通过Western blot方法验证该突变体蛋白及其抗体的光交联功能... 为了探究表位中嵌入光敏型非天然氨基酸的蛋白质与其特异性抗体的光交联反应及其产物,基于基因密码子扩展技术,原核表达嵌入携带功能基团的非天然氨基酸蛋白质IL1β-L67pBpa,通过Western blot方法验证该突变体蛋白及其抗体的光交联功能.结果表明,本研究成功构建了pET28a-IL1β-L67TAG突变体质粒用于原核表达,在蛋白质的指定位点嵌入非天然氨基酸pBpa,并得到了高效表达的IL1β-L67pBpa.365 nm紫外光照射后,该突变体中的非天然氨基酸pBpa光敏基团与抗体中的氨基酸在空间距离靠近时,pBpa嵌合体能与其表位抗体(康纳单克隆抗体)通过共价键的光交联形成新的复合物.本研究证实了将非天然氨基酸(活性基团)插入到蛋白质特定位点的可行性. 展开更多

关键词 非天然氨基酸 基因密码子扩展技术 抗体 蛋白质相互作用 光交联

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绵羊CTSB基因过表达载体的构建及生物信息学分析 被引量：1

9

作者 韩红叶 张丽萌 +5 位作者 刘爱菊 马晓菲 李悦欣 高旭 王志刚 田树军 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期93-96,116,共5页

为了构建组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的真核表达载体,进一步研究其蛋白的结构和功能,本试验以绵羊卵巢组织的cDNA为模板,扩增绵羊卵巢CTSB基因的CDS编码区,将其插入真核表达载体中成功获得重组质粒pcDNA3.1-CTSB,利用生物学信息... 为了构建组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的真核表达载体,进一步研究其蛋白的结构和功能,本试验以绵羊卵巢组织的cDNA为模板,扩增绵羊卵巢CTSB基因的CDS编码区,将其插入真核表达载体中成功获得重组质粒pcDNA3.1-CTSB,利用生物学信息学分析软件对绵羊卵巢CTSB基因的结构和功能进行分析鉴定。研究结果表明:成功构建了重组质粒pcDNA3.1-CTSB,发现CTSB基因主要在细胞外行使功能,CTSB蛋白具有翻译后磷酸化及糖基化修饰特性,CTSB与LGMN、NLRP3、CTSD蛋白之间存在一定互作关系,上述发现将为进一步探究绵羊CTSB基因的功能提供重要线索。 展开更多

关键词 绵羊 CTSB 过表达载体 蛋白结构 蛋白功能

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定点突变阻止金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性 被引量：3

10

作者 代健 樊自尧 +3 位作者 杨轩 张丽萌 陈战球 崔玉东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2014年第2期44-49,112,共7页

金黄色葡萄球菌分泌的α-溶血素是导致肺炎的重要致病因子。为进一步研究金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-hla)的分子致病机理以及对其进行免疫预防,对α-hla第35位氨基酸进行了定点突变。用聚合酶链式反应(PCR)技术,从S.aureus wood46株基... 金黄色葡萄球菌分泌的α-溶血素是导致肺炎的重要致病因子。为进一步研究金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-hla)的分子致病机理以及对其进行免疫预防,对α-hla第35位氨基酸进行了定点突变。用聚合酶链式反应(PCR)技术,从S.aureus wood46株基因组中扩增出α-hla基因,再利用重叠延伸PCR技术,将第35位带正电荷的组氨酸(密码子为CAC)突变为非极性的亮氨酸(密码子为CTC)。hlaH35L基因测序结果显示第35位的组氨酸突变为亮氨酸,构建的重组表达质粒pET-28a-c(+)/hla和pET-28a-c(+)/hlaH35L在E.coli BL21(DE3)中得到表达,重组蛋白α-Hla及hlaH35L大小均为33.4 kDa,α-Hla引起兔红细胞溶血,hlaH35L未引起兔红细胞溶血。成功表达并获得了失去溶血毒性的重组蛋白hlaH35L。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 α-溶血素 定点诱变 原核表达 溶血活性

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抗停乳链球菌GapC_(1-150aa)单克隆抗体的制备及生物活性 被引量：4

11

作者 魏玉华 张丽萌 +6 位作者 周雪 樊自尧 于永忠 吴志军 孙虎男 于立权 崔玉东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2016年第1期53-58,87,共7页

为了深入研究停乳链球菌Gap C蛋白的抗原性,用原核表达的Gap C免疫优势片段—Gap C1-150aa蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备获得3株抗停乳链球菌Gap C1-150aa蛋白不同表位的单克隆抗体1F2、1E11和5B7。经鉴定确定,3株单抗均Ig G1... 为了深入研究停乳链球菌Gap C蛋白的抗原性,用原核表达的Gap C免疫优势片段—Gap C1-150aa蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备获得3株抗停乳链球菌Gap C1-150aa蛋白不同表位的单克隆抗体1F2、1E11和5B7。经鉴定确定,3株单抗均Ig G1亚型,其轻链均为κ链,3株单克隆抗体均能与停乳链球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的Gap C发生特异性反应而不与其他细菌蛋白发生反应,均具有显著的调理活性,并且具有一定的被动免疫保护作用。 展开更多

关键词 停乳链球菌 GAPC 单克隆抗体

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绵羊FHL2蛋白原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备 被引量：2

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作者 聂晓宁 李闰婷 +4 位作者 陈龙欣 李玉华 聂文营 张丽萌 王林青 《畜禽业》 2021年第1期3-4,共2页

通过表达和纯化重组的绵羊FHL2抗原蛋白和制备其多克隆抗体,用于研究该蛋白的生物学功能及绵羊繁殖调控的作用机制。研究采用PCR技术扩增绵羊FHL2蛋白的编码序列,利用限制性内切酶双酶切后插入pET28a-sumo中,加入0.5 M IPTG诱导蛋白表达... 通过表达和纯化重组的绵羊FHL2抗原蛋白和制备其多克隆抗体,用于研究该蛋白的生物学功能及绵羊繁殖调控的作用机制。研究采用PCR技术扩增绵羊FHL2蛋白的编码序列,利用限制性内切酶双酶切后插入pET28a-sumo中,加入0.5 M IPTG诱导蛋白表达,利用Ni-NTA纯化获得48 ku的重组FHL2蛋白。以重组FHL2蛋白为抗原,混合佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,获得抗FHL2的多克隆抗体,间接ELISA检测结果显示抗体效价达到16400。通过转染pEGFP-C1-FHL2质粒至HEK 293F细胞,提取细胞总蛋白,利用制备的抗FHL2多克隆抗体检测蛋白的结合力,具有良好的免疫原性,为研究FHL2蛋白的生物学功能及繁殖调控机制提供良好的基础材料。 展开更多

关键词 绵羊 FHL2基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体

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粒细胞集落刺激因子在羊成纤维细胞中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响

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作者 李闰婷 陈龙欣 +7 位作者 张丽萌 何海迎 王泳 杨若晨 段春辉 刘月琴 王玉琴 张英杰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2434-2444,共11页

【目的】研究粒细胞集落刺激因子(granule cell stimulating factor,GCSF)在羊成纤维细胞体外培养中对其增殖、周期和凋亡的影响,为今后基于羊GCSF为靶标诱导全能干细胞进行分子遗传育种研究提供理论依据。【方法】将羊GCSF真核表达质粒... 【目的】研究粒细胞集落刺激因子(granule cell stimulating factor,GCSF)在羊成纤维细胞体外培养中对其增殖、周期和凋亡的影响,为今后基于羊GCSF为靶标诱导全能干细胞进行分子遗传育种研究提供理论依据。【方法】将羊GCSF真核表达质粒pRTL1-GCSF和对照载体质粒pRTL1分别转染到1×10^(5)个细胞/mL的羊成纤维细胞中,培养48 h后,利用Trizol法分别提取总RNA并反转录为cDNA,通过实时荧光定量PCR检测羊GCSF在羊成纤维细胞中的瞬时表达水平。通过GCSF依赖型细胞系NFS-60,利用细胞活力检测试剂alamarBlue测定转染48 h后羊成纤维细胞培养上清中分泌表达的GCSF的生物学活性。通过HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,用Ni-NTA凝胶对细胞表达至细胞培养基中的GCSF蛋白进行纯化,并SDS-PAGE检测。加入纯化的30 ng·mL^(-1)GCSF蛋白后在24和48 h时,通过alamarBlue测定羊成纤维细胞的增殖状态,利用流式细胞术检测羊成纤维细胞的细胞周期和凋亡变化。【结果】羊GCSF真核表达质粒转染羊成纤维细胞48 h,检测发现在羊成纤维细胞中GCSF表达量得到显著提高。在羊成纤维细胞中,转染了pRTL1-GCSF质粒的羊GCSF表达量是转染了pRTL1空载对照组的(50615.92±4738.83)倍(P<0.01);羊成纤维细胞瞬时分泌表达的含有GCSF蛋白的培养基上清加入到GCSF依赖型细胞系NFS-60后,试验组和阳性对照组中的NFS-60的荧光强度与阴性对照组和空白对照组相比显著升高(P<0.01),试验组中的NFS-60的荧光强度与阳性对照组相比均差异不显著(P>0.05),结果显示羊GCSF能显著刺激NFS-60细胞的增殖,表明在羊成纤维细胞中表达的羊GCSF具有生物学活性。用HEK 293F悬浮培养细胞系真核表达分泌型羊GCSF蛋白后,纯化得到羊GCSF蛋白。在羊成纤维细胞中添加30 ng·mL^(-1)的羊GCSF后,体外培养24和48 h,GCSF试验组与培养基稀释液对照组相比,细胞活力变化差异不显著,而细胞周期的分布出现显著改变。24 h时,与对照组相比试验组的G1期细胞比例由(55.29±1.68)%增加到(69.37±0.24)%,差异极显著(P<0.01);S期细胞比例由(15.99±0.38)%变为(15.39±0.60)%,差异不显著(P>0.05);G2/M期细胞显著增多(P<0.05),比例由(22.88±1.00)%增大到(26.76±0.82)%。表明在羊成纤维细胞中加入羊GCSF的24 h后,处于分裂状态和间期的细胞显著增多。48 h时,与对照组相比试验组G1期细胞比例由(65.96±0.37)%减少为(45.69±0.26)%,差异极显著(P<0.01);S期细胞比例由(13.45±1.33)%增加为(37.87±2.43)%,差异极显著(P<0.01);G2/M期细胞比例由(16.42±1.29)%变为(21.80±1.86)%,差异不显著(P>0.05)。表明加入GCSF的羊成纤维细胞在48 h时,处于间期的细胞显著减少,同时DNA复制状态的细胞显著增多。试验组凋亡率和对照组相比,培养24 h时对照组(Ctr)和试验组(GCSF)的凋亡率分别是(7.51±0.38)%和(9.16±0.46)%。48 h时对照组和试验组的凋亡率分别是(5.73±0.29)%和(5.39±0.27)%。72 h时对照组(Ctr)和试验组(GCSF)的凋亡率分别是(8.88±0.45)%和(5.41±0.27)%,24 h和72 h凋亡率差异极显著(P<0.01),48 h检测时凋亡率差异不显著(P>0.05),表明在GCSF添加的24 h内促进了细胞凋亡,随着时间的延长,细胞的凋亡受到抑制。【结论】羊成纤维细胞中可以瞬时过量表达羊GCSF,并具有生物学活性。GCSF不影响羊成纤维细胞的增殖,但可调控其周期,影响细胞凋亡。该结果为今后通过羊成纤维细胞介导GCSF培育具有高免疫力、高抗病性的羊进行分子遗传育种奠定了基础。 展开更多

关键词 GCSF 羊 转染 生物学活性 细胞周期 细胞凋亡

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嵌有非天然氨基酸蛋白质的生物合成及其纯化鉴定

14

作者 马韩轲 李闰婷 +4 位作者 张丽萌 张函 裴若兰 陈肖皖 陈龙欣 《河南科学》 2021年第8期1245-1249,共5页

基于基因密码子扩展技术,构建能够嵌入非天然氨基酸pBpa蛋白质的大肠杆菌BL21(DE3)双质粒原核表达工程菌株,原核表达后,通过Ni-NTA纯化介质的初步纯化以及AKTA蛋白纯化系统的Superdex75分子筛进一步精细纯化,获得了在IL-1β的5号预设位... 基于基因密码子扩展技术,构建能够嵌入非天然氨基酸pBpa蛋白质的大肠杆菌BL21(DE3)双质粒原核表达工程菌株,原核表达后,通过Ni-NTA纯化介质的初步纯化以及AKTA蛋白纯化系统的Superdex75分子筛进一步精细纯化,获得了在IL-1β的5号预设位点上嵌入了非天然氨基酸pBpa的嵌合体蛋白,并且通过质谱确认pBpa在预设位点的精准插入.本研究证明基于密码子扩展技术构建的双质粒工程菌可以将非天然氨基酸pBpa插入到IL-1β的特定位点,能够生物合成并纯化出大量的非天然氨基酸嵌合体蛋白质,这为其他非天然氨基酸或其他功能蛋白及其特异性位点的非天然氨基酸嵌合蛋白的生物合成奠定了基础. 展开更多

关键词 非天然氨基酸 pBpa 基因密码子扩展技术 白细胞介素-1Β

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绵羊TIMP1基因克隆及真核表达载体的构建

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作者 宋芳婷 李冉 +3 位作者 李闰婷 聂晓宁 侯雯 张丽萌 《畜禽业》 2021年第4期1-2,共2页

为探究TIMP1基因在绵羊卵巢组织中的生物学功能及在繁殖调控中的作用机制。研究以绵羊卵巢组织为材料,提取RNA后采用RT-PCR技术检测TIMP1基因在产多胎和产单胎绵羊卵巢组织中的差异表达情况,另外利用PCR技术扩增得到绵羊TIMP1基因编码序... 为探究TIMP1基因在绵羊卵巢组织中的生物学功能及在繁殖调控中的作用机制。研究以绵羊卵巢组织为材料,提取RNA后采用RT-PCR技术检测TIMP1基因在产多胎和产单胎绵羊卵巢组织中的差异表达情况,另外利用PCR技术扩增得到绵羊TIMP1基因编码序列,共编码207个氨基酸。构建TIMP1基因的真核表达载体,利用限制性内切酶双酶切后插入pEGFP-C1载体中。提取质粒利用脂质体转染至HEK 293F细胞中,验证真核表达载体的表达情况,为进一步探索TIMP1基因的生物学功能及繁殖调控机制提供良好的基础材料。 展开更多

关键词 绵羊 TIMP1基因 差异表达 细胞转染

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从“时代曲”到“革命歌”:20世纪初广播电台建构的音乐景观

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作者 王瑞 张丽萌 《新闻知识》 2023年第3期71-75,95-96,共7页

1923年,中国出现首座广播电台,电子媒介时代开启。20世纪20、30年代,音乐节目是广播电台里最常见的内容。其中,先后出现的“时代曲”和“革命歌”既是重要的声音景观,也是社会情境、价值观念以及文化生态的时代反映。“时代曲”与“革... 1923年,中国出现首座广播电台,电子媒介时代开启。20世纪20、30年代,音乐节目是广播电台里最常见的内容。其中,先后出现的“时代曲”和“革命歌”既是重要的声音景观,也是社会情境、价值观念以及文化生态的时代反映。“时代曲”与“革命歌”并非泾渭分明、截然对立的,前者包含表达抗争的作品,后者也从中有所借鉴。广播媒介在传播两类歌曲的同时,逐渐重新组织、建构了中国大城市的时空情境。 展开更多

关键词 广播电台 时代曲 革命歌 音乐景观

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机械力影响细胞骨架变化在盆腔器官脱垂发生中的作用 被引量：1

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作者 张丽萌 石彬 +4 位作者 杨威 赵昕 单淑芝 江静 李东晓 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期294-297,共4页

目的:研究机械力作用下对非盆腔器官脱垂(POP)患者的骶韧带成纤维细胞细胞骨架相关蛋白整合素(integrinβ1)和核膜血影重复蛋白(nesprin-2)表达的调节。方法:选择2016年3~9月在河北医科大学第二医院东院区妇产科接受手术治疗的非POP患... 目的:研究机械力作用下对非盆腔器官脱垂(POP)患者的骶韧带成纤维细胞细胞骨架相关蛋白整合素(integrinβ1)和核膜血影重复蛋白(nesprin-2)表达的调节。方法:选择2016年3~9月在河北医科大学第二医院东院区妇产科接受手术治疗的非POP患者12例,进行骶韧带成纤维细胞的原代培养并鉴定。取3~5代的骶韧带成纤维细胞采用F1 excell 4000柔性基底拉伸加载系统对实验对象进行加载,加载时间分别为0、6、12、24小时,进而对成纤维细胞蛋白提取,用免疫蛋白印记技术测定成纤维细胞在加力不同的时间后的integrinβ1和nesprin-2的表达量。结果:在应力刺激下,integrinβ1蛋白表达在0、6、12、24小时分别为1.398±0.019、1.353±0.023、1.640±0.048、3.111±0.037,12、24小时与0小时相比,差异有统计学意义(P<0.05)。nesprin-2蛋白表达在0、6、12、24小时表达量分别为0.396±0.063、0.637±0.021、0.601±0.041、2.451±0.063,6、12、24小时与0小时比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:机械力对非POP盆底组织细胞骨架的变化起着关键作用,影响POP的发生。 展开更多

关键词 盆腔器官脱垂 成纤维细胞 细胞骨架 整合素 核膜血影重复蛋白

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静息门控心肌灌注显像总积分在冠心病诊断中的临床价值研究 被引量：4

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作者 张丽萌 杜春玲 +3 位作者 商明艳 李坤 陈丽 李文 《医学影像学杂志》 2018年第11期1833-1836,共4页

目的探讨静息门控心肌灌注显像总积分在冠心病诊断中的临床价值。方法回顾性分析43例冠心病患者,所有患者均行门控心肌灌注显像(GMPI),应用ECTbox软件计算左室舒张末期容积(EDV)、收缩末期容积(ESV)、左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(S... 目的探讨静息门控心肌灌注显像总积分在冠心病诊断中的临床价值。方法回顾性分析43例冠心病患者,所有患者均行门控心肌灌注显像(GMPI),应用ECTbox软件计算左室舒张末期容积(EDV)、收缩末期容积(ESV)、左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV),利用半定量分析法得出静息灌注总积分SRS,与上述各指标进行相关性分析,根据SRS的结果将患者分为两组(SRS <10分组、SRS≥10分组),比较两组间左心功能参数差异(均为P <0. 05),并比较各指标在男女之间的差异,最后探讨GMPI在冠心病中的诊断价值。结果 SRS <10与SRS≥10两组间左心功能参数具有明显差异,P <0. 01; SRS及IVEF呈显著负相关,r=-0. 710,SRS与EDV、ESV呈显著正相关,相关系数分别为0. 703、0. 764,与SV呈负相关,r=-0. 415,均为P <0. 01;男性受检者EDV,ESV明显高于女性受检者,而LVEF明显低于女性,男女间差异具有显著性(P <0. 01)。结论门控心肌灌注显像SRS与左室功能呈显著负相关。静息门控心肌灌注显像在冠心病(CAD)的诊断及疗效评估有重要价值。 展开更多

关键词 门控心肌灌注显像 冠心病 左心功能

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酵母双杂交技术筛选与绵羊微管解聚蛋白相互作用的蛋白

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作者 张丽萌 李闰婷 +7 位作者 聂晓宁 李玉华 刘爱菊 邢真真 聂文营 马润林 王林青 陈龙欣 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期201-207,共7页

采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA,运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列;通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1,鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况;利用诱... 采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA,运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列;通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1,鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况;利用诱饵质粒p GBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白。结果显示:成功构建重组诱饵质粒p GBKT7–STMN1,并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用,且能在酵母细胞中正常表达;筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆,经测序比对分析和点对点验证,得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白,这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程。 展开更多

关键词 绵羊 微管解聚蛋白(STMN1) 诱饵载体 CDNA文库 酵母双杂交 互作蛋白

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绵羊卵巢组织细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 被引量：2

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作者 张丽萌 李闰婷 +7 位作者 聂晓宁 陈龙欣 邢真真 刘爱菊 房晓欢 韩红叶 马润林 田树军 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第8期45-49,共5页

试验旨在构建绵羊卵巢组织细胞的cDNA文库,为进一步研究绵羊卵巢中蛋白互作机制提供工具。本研究以不同发情周期的绵羊卵巢组织为材料,利用TRIzol试剂提取绵羊卵巢组织细胞总RNA,应用SMART技术经过长链PCR(LD-PCR)合成双链cDNA(ds cDNA)... 试验旨在构建绵羊卵巢组织细胞的cDNA文库,为进一步研究绵羊卵巢中蛋白互作机制提供工具。本研究以不同发情周期的绵羊卵巢组织为材料,利用TRIzol试剂提取绵羊卵巢组织细胞总RNA,应用SMART技术经过长链PCR(LD-PCR)合成双链cDNA(ds cDNA),通过CHROMA SPIN^TM+TE-400柱纯化得到ds cDNA,并与线性pGADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞。用同源重组的方式,在酵母细胞内构建绵羊卵巢组织细胞酵母双杂交cDNA表达文库。结果构建了含有3×108个重组子的绵羊卵巢组织cDNA文库,插入片段长度多数为500~2000 bp,重组率达96%,重组子中平均插入的片段长度为1000 bp,文库滴度为2×107cfu/mL,符合建库标准。 展开更多

关键词 绵羊 卵巢 CDNA文库 酵母双杂交

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