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基于实时荧光PCR技术检测葛根粉中植物源性成分
1
作者 张伊动 刘艳 +6 位作者 李诗瑶 朱必婷 张涛 林津 陈曦 朱力杰 张莉 《中南农业科技》 2024年第9期29-35,共7页
基于实时荧光PCR技术(Real-time fluorescence PCR,RT-PCR),利用不同种属植物之间基因组序列的差异,设计葛根、甘薯、马铃薯、玉米、薯蓣、木薯和豌豆7种典型含淀粉植物的特异性引物及探针,建立葛根粉中植物源性成分检测的RT-PCR检测方... 基于实时荧光PCR技术(Real-time fluorescence PCR,RT-PCR),利用不同种属植物之间基因组序列的差异,设计葛根、甘薯、马铃薯、玉米、薯蓣、木薯和豌豆7种典型含淀粉植物的特异性引物及探针,建立葛根粉中植物源性成分检测的RT-PCR检测方法。通过对豆薯、甘薯、大麦、小麦、黑麦、荞麦、菜豆等27种产品进行引物探针的特异性扩增,验证该方法的特异性,并检测7种引物探针的绝对灵敏度和相对灵敏度。结果表明,葛根、甘薯、木薯、玉米、豌豆成分检出的绝对灵敏度最低可达0.010 ng/μL,薯蓣和马铃薯的绝对灵敏度为0.001 ng/μL;7种引物探针的相对灵敏度低至0.1%(质量分数)。针对葛根粉掺假严重的状况,对市面上流通的40种葛根粉产品进行植物源性成分检测,其中25份样品不含葛根源性成分,占样品总数的62.5%;含葛根的15份样品中有5份样品掺有其他非葛根源性成分,占样品总数的12.5%。所检测到的非葛根源性成分以木薯和玉米居多,豌豆、薯蓣等也有检出。 展开更多
关键词 实时荧光PCR技术 葛根粉 植物源性成分 特异性 灵敏度
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微滴式数字PCR定量检测包装饮用水中铜绿假单胞菌 被引量：1
2
作者 刘艳 李诗瑶 +5 位作者 张伊动 张涛 林津 朱必婷 张莉 彭青枝 《中南农业科技》 2024年第8期55-58,共4页
建立一种微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测包装饮用水中铜绿假单胞菌的技术。根据铜绿假单胞菌外毒素A(ETA)基因序列合成特异性引物和探针,通过多种菌株扩增验证方法特异性,通过人... 建立一种微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测包装饮用水中铜绿假单胞菌的技术。根据铜绿假单胞菌外毒素A(ETA)基因序列合成特异性引物和探针,通过多种菌株扩增验证方法特异性,通过人工添加铜绿假单胞菌验证方法检出限。结果表明,建立的包装饮用水中铜绿假单胞菌ddPCR定量检测方法特异性强,检出限为10 CFU/mL,灵敏度高,适用性好。该方法可以满足包装饮用水中铜绿假单胞菌定量检测需求。 展开更多
关键词 微滴式数字PCR(ddPCR) 包装饮用水 铜绿假单胞菌 定量检测
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维氏气单胞菌Cbl蛋白的原核表达及纯化
3
作者 张伊动 马香 +3 位作者 李宏 唐鸿倩 刘柱 唐燕琼 《热带生物学报》 2021年第3期333-339,共7页
维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)引起的细菌性疾病已威胁到鱼类养殖业的发展。Cbl(类CysB蛋白)是细菌硫代谢的重要调控因子之一。本研究选取pET-28a为Cbl的原核表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,使用IPTG(Isopropyl-beta-D-thioga... 维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)引起的细菌性疾病已威胁到鱼类养殖业的发展。Cbl(类CysB蛋白)是细菌硫代谢的重要调控因子之一。本研究选取pET-28a为Cbl的原核表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,使用IPTG(Isopropyl-beta-D-thiogalactoside,异丙基−β−D−硫代半乳糖苷)诱导表达,用SDSPAGE凝胶电泳验证蛋白条带,再用BOSTER的BCA蛋白浓度测定试剂盒测量Cbl蛋白浓度,寻找较适宜的蛋白表达条件。结果表明,当诱导时间为8 h,IPTG终浓度为0.1 mmol·L^(−1),诱导温度为15℃,咪唑洗脱浓度为100 mmol·L^(−1)时,Cbl蛋白质量浓度能达到601.405 mg·L^(−1),可满足后续实验要求。 展开更多
关键词 CBL 载体构建 原核表达 蛋白纯化
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维氏气单胞菌acrR敲除株的构建 被引量：1
4
作者 胡康 张伊动 +3 位作者 唐燕琼 李宏 马香 刘柱 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期42-45,共4页
从维氏气单胞菌C4(A.veronii C4)基因组DNA中扩增得到acrR基因上游同源臂片段和下游同源臂片段,连接到自杀质粒pRE112中以构建敲除重组质粒pRE112-ΔacrR,并通过电转化将敲除重组质粒导入大肠杆菌WM3064中,再通过双亲接合将其转入维氏... 从维氏气单胞菌C4(A.veronii C4)基因组DNA中扩增得到acrR基因上游同源臂片段和下游同源臂片段,连接到自杀质粒pRE112中以构建敲除重组质粒pRE112-ΔacrR,并通过电转化将敲除重组质粒导入大肠杆菌WM3064中,再通过双亲接合将其转入维氏气单胞菌C4中,以筛选得到acrR基因敲除的维氏气单胞菌突变株。生长曲线测定结果显示acrR基因敲除不会影响维氏气单胞菌的生长。生物膜测定表明,敲除acrR基因的维氏气单胞菌株表现出生物膜的形成显著增加。所构建的敲除株为进一步探索AcrR在维氏气单胞菌中的功能提供了必要材料,并提示AcrR在细菌生物膜形成中的潜在调控功能。 展开更多
关键词 acrR基因 基因敲除 生物膜 维氏气单胞菌
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