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两种甲醇脱氢酶在食甲基杆菌甲醇代谢中的作用
1
作者 郭雅卿 王东澍 +3 位作者 朱力 张惟材 刘颖 王恒樑 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第10期126-132,共7页
本研究以食葡糖食甲基杆菌MP688(Methylobacterium glucophilum MP688)的吡咯喹啉醌(pyrroloquino-line quinone,PQQ)高产突变株J1-1为研究对象,通过生物信息学分析从基因组上找到两个甲醇脱氢酶(methanol dehydrogenase,MDH)基因mpq077... 本研究以食葡糖食甲基杆菌MP688(Methylobacterium glucophilum MP688)的吡咯喹啉醌(pyrroloquino-line quinone,PQQ)高产突变株J1-1为研究对象,通过生物信息学分析从基因组上找到两个甲醇脱氢酶(methanol dehydrogenase,MDH)基因mpq0771和mpq2496。考察了Ca^(2+)及La^(3+)对菌体生长、PQQ合成、MDH表达及酶活力的影响,并研究两种酶在甲醇代谢中的作用。结果显示:Ca^(2+)和La^(3+)均能促进J1-1菌体生长,且在菌体快速生长的情况下导致PQQ合成下降;Ca^(2+)存在时,菌株J1-1中mpq0771表达量较高,添加La^(3+)后mpq0771表达受到阻遏,但增强了mpq2496表达,菌体MDH总活力也有所提高;敲除菌J1-1Δmpq0771不能利用甲醇生长,添加La^(3+)后可利用甲醇生长并能合成PQQ,且能检测到MDH活性。mpq0771编码产物是Ca^(2+)依赖的MDH,mpq2496编码产物是严格依赖La^(3+)的MDH,且La^(3+)能够诱导mpq2496表达并替代mpq0771发挥甲醇脱氢酶的作用。 展开更多
关键词 食甲基杆菌 甲醇脱氢酶 吡咯喹啉醌 La^(3+)
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Arthrobacter K1108乙内酰脲酶反应条件和立体选择性研究 被引量：3
2
作者 张惟材 袁红杰 +4 位作者 郝淑凤 彭清忠 王书锦 朱厚础 黄留玉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期635-638,共4页
研究了ArthrobacterK110 8乙内酰脲酶的反应条件 ,结果表明 ,K110 8乙内酰脲酶的最适反应温度为 5 5℃ ,最适pH为 7 0 ,Co2 + 和Fe2 + 对该酶有激活作用 ,而Ca2 + 有严重抑制作用。K110 8乙内酰脲酶的底物专一性较强 ,其最适底物为 5 ... 研究了ArthrobacterK110 8乙内酰脲酶的反应条件 ,结果表明 ,K110 8乙内酰脲酶的最适反应温度为 5 5℃ ,最适pH为 7 0 ,Co2 + 和Fe2 + 对该酶有激活作用 ,而Ca2 + 有严重抑制作用。K110 8乙内酰脲酶的底物专一性较强 ,其最适底物为 5 苄基乙内酰脲 ,5 苯基乙内酰脲和 5 吲哚甲基乙内酰脲均不能作为其有效底物。对K110 8乙内酰脲酶立体反应机制研究结果表明 ,其乙内酰脲水解酶不具立体选择性 ,决定产物立体构型的酶是N 氨甲酰氨基酸水解酶。 展开更多
关键词 节杆菌 乙内酰脲酶 反应条件 底物专一性 立体选择性 氨基酸 酶法生产
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重组大肠杆菌的发酵与代谢工程 被引量：18
3
作者 张惟材 朱厚础 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期289-293,共5页
关键词 高密度发酵 代谢工程 乙酸 重组 大肠杆菌
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大肠杆菌BL21(DE3)磷酸转乙酰基酶缺陷变株的发酵研究 被引量：3
4
作者 张惟材 邓兵兵 +2 位作者 彭清忠 黄培堂 朱厚础 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期59-63,共5页
研究了E .coliBL2 1(DE3)及其磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株FR5 5发酵过程中菌体生长和有机酸产生情况 ,并以肿瘤坏死因子 (TNF)为外源蛋白表达的模型考察了pta基因缺陷对外源蛋白表达的影响。在摇瓶培养条件下 ,pta变株TNF的表达水平... 研究了E .coliBL2 1(DE3)及其磷酸转乙酰基酶 (PTA)缺陷变株FR5 5发酵过程中菌体生长和有机酸产生情况 ,并以肿瘤坏死因子 (TNF)为外源蛋白表达的模型考察了pta基因缺陷对外源蛋白表达的影响。在摇瓶培养条件下 ,pta变株TNF的表达水平比亲株提高了 2 3 %。在 5L发酵罐中进行了补料分批培养试验 ,在不限制比生长速率的条件下 pta变株能够以较长时间和较高比生长速率保持对数生长 ,最终达到 32 5 g(DCW ) /L的菌密度 ,TNF的总表达量达 2 8g/L ;而在相同条件下 ,以BL2 1(DE3)为受体菌的对照组最高菌密度为 19 5g(DCW ) /L ,TNF总表达量只有 0 84g/L。表明 pta变株对于提高工程菌外源蛋白的表达和实现高密度培养具有一定应用价值。分析了补料分批培养过程中发酵液有机酸组成和含量的动态变化情况 ,发现pta变株乙酸累积水平明显降低(为亲株乙酸累积水平的 42 % )的同时 ,其他几种有机酸 (丙酮酸、乳酸、琥珀酸 )的累积有显著增加的趋势 ,使发酵液中总有机酸浓度增加了 12 3% 。 展开更多
关键词 磷酸转乙酰基酶缺陷变株 高密度培养 有机酸 发酵
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气相色谱法测定工程菌发酵液中的乙酸 被引量：9
5
作者 张惟材 邓兵兵 +1 位作者 彭清忠 朱厚础 《生物技术通讯》 CAS 2000年第3期196-198,共3页
用气相色谱法对发酵液中的乙酸进行了分析。以丙酸为内标 ,样品用硫酸酸化后再用乙醚提取 ,在HP -FFAP毛细管分析柱上进行色谱分析 ,采用FID检测器检测。该方法样品制备过程简捷 ,精密度和回收率都很高。乙酸的回收率为 99.4 4 %～ 10 2... 用气相色谱法对发酵液中的乙酸进行了分析。以丙酸为内标 ,样品用硫酸酸化后再用乙醚提取 ,在HP -FFAP毛细管分析柱上进行色谱分析 ,采用FID检测器检测。该方法样品制备过程简捷 ,精密度和回收率都很高。乙酸的回收率为 99.4 4 %～ 10 2 .4 1% ,变异系数 1.6 9%～ 6 .11%。 展开更多
关键词 气相色谱法 分析 乙酸 工程菌发酵液
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节杆菌K1108乙内酰脲酶产酶条件研究 被引量：2
6
作者 张惟材 郝淑凤 +2 位作者 袁红杰 王书锦 黄留玉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期214-219,共6页
研究了乙内酰脲酶产生菌节杆菌K1 1 0 8的产酶条件。该菌乙内酰脲酶为诱导酶 ,存在于细胞内 ,乙内酰脲水解酶和N 氨甲酰氨基酸水解酶是同时被诱导产生。最适诱导物为5 苄基乙内酰脲 ,而 5 吲哚甲基乙内酰脲和 5 苯基乙内酰脲等不能... 研究了乙内酰脲酶产生菌节杆菌K1 1 0 8的产酶条件。该菌乙内酰脲酶为诱导酶 ,存在于细胞内 ,乙内酰脲水解酶和N 氨甲酰氨基酸水解酶是同时被诱导产生。最适诱导物为5 苄基乙内酰脲 ,而 5 吲哚甲基乙内酰脲和 5 苯基乙内酰脲等不能诱导其酶的产生。筛选到一种安慰诱导物 ,诱导活性提高了 2倍多。对产酶培养基进行了筛选和优化 ,在最适条件下 ,K1 1 0 8产酶能力可达 1 0 8U mL。 展开更多
关键词 节杆菌 乙内酰脲酶 产酶条件
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Arthrobacter K1108乙内酰脲酶转化产物的鉴定 被引量：2
7
作者 张惟材 宋爱华 +1 位作者 沙沂 于荣敏 《生物技术通讯》 CAS 1999年第3期164-166,共3页
用 Arthrobacter sp.K1 1 0 8的完整细胞为酶源 ,对 DL- 5 -苄基乙内酰脲进行了酶法转化 ,对转化产物进行了提取和精制 ,并通过理化分析和光谱分析进行了鉴定 ,证实所得产物确实为 L-苯丙氨酸 ,同时证实 K1 1 0 8的乙内酰脲酶是
关键词 Arthrobactersp.K1108 乙内酰脲酶 L-苯丙氨酸
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微生物乙内酰脲酶及其研究进展 被引量：8
8
作者 张惟材 邓兵兵 《生物技术通讯》 CAS 1999年第2期141-144,共4页
乙内酰脲酶是广泛分布在微生物中的一类可降解乙内酰脲酶类化合物的酶系 ,包括乙内酰脲水解酶、N-氨甲酰氨基酸水解酶及乙内酰脲消旋酶。微生物的乙内酰脲酶在结构与组成、立体选择性、底物专一性、反应条件和作用机制等方面有所不同 ,... 乙内酰脲酶是广泛分布在微生物中的一类可降解乙内酰脲酶类化合物的酶系 ,包括乙内酰脲水解酶、N-氨甲酰氨基酸水解酶及乙内酰脲消旋酶。微生物的乙内酰脲酶在结构与组成、立体选择性、底物专一性、反应条件和作用机制等方面有所不同 ,在各种 L-及 D-型氨基酸的酶法生产中具有良好的应用前景。本文对乙内酰脲酶研究及应用的一般情况作了概述 。 展开更多
关键词 乙内酰脲酶 微生物
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一株乙内酰脲酶产生菌Arthrobacter K1108的筛选及鉴定 被引量：2
9
作者 张惟材 沙沂 宋爱华 《生物技术通讯》 CAS 1999年第3期161-163,166,共4页
从沈阳市浑河地区污泥中分离得到了一株乙内酰脲酶产生菌 ,薄层色谱和氨基酸自动分析仪的分析结果表明 ,该菌的完整细胞可催化 5 -苄基乙内酰脲水解产生苯丙氨酸。对该菌进行了细菌分类学鉴定 ,确定该菌为节杆菌属的一个种 ,故命名为 Ar... 从沈阳市浑河地区污泥中分离得到了一株乙内酰脲酶产生菌 ,薄层色谱和氨基酸自动分析仪的分析结果表明 ,该菌的完整细胞可催化 5 -苄基乙内酰脲水解产生苯丙氨酸。对该菌进行了细菌分类学鉴定 ,确定该菌为节杆菌属的一个种 ,故命名为 Arthrobacter sp.K1 1 0 展开更多
关键词 Arthrobactersp.K1108 分离 乙内酰脲酶
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代谢工程与重组大肠杆菌的发酵 被引量：1
10
作者 张惟材 朱厚础 《生物技术通讯》 CAS 1998年第3期205-209,共5页
利用代谢工程可以在重组大肠杆菌的改良中减少代谢副产物乙酸的累积,优化代谢系统,利于重组蛋白质的高表达以及重组菌的高密度发酵。应用代谢工程改良重组大肠杆菌主要包括阻断乙酸产生的主要途径、限制糖酵解途径上的碳代谢流、将过量... 利用代谢工程可以在重组大肠杆菌的改良中减少代谢副产物乙酸的累积,优化代谢系统,利于重组蛋白质的高表达以及重组菌的高密度发酵。应用代谢工程改良重组大肠杆菌主要包括阻断乙酸产生的主要途径、限制糖酵解途径上的碳代谢流、将过量的丙酮酸转化为其它低毒的副产物以及对碳代谢流进行分流等几个方面的工作。 展开更多
关键词 代谢工程 高密度发酵 乙酸
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N-氨甲酰基氨基酸水解酶在毕赤酵母中的表达
11
作者 张惟材 李迎丽 +2 位作者 张彦明 邓兵兵 黄留玉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期73-76,共4页
N-氨甲酰氨基酸水解酶是乙内酰脲酶系的组成部分,催化N-氨甲酰氨基酸水解为相应氨基酸。节杆菌BT801的N-氨甲酰氨基酸水解酶是该菌乙内酰脲酶系中惟一具立体专一性的酶,也是整个反应体系的限速酶。通过PCR从携带乙内酰脲酶系完整操纵子... N-氨甲酰氨基酸水解酶是乙内酰脲酶系的组成部分,催化N-氨甲酰氨基酸水解为相应氨基酸。节杆菌BT801的N-氨甲酰氨基酸水解酶是该菌乙内酰脲酶系中惟一具立体专一性的酶,也是整个反应体系的限速酶。通过PCR从携带乙内酰脲酶系完整操纵子的亚克隆质粒pUC18-169上扩增得到N-氨甲酰氨基酸水解酶基因(hyuC)片段,连接到载体pPIC3.5K上,经BglⅡ酶切线性化,通过PEG法转化导入毕赤酵母GS115感受态细胞,利用G418抗性筛选得到插入多拷贝目的基因的转化子。酶活性分析表明所得转化子具有N-氨甲酰氨基酸水解酶活性,可将N-氨甲酰基苯丙氨酸水解为苯丙氨酸。 展开更多
关键词 N-氨甲酰氨基酸水解酶 巴斯德毕赤酵母 基因表达
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大肠杆菌ptsG基因敲除及其缺陷株生长特性研究 被引量：26
12
作者 韩聪 张惟材 +1 位作者 游松 黄留玉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期16-20,共5页
在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中... 在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段。经电转化 ,将外源DNA片段分别转入EscherichiacoliDH5α、JM10 9中。在Red重组酶的作用下 ,外源DNA片段与染色体上同源区域重组 ,将基因ptsG敲除 ,构建ptsG基因缺陷株DH5αP、JM10 9P。在LB培养基中 ,ptsG基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异。在含有葡萄糖的LB培养基中 ,DH5αP、JM10 9P的最高菌密度分别是对照菌株DH5α、JM10 9的 3 4 7倍和 4 2 5倍 ,ptsG基因缺陷株对葡萄糖的摄入量也明显高于对照菌株。重组蛋白肿瘤坏死因子 (TNF)在DH5αP、JM10 9P中的表达量分别占全菌蛋白的2 4 3%、2 0 8% ,A6 0 0 分别为 8 2 8、7 6 2 ,TNF在缺陷株中单位体积的表达量明显高于对照菌株。以上结果说明 ,大肠杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和表达外源蛋白的能力 ,在大肠杆菌高密度发酵研究方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 ptsG基因 缺陷株 生长特性 基因敲除 代谢工程
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吡咯喹啉醌产生菌筛选方法建立及菌种筛选 被引量：15
13
作者 王歆 汪建华 +1 位作者 刘党生 张惟材 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期982-986,共5页
吡咯喹啉醌(PQQ)是一种氧化还原酶的辅酶,具有多种生理功能。扩增得到大肠杆菌葡萄糖脱氢酶(GDH)基因,并利用表达载体pET28a在E.coli BL21(DE3)中进行了表达。纯化了可溶性表达产物,并建立了基于GDH的重组酶法分析PQQ的方法。确定了甲... 吡咯喹啉醌(PQQ)是一种氧化还原酶的辅酶,具有多种生理功能。扩增得到大肠杆菌葡萄糖脱氢酶(GDH)基因,并利用表达载体pET28a在E.coli BL21(DE3)中进行了表达。纯化了可溶性表达产物,并建立了基于GDH的重组酶法分析PQQ的方法。确定了甲基营养菌筛选模型,从2000余份土样中分离得到一株PQQ高产生菌MP606,在未经培养条件优化及诱变选育的条件下PQQ产量达113mg/L。从该菌培养液中制备得到了产物的结晶,HPLC分析、特征光谱分析以及酶法分析均证实该产物为PQQ。扩增并分析了MP606的16S rDNA序列,结果显示该菌16S rDNA序列与12种甲基营养菌都具有95%以上同源性,其中与食甲基菌属两菌株的16S rDNA序列同源性达99%。 展开更多
关键词 吡咯喹啉醌 葡萄糖脱氢酶 酶法分析 菌种筛选 16S RDNA
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维生素C发酵中伴生菌对氧化葡糖杆菌的影响 被引量：16
14
作者 焦迎晖 张惟材 +2 位作者 谢莉 袁红杰 陈梦霞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期35-38,共4页
通过分析维生素C二步发酵过程中活菌数、产酸量、pH、糖酸转化活力等 ,研究了蜡状芽孢杆菌 (俗称大菌 )对氧化葡糖杆菌 (俗称小菌 )生长和产酸的影响。结果表明 ,在大菌存在情况下 ,小菌的活菌数约为单菌培养条件下的 5倍 ,产酸量为单... 通过分析维生素C二步发酵过程中活菌数、产酸量、pH、糖酸转化活力等 ,研究了蜡状芽孢杆菌 (俗称大菌 )对氧化葡糖杆菌 (俗称小菌 )生长和产酸的影响。结果表明 ,在大菌存在情况下 ,小菌的活菌数约为单菌培养条件下的 5倍 ,产酸量为单菌培养条件下的 2～ 3倍 ,糖酸转化活力为单菌培养条件下的 2～ 3倍 ,提示在混合菌发酵条件下大菌仅仅是通过刺激小菌的生长而促进小菌产酸。用小菌休止细胞进行的糖酸转化实验结果也表明 ,无论大菌的发酵上清液还是破碎的菌体 ,都未发现对小菌产酸产生直接影响。 展开更多
关键词 维生素C 发酵 伴生菌 氧化葡糖杆菌 蜡杆芽孢杆菌
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Red同源重组技术研究进展 被引量：22
15
作者 韩聪 张惟材 游松 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第12期17-21,共5页
伴随着分子生物学的发展 ,一种基于λ噬菌体Red重组酶的同源重组系统已应用于大肠杆菌基因工程研究。Red重组系统由三种蛋白组成 :Exo蛋白是一种核酸外切酶 ,结合在双链DNA的末端 ,从 5′端向 3′端降解DNA ,产生 3′突出端 ;Beta蛋白... 伴随着分子生物学的发展 ,一种基于λ噬菌体Red重组酶的同源重组系统已应用于大肠杆菌基因工程研究。Red重组系统由三种蛋白组成 :Exo蛋白是一种核酸外切酶 ,结合在双链DNA的末端 ,从 5′端向 3′端降解DNA ,产生 3′突出端 ;Beta蛋白结合在单链DNA上 ,介导互补单链DNA退火 ;Gam蛋白可与RecBCD酶结合 ,抑制其降解外源DNA的活性。Red同源重组技术具有同源序列短 ( 4 0～ 60bp)、重组效率高的特点。这种技术可在DNA靶标分子的任意位点进行基因敲除、敲入、点突变等操作 ,无需使用限制性内切酶和连接酶。此外 ,这种新型重组技术可直接将目的基因克隆于载体上 ,目的基因既可来源于细菌人工染色体也可是基因组DNA。Red同源重组技术使难度较大的基因工程实验顺利进行 。 展开更多
关键词 RED同源重组 基因打靶 基因工程 Red重组酶
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节杆菌BT801基因文库构建及其乙内酰脲酶基因分离与表达 被引量：6
16
作者 郝淑凤 张惟材 +2 位作者 袁红杰 王恒梁 黄留玉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期281-285,共5页
L 乙内酰脲酶产生菌节杆菌BT80 1的染色体DNA经Sau3AI部分酶切后分离 30kb左右的片段 ,与经HpaI和PstI酶切的黏粒载体pKC5 0 5进行连接 ,将连接产物用包装蛋白包装 ,转染大肠杆菌DH5α得到 10 0 0 0多个转化子 ,构建成节杆菌BT80 1的基... L 乙内酰脲酶产生菌节杆菌BT80 1的染色体DNA经Sau3AI部分酶切后分离 30kb左右的片段 ,与经HpaI和PstI酶切的黏粒载体pKC5 0 5进行连接 ,将连接产物用包装蛋白包装 ,转染大肠杆菌DH5α得到 10 0 0 0多个转化子 ,构建成节杆菌BT80 1的基因组文库。通过薄层层析等方法筛选得到了 1个阳性克隆 ,通过亚克隆得到了乙内酰脲酶的完整基因 。 展开更多
关键词 乙内酰脲酶 节杆菌 基因文库 基因表达
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山梨糖脱氢酶基因在大肠杆菌染色体上整合及表达 被引量：9
17
作者 高书颖 张惟材 +1 位作者 汪建华 郭蔼光 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期139-141,共3页
以质粒pKF3为模板 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段 ,连至pMD18 T载体 ,构建得到pMD18 PC。以质粒pQE6 0 SDH为模板 ,扩增山梨糖脱氢酶基因sdh ,与pMD18 PC连接 ,得到pMD18 PC SDH。将其用PvuⅡ酶... 以质粒pKF3为模板 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段 ,连至pMD18 T载体 ,构建得到pMD18 PC。以质粒pQE6 0 SDH为模板 ,扩增山梨糖脱氢酶基因sdh ,与pMD18 PC连接 ,得到pMD18 PC SDH。将其用PvuⅡ酶切 ,回收含ptsG1 cat sdh ptsG2 的目的片段 ,电转化至JM10 9 pKD4 6 ,在Red重组酶的作用下 ,外源DNA片段与染色体上对应区域发生同源重组 ,将基因ptsG敲除 ,替换为cat sdh基因 ,获得整合sdh基因的JM10 9s。经检测JM10 9s具有山梨糖脱氢酶活性。以ptsG基因上下游序列为引物 ,JM10 9s基因组DNA为模板进行PCR 。 展开更多
关键词 山梨糖脱氢酶 RED重组 整合
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短芽孢杆菌的转化方法 被引量：5
18
作者 彭清忠 彭清静 +1 位作者 张惟材 朱厚础 《吉首大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第4期35-38,共4页
采用Tris-PEG法、电击转化法和TSS方法对5株野生短芽孢杆菌进行了转化.其中,Tris-PEG法转化短芽孢杆菌50和735,电击转化短芽孢杆菌50取得成功,转化率为102个转化子/μgDNA.
关键词 短芽孢杆菌 电击转化 PEG DNA 野生 转化方法 转化率
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具有分泌蛋白能力的短芽孢杆菌的筛选及鉴定 被引量：7
19
作者 彭清忠 张惟材 朱厚础 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期693-699,共7页
短芽孢杆菌 (Bacillusbrevis)具有分泌蛋白能力强和胞外蛋白酶活性低的特性 ,是分泌表达外源蛋白较理想的宿主。为获得分泌表达系统较理想的宿主菌 ,建立了短芽孢杆菌高效筛选模型 ,从 80 0余株细菌中筛得 8株具有高蛋白分泌能力且没有... 短芽孢杆菌 (Bacillusbrevis)具有分泌蛋白能力强和胞外蛋白酶活性低的特性 ,是分泌表达外源蛋白较理想的宿主。为获得分泌表达系统较理想的宿主菌 ,建立了短芽孢杆菌高效筛选模型 ,从 80 0余株细菌中筛得 8株具有高蛋白分泌能力且没有胞外蛋白酶活性的候选菌。经多相分类学初步鉴定其中 展开更多
关键词 筛选 鉴定 蛋白分泌 短芽孢杆菌
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2种太岁样品中微生物的分离和鉴定 被引量：16
20
作者 林涧 熊向华 +3 位作者 葛欣 汪建华 苏昕 张惟材 《生物技术通讯》 CAS 2013年第6期825-827,共3页
目的:太岁是自然界中一种组成及分类尚不明确的生物体。采用分子生物学方法对2种不同来源地的太岁样品进行菌种分离培养和分子鉴定。方法:太岁表面经75%乙醇消毒处理后,用麦芽汁培养基分离可培养菌株,提取太岁及分离菌株基因组DNA,以之... 目的:太岁是自然界中一种组成及分类尚不明确的生物体。采用分子生物学方法对2种不同来源地的太岁样品进行菌种分离培养和分子鉴定。方法:太岁表面经75%乙醇消毒处理后,用麦芽汁培养基分离可培养菌株,提取太岁及分离菌株基因组DNA,以之为模板,用16S rDNA、18S rDNA和ITS通用引物进行PCR扩增,扩增片段连入pMD18T载体并测序,通过序列比对对太岁菌种组成进行初步鉴定。结果:从太岁1号样品中分离到假丝酵母(Can?dida)和粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa),从太岁2号样品中分离到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)和粘质红酵母。结论:2种来源不同的太岁样品中均存在可培养的粘质红酵母。 展开更多
关键词 太岁 生物多样性 培养 分子鉴定
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