目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代...目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代ICCs细胞分为对照组、模型组、模型+柴胡皂苷D组、模型+CaMKKβ抑制剂组、模型+柴胡皂苷D+CaMKKβ抑制剂组。透射电镜观察自噬体超微结构,ELISA检测Ghrelin和SP的水平,免疫荧光检测Ca2+和LC-3Ⅱ的表达,Western blot检测LC-3Ⅱ/Ⅰ、CaMKKβ、p-AMPK、Drp1、MFN2、IP3R和RyR的蛋白表达水平。结果谷氨酸诱导的模型组ICCs中LC-3Ⅱ荧光表达增强。柴胡皂苷D干预可降低Ca2+浓度,降低CaMKKβ、AMPK和MFN2水平(P<0.01),增加LC-3Ⅱ/Ⅰ、IP3R、RyR、Drp1、Ghrelin和SP水平(P<0.01)。柴胡皂苷D联合CaMKKβ抑制剂STO-609干预后效果更显著。结论柴胡皂苷D可通过CaMKKβ/AMPK信号通路介导Ca2+外流,影响ICCs细胞过度自噬及胃肠动力相关因子的表达。展开更多
目的研究新冠康复颗粒对于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)瘥后肺纤维化的潜在保护机制。方法通过TCMSP、Uniprot数据库、中国药典获得新冠康复颗粒所含中药的性味归经、化学成分、作用靶点,获得靶蛋白基因,分析组成中药的成分信息,下载分...目的研究新冠康复颗粒对于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)瘥后肺纤维化的潜在保护机制。方法通过TCMSP、Uniprot数据库、中国药典获得新冠康复颗粒所含中药的性味归经、化学成分、作用靶点,获得靶蛋白基因,分析组成中药的成分信息,下载分子结构文件;通过GeneCards、OMIM数据库获取肺纤维化相关靶基因,将药物活性成分靶点与肺纤维化相关靶点相映射,获得新冠康复颗粒与肺纤维化作用相关的共有靶基因;运用Cytoscape3.7.0软件构建中药-成分-靶点网络;将共同作用靶点导入STRING平台进行蛋白互作分析;通过DAVID平台进行基因本体(GO)分析,基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,组织分布富集分析,运用R软件进行可视化;在RCSB PDB(RCSB Protein Data Bank)数据库下载VEGFR的晶体结构(PDB ID:2XIR)、FGFR的晶体结构(PDB ID:5EW8)晶体结构,借助AutoDock-Tool1.5.6、Vina软件,将受体与配体进行预处理及分子对接。结果新冠康复颗粒所含中药性味以"甘""寒"为主,归经主要在肺,其次在脾胃;经筛选新冠康复颗粒可作用于肺纤维化的中药活性成分有94种,相关作用靶基因133个。GO功能富集结果显示新冠康复颗粒主要涉及药物反应、转录调控、炎症反应、凋亡、氧化应激等生物学过程的调节;KEGG信号通路富集结果显示新冠康复颗粒主要涉及糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物及其受体(AGE-RAGE)信号通路、癌症信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、NF-κB信号通路等;组织富集结果显示新冠康复颗粒的中药成分主要富集在肺脏、肝脏、血液、成纤维细胞等组织;分子对接结果显示新冠康复颗粒前10位的活性化合物与VEGFR、FGFR的结合能均小于-6kcaL/mol。结论新冠康复颗粒可通过多种途径对COVID-19患者瘥后肺组织纤维化发挥保护作用。展开更多
目的:观察穴位与非穴位针刺对高脂饮食诱导的肥胖小鼠白色脂肪组织巨噬细胞极化的影响。方法:将50只雄性C 57 BL/6小鼠随机抽取10只作为正常组,其余40只给予持续高脂饮食造模16周,将30只造模成功的小鼠随机分为模型组、非穴位组、穴位组...目的:观察穴位与非穴位针刺对高脂饮食诱导的肥胖小鼠白色脂肪组织巨噬细胞极化的影响。方法:将50只雄性C 57 BL/6小鼠随机抽取10只作为正常组,其余40只给予持续高脂饮食造模16周,将30只造模成功的小鼠随机分为模型组、非穴位组、穴位组,每组10只,继续给予高脂饮食喂养8周。正常组继续给予普通饲料喂养8周。自造模成功后第2天开始,穴位组小鼠针刺"关元""足三里""胃脘下俞",非穴位组针刺尾部2个非穴位,每日1次,每次针刺15 min,连续治疗8周。于造模成功后及末次治疗后第2天记录各组小鼠体质量;眼眶采血,检测小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)水平;HE染色观察各组小鼠附睾白色脂肪组织形态,real-time quantitative PCR(RT-q PCR)检测小鼠附睾白色脂肪中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthesis,i NOS)和CD 206 m RNA表达情况,免疫组化(IHC)检测附睾白色脂肪组织中i NOS和CD 206的蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组、非穴位组、穴位组小鼠在喂养第16周和第24周时体质量均明显上升(均P<0.05);与模型组比较,穴位组小鼠在第24周时体质量明显降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组TG、TC明显上升(均P<0.05);与模型组比较,非穴位组TC明显降低(P<0.05),穴位组TG、TC明显降低(均P<0.05)。与正常组比较,模型组和非穴位组小鼠脂肪组织中MCP-1、TNF-α、IL-6、i NOS m RNA的表达明显升高(均P<0.05),IL-10、CD 206 m RNA的表达明显降低(均P<0.05);与模型组比较,穴位组脂肪组织中MCP-1、TNF-α、IL-6、i NOS m RNA的表达明显降低(均P<0.05),IL-10、CD 206 m RNA的表达明显升高(均P<0.05)。HE染色可见:正常组脂肪组织呈蜂窝状结构,由大量单泡脂肪细胞构成,脂肪细胞呈多边形或圆形,呈空泡状;模型组脂肪细胞明显增大且脂肪细胞大小不规则,细胞间隙变大;穴位组脂肪细胞变小,细胞间隙变小。与正常组比较,模型组和非穴位组小鼠脂肪组织中i NOS蛋白表达明显升高(均P<0.05),CD206蛋白表达明显降低(均P<0.05);与模型组比较,穴位组脂肪组织中i NOS蛋白表达明显降低(P<0.05),CD206蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:针刺"关元""足三里""胃脘下俞"穴可通过影响白色脂肪组织巨噬细胞极化改善肥胖小鼠脂肪炎性反应。展开更多
文摘目的探讨柴胡皂苷D调控CaMKKβ/AMPK信号通路,在功能性消化不良中对胃肠道Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICCs)细胞自噬的作用及机制。方法分离大鼠原代ICCs细胞,谷氨酸刺激构建ICCs自噬模型,免疫荧光检测Ca2+水平。将原代ICCs细胞分为对照组、模型组、模型+柴胡皂苷D组、模型+CaMKKβ抑制剂组、模型+柴胡皂苷D+CaMKKβ抑制剂组。透射电镜观察自噬体超微结构,ELISA检测Ghrelin和SP的水平,免疫荧光检测Ca2+和LC-3Ⅱ的表达,Western blot检测LC-3Ⅱ/Ⅰ、CaMKKβ、p-AMPK、Drp1、MFN2、IP3R和RyR的蛋白表达水平。结果谷氨酸诱导的模型组ICCs中LC-3Ⅱ荧光表达增强。柴胡皂苷D干预可降低Ca2+浓度,降低CaMKKβ、AMPK和MFN2水平(P<0.01),增加LC-3Ⅱ/Ⅰ、IP3R、RyR、Drp1、Ghrelin和SP水平(P<0.01)。柴胡皂苷D联合CaMKKβ抑制剂STO-609干预后效果更显著。结论柴胡皂苷D可通过CaMKKβ/AMPK信号通路介导Ca2+外流,影响ICCs细胞过度自噬及胃肠动力相关因子的表达。
文摘目的研究新冠康复颗粒对于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)瘥后肺纤维化的潜在保护机制。方法通过TCMSP、Uniprot数据库、中国药典获得新冠康复颗粒所含中药的性味归经、化学成分、作用靶点,获得靶蛋白基因,分析组成中药的成分信息,下载分子结构文件;通过GeneCards、OMIM数据库获取肺纤维化相关靶基因,将药物活性成分靶点与肺纤维化相关靶点相映射,获得新冠康复颗粒与肺纤维化作用相关的共有靶基因;运用Cytoscape3.7.0软件构建中药-成分-靶点网络;将共同作用靶点导入STRING平台进行蛋白互作分析;通过DAVID平台进行基因本体(GO)分析,基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,组织分布富集分析,运用R软件进行可视化;在RCSB PDB(RCSB Protein Data Bank)数据库下载VEGFR的晶体结构(PDB ID:2XIR)、FGFR的晶体结构(PDB ID:5EW8)晶体结构,借助AutoDock-Tool1.5.6、Vina软件,将受体与配体进行预处理及分子对接。结果新冠康复颗粒所含中药性味以"甘""寒"为主,归经主要在肺,其次在脾胃;经筛选新冠康复颗粒可作用于肺纤维化的中药活性成分有94种,相关作用靶基因133个。GO功能富集结果显示新冠康复颗粒主要涉及药物反应、转录调控、炎症反应、凋亡、氧化应激等生物学过程的调节;KEGG信号通路富集结果显示新冠康复颗粒主要涉及糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物及其受体(AGE-RAGE)信号通路、癌症信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、NF-κB信号通路等;组织富集结果显示新冠康复颗粒的中药成分主要富集在肺脏、肝脏、血液、成纤维细胞等组织;分子对接结果显示新冠康复颗粒前10位的活性化合物与VEGFR、FGFR的结合能均小于-6kcaL/mol。结论新冠康复颗粒可通过多种途径对COVID-19患者瘥后肺组织纤维化发挥保护作用。
文摘目的:观察穴位与非穴位针刺对高脂饮食诱导的肥胖小鼠白色脂肪组织巨噬细胞极化的影响。方法:将50只雄性C 57 BL/6小鼠随机抽取10只作为正常组,其余40只给予持续高脂饮食造模16周,将30只造模成功的小鼠随机分为模型组、非穴位组、穴位组,每组10只,继续给予高脂饮食喂养8周。正常组继续给予普通饲料喂养8周。自造模成功后第2天开始,穴位组小鼠针刺"关元""足三里""胃脘下俞",非穴位组针刺尾部2个非穴位,每日1次,每次针刺15 min,连续治疗8周。于造模成功后及末次治疗后第2天记录各组小鼠体质量;眼眶采血,检测小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)水平;HE染色观察各组小鼠附睾白色脂肪组织形态,real-time quantitative PCR(RT-q PCR)检测小鼠附睾白色脂肪中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthesis,i NOS)和CD 206 m RNA表达情况,免疫组化(IHC)检测附睾白色脂肪组织中i NOS和CD 206的蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组、非穴位组、穴位组小鼠在喂养第16周和第24周时体质量均明显上升(均P<0.05);与模型组比较,穴位组小鼠在第24周时体质量明显降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组TG、TC明显上升(均P<0.05);与模型组比较,非穴位组TC明显降低(P<0.05),穴位组TG、TC明显降低(均P<0.05)。与正常组比较,模型组和非穴位组小鼠脂肪组织中MCP-1、TNF-α、IL-6、i NOS m RNA的表达明显升高(均P<0.05),IL-10、CD 206 m RNA的表达明显降低(均P<0.05);与模型组比较,穴位组脂肪组织中MCP-1、TNF-α、IL-6、i NOS m RNA的表达明显降低(均P<0.05),IL-10、CD 206 m RNA的表达明显升高(均P<0.05)。HE染色可见:正常组脂肪组织呈蜂窝状结构,由大量单泡脂肪细胞构成,脂肪细胞呈多边形或圆形,呈空泡状;模型组脂肪细胞明显增大且脂肪细胞大小不规则,细胞间隙变大;穴位组脂肪细胞变小,细胞间隙变小。与正常组比较,模型组和非穴位组小鼠脂肪组织中i NOS蛋白表达明显升高(均P<0.05),CD206蛋白表达明显降低(均P<0.05);与模型组比较,穴位组脂肪组织中i NOS蛋白表达明显降低(P<0.05),CD206蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:针刺"关元""足三里""胃脘下俞"穴可通过影响白色脂肪组织巨噬细胞极化改善肥胖小鼠脂肪炎性反应。
