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武汉东湖水体中病毒和指示细菌的研究 被引量:6
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作者 张楚瑜 李小锋 +1 位作者 王祖卿 孟小林 《武汉大学学报(自然科学版)》 CSCD 1991年第1期99-108,共10页
本文报导了武汉东湖水体中病毒和指示细菌存在的水平。研究结果表明东湖水体中病原体污染严重。所检测的56个样品中,有24个样品检出病毒,检出率为42.8%.含量范围为0~167.5Pfu/L,平均为4.97Pfu/L.已鉴定出的病毒有脊髓灰质炎病毒,柯萨奇... 本文报导了武汉东湖水体中病毒和指示细菌存在的水平。研究结果表明东湖水体中病原体污染严重。所检测的56个样品中,有24个样品检出病毒,检出率为42.8%.含量范围为0~167.5Pfu/L,平均为4.97Pfu/L.已鉴定出的病毒有脊髓灰质炎病毒,柯萨奇 B 组病毒和腺病毒。由于东湖水体的病毒和细菌严重污染,它已影响了作为饮用水水源和旅游用水的功能。 展开更多
关键词 武汉市 东湖 水体 病毒 指示细菌
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猪瘟病毒感染性cDNA克隆的构建及其致病性 被引量:13
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作者 王毅 吴海祥 +3 位作者 张楚瑜 伊光辉 曹晟 温国元 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期43-47,共5页
为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK 15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线... 为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK 15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线,通过电镜观察到重组病毒呈球形,具有囊膜结构。进一步把获得的猪瘟病毒粒子感染非免疫实验猪,结果子代病毒与石门株类似,对非免疫实验猪有强烈的致病性,证明该全长cD NA克隆可靠稳定,忠实地保留了石门株病毒的感染性和致病特征。由此为进一步探讨猪瘟病毒的致弱机制及病毒与机体相互作用的机制打下了良好的基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 全长CDNA克隆 体外转录 电镜观测 致病性 RT-PCR 猪瘟 疫苗
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应用荧光定量PCR技术快速定量检测猪瘟病毒 被引量:24
3
作者 温国元 万超 +1 位作者 潘兹书 张楚瑜 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期746-750,共5页
采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的... 采用荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行快速定量检测.实验证明,该方法的检测灵敏度可达10拷贝/μL,对于不同毒株以及各种组织样品检测结果均为阳性.通过该方法与RT PCR、nPCR的比较,发现该方法检测灵敏度比RT PCR高100倍,与nPCR具有相同的灵敏度,并且该方法避免了常规PCR电泳检测所带来的高污染率.因此,该方法以其快速、灵敏、低污染率的优点,会在猪瘟的早期检测及预防、控制上起到重要作用. 展开更多
关键词 猪瘟病毒 荧光定量PCR 定量检测
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表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建 被引量:9
4
作者 潘兹书 张楚瑜 +1 位作者 陈玉栋 闵平 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期466-470,共5页
将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证... 将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证实 ,转染BHK2 1细胞的pTKE2在感染PRV的情况下 ,能表达E2蛋白 采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒 ,对酶切位点进行改造 ,将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点 ,构建了用PRVgG启动子和HCMVIE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达、两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2 .GFP 将双基因转移载体pTKE2 .GFP转染BHK2 1细胞中 ,12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达 。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 转移载体 绿色荧光蛋白 E2基因
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伪狂犬病毒基因转移载体的快速构建及其瞬时表达 被引量:5
5
作者 罗满林 丁建华 +3 位作者 刘镇明 袁少华 张楚瑜 王家富 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期79-81,共3页
以含有伪狂犬病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)蛋白激酶 (proteinkinase ,PK)基因的重组质粒为基础 ,利用非互补粘性末端经过部分补平后成为粘性末端 ,再进行连接的方法克隆了与载体分子大小相当的报告基因表达盒 用限制性内切酶分析确... 以含有伪狂犬病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)蛋白激酶 (proteinkinase ,PK)基因的重组质粒为基础 ,利用非互补粘性末端经过部分补平后成为粘性末端 ,再进行连接的方法克隆了与载体分子大小相当的报告基因表达盒 用限制性内切酶分析确证了伪狂犬病毒表达载体中报道基因表达盒的插入方向 ,并通过导入细胞后检测外源基因在体外的瞬时表达 。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 瞬时表达 基因工程疫苗 表达载体
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中国猪瘟兔化弱毒兔脾毒NS2-3基因的序列分析 被引量:7
6
作者 王家富 张楚瑜 +2 位作者 傅烈振 黄茜华 张芄伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期150-154,共5页
根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定... 根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定了其核苷酸序列。结果显示 ,所克隆的NS 2 - 3基因长 2 96 4个核苷酸 ,编码 988个氨基酸。用DNASIS和PROSIS软件分析表明 ,该基因具有丝氨酸类蛋白酶活性及含有解旋酶超家族特征性保守序列。核苷酸序列同源性分析表明 ,HCLV与国外报导的 8株HCV毒株“C”、Riems、ALD、GPE、Glentorf、CAP、Brescia和Alfort株NS 2 - 3基因核苷酸序列同源性分别为 99%、99%、96 %、96 %、95 %、95 %、94%和 86 % ,推导的氨基酸序列同源性分别为 99%、99%、98%、98%、98%、97%、97%和 95 % ,氨基酸序列的高度同源性表明了NS 2 - 3是猪瘟病毒中高度保守的蛋白质之一 ,这与该基因产物参与病毒复制及多聚蛋白前体加工过程中的重要作用相对应。 展开更多
关键词 中国猪瘟兔化弱毒 NS2-3基因 序列分析 疫苗
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建立快速定量检测猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR技术 被引量:31
7
作者 陈玉栋 张楚瑜 +4 位作者 邹俊煊 潘兹书 陈立新 李田 郭长林 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期124-128,共5页
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样... 在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样品的变异系数为2.3%-5.1%(n=10),疫苗样品组内实验变异系数为0.85%-2.8%(n=5)、组间实验为2.5%-7.3%(n=5),对同一样品分5次RNA提取和逆转录,其变异系数为5.0%;对9份疫苗样品进行了检测,与兔体定型热反应方法相比较,有很好的相关性;整个检测过程仅需4h。该法可望取代传统的兔体定型热反应用于疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒苗 快速定量检测 荧光定量PCR技术 猪瘟
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呼吸道合胞病毒实时荧光定量PCR检测 被引量:8
8
作者 张其威 游上游 +3 位作者 孙继民 吴旗 余春华 张楚瑜 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期847-852,共6页
目的建立一种快速、准确诊断人呼吸道合胞病毒(hRSV)早期感染的实时荧光定量PCR检测方法。方法以hRSV最保守的N基因序列为参考,设计两对特异的引物和一条TaqMan荧光探针,在LightCycler定量PCR检测仪上对93例下呼吸道感染患儿进行hRSVRN... 目的建立一种快速、准确诊断人呼吸道合胞病毒(hRSV)早期感染的实时荧光定量PCR检测方法。方法以hRSV最保守的N基因序列为参考,设计两对特异的引物和一条TaqMan荧光探针,在LightCycler定量PCR检测仪上对93例下呼吸道感染患儿进行hRSVRNA检测,并与病毒分离培养、常规PCR、巢式PCR方法和ELISA法相比较。结果以PCR模板浓度来定义,该方法线形范围为1×102 ̄1×107cDNAcopies/μl,灵敏度达1×102cDNAcopies/μl,和巢式PCR相同,比常规PCR高10倍。用人脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、柯萨奇病毒2型、甲型、乙型流感病毒、腺病毒7型作对照,均无预期扩增产物和荧光的产生;该方法在LightCycler和Rotor-Gene两种仪器上的定量结果具有一致性;采用该法对93例患儿行FQ-PCR检测出阳性44例(43.9%),ELISA方法检测阳性4例(4.3%),两者相关性不高。hRSV浓度的高低与患儿临床症状之间的关系不是很明显。结论该方法可快速、灵敏、特异、定量检测hRSV,在hRSV感染的早期诊断和疗效监测方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 实时监测 灾光定量PCR TAQMAN
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抗病毒中药研究的最新进展 被引量:74
9
作者 张其威 张楚瑜 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期116-119,共4页
关键词 抗病毒 中药 研究进展
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猪瘟病毒石门株与兔化弱毒株E0糖蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:4
10
作者 王家富 张楚瑜 +2 位作者 王宁 傅烈振 黄茜华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期32-37,共6页
参考已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了一对引物,应用RTPCR 技术,扩增了猪瘟兔化弱毒(Hog cholera virus lapinized Chinese strain , HCLV) 和石门强毒株的E0 糖蛋白基因,... 参考已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了一对引物,应用RTPCR 技术,扩增了猪瘟兔化弱毒(Hog cholera virus lapinized Chinese strain , HCLV) 和石门强毒株的E0 糖蛋白基因,并将其克隆到pGEMT 载体中,测定了其核苷酸序列,并推导了其氨基酸序列。结果表明我国这两株强弱不同毒株E0 糖蛋白核苷酸序列同源性和推导的氨基酸序列同源性分别为95-0 % 和94-3 % ,有13 个氨基酸的差异,HCLV 比石门株多了一个潜在的N糖基化位点。将我国这两株病毒与国外已报导的HCV 毒株E0 基因序列进行了比较,发现石门株与日本的两株毒株ALD 和GPE- 同源性较高,核苷酸序列同源性分别为97-4 % 和96-5 % ,氨基酸同源性分别为97-4 % 和96-0 % ,而与欧洲Brescia 株和Alfort 株同源性较低,核苷酸同源性分别为92-2 % 和86-5 % ,氨基酸同源性为95-2 % 和92-5 % , HCLV 与ALD、GPE- 、Brescia、Alfort 株核苷酸同源性分别为95-6 % 、94-9 % 、91-3 % 、85-5 % ,推导的氨基酸同源性分别为93-4 % 、92-5 % 展开更多
关键词 猪瘟病毒 序列分析 EO糖蛋白 兔化弱毒疫苗
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伪狂犬病毒TK基因转移载体构建及LacZ基因表达 被引量:3
11
作者 潘兹书 张楚瑜 +2 位作者 赵伟光 郑从义 丁建华 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 2000年第6期717-720,共4页
在扩增、克隆 PRV tk、g H基因的基础上 ,构建了包含 tk和 g H基因片段的转移载体质粒 p TK2 .5 .以PRV糖蛋白 g G启动子 ( Pg G)为控制外源基因表达的启动子 ,以 E.coli lac Z为报道基因 ,用其替换 p TK2 .5质粒tk区的 Sal I与 Xho I... 在扩增、克隆 PRV tk、g H基因的基础上 ,构建了包含 tk和 g H基因片段的转移载体质粒 p TK2 .5 .以PRV糖蛋白 g G启动子 ( Pg G)为控制外源基因表达的启动子 ,以 E.coli lac Z为报道基因 ,用其替换 p TK2 .5质粒tk区的 Sal I与 Xho I之间的序列 ,构建了转移载体质粒 p TK- L ac Z.瞬时表达证实 ,转染细胞的 p TK - lac Z质粒在野生型 PRV感染的情况下 ,能有效表达β- Gal酶活性 .将 p TK- lac Z转染 BHK 2 1细胞后再以 PRV感染进行同源重组 ,在 143TK- 细胞上经 5 -溴脱氧尿苷选择 ,Vero细胞纯化 ,X- Gal染色 ,蓝斑筛选 ,分离到重组体 PRV ( r PRV) .r PRV与野生型 PRV在细胞上具有类似的生长特性 ,且经过连续传代的 r PRV仍能稳定的表达β- 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 胸苷激酶基因 转移载体 LACZ基因
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Taq Man技术快速定量检测人巨细胞病毒的早期感染 被引量:3
12
作者 邹俊煊 张楚瑜 +1 位作者 游上游 金建年 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期247-250,共4页
采用实时TaqMan技术快速定量检测血清中的人巨细胞病毒(HCMV)感染,在HCMV保守性的Ma jorIE基因区段设计了一对引物和一条Taqman探针,在LightCycler及Rotor Gene定量检测仪上检测HCMVDNA.试验证明,两种仪器定量结果具有一致性,以PCR模板... 采用实时TaqMan技术快速定量检测血清中的人巨细胞病毒(HCMV)感染,在HCMV保守性的Ma jorIE基因区段设计了一对引物和一条Taqman探针,在LightCycler及Rotor Gene定量检测仪上检测HCMVDNA.试验证明,两种仪器定量结果具有一致性,以PCR模板浓度来定义,敏感度达到1.0×102拷贝/μL,线性范围为1.0×102~1.0×108拷贝/μL.应用该方法与ELISA法对40例临床婴幼儿患者血清同时进行HCMV检测,结果显示TaqMan法与ELISA法相关性不高,前者更适于HCMV感染早期的定量检测,提示该法可应用于孕妇及新生儿HCMV筛查,并有助于疗效监测和评估. 展开更多
关键词 TAQMAN技术 定量检测 巨细胞病毒 早期感染 早期诊断 HCMV检测
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新城疫病毒HB92株M基因的克隆和序列分析 被引量:2
13
作者 陈玉栋 潘兹书 +2 位作者 邵华斌 杨峻 张楚瑜 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期479-485,共7页
采用RT PCR方法扩增了新城疫病毒 (NDV)无毒耐热株 (HB92株 )M基因 ,将其克隆于 pGEM T载体 ,并进行了序列测定和分析 .结果显示 ,测定的M基因长 12 2 3个核苷酸 ,包含一个 10 95个核苷酸的开放阅读框(ORF) ,编码 36 4个氨基酸 .与已报... 采用RT PCR方法扩增了新城疫病毒 (NDV)无毒耐热株 (HB92株 )M基因 ,将其克隆于 pGEM T载体 ,并进行了序列测定和分析 .结果显示 ,测定的M基因长 12 2 3个核苷酸 ,包含一个 10 95个核苷酸的开放阅读框(ORF) ,编码 36 4个氨基酸 .与已报道的 10株NDVM基因比较 ,核苷酸同源性为 88.4 %~ 95 .8% ,氨基酸同源性为 89.8%~ 95 .3% ,HB92株与V4株M基因核苷酸的同源性最高 (达 95 .8% ) .NDVM蛋白分子中有 9对碱性氨基酸 ,在多肽的第 117~ 12 0位有一个含 4个氨基酸CKKS的特征性结构 .这些结果为揭示NDVHB92株的分子生物学背景 ,了解NDV的分子进化和遗传变异机理 ,进而开发利用HB92株奠定了基础 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HB92株 M基因 基因克隆 序列分析 基质蛋白基因 分子进化 遗传变异机理 RT-PCR方法
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猪瘟病毒囊膜糖蛋白DNA疫苗的研制 被引量:6
14
作者 王宁 张楚瑜 +1 位作者 付烈振 丁建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第3期201-203,共3页
构建了含有猪瘟病毒石门株囊膜糖蛋白(E2)基因的重组真核表达质粒pRCSE2。将pRCSE2和空载体pRC分别免疫小鼠,ELISA检测结果表明:仅pRCSE2免疫鼠可以产生猪瘟病毒的特异抗体。DNA疫苗在许多传染病研... 构建了含有猪瘟病毒石门株囊膜糖蛋白(E2)基因的重组真核表达质粒pRCSE2。将pRCSE2和空载体pRC分别免疫小鼠,ELISA检测结果表明:仅pRCSE2免疫鼠可以产生猪瘟病毒的特异抗体。DNA疫苗在许多传染病研究中已取得可喜成果,因此猪瘟病毒DNA疫苗可能会成为防制猪瘟的一条新的途径。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 DNA疫苗 囊膜糖蛋白
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猪伪狂犬病毒蛋白激酶基因的序列测定与分析 被引量:4
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作者 潘兹书 张楚瑜 +2 位作者 丁建华 罗满林 雷亮 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期38-43,共6页
对伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB株 )蛋白激酶 (PK)基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与PRVNIA 3株、Ka株以及HSV 1、VZVPK基因的同源性。结果显示 ,在测定全长 1312bp的DNA序列中 ,包括着一个10 0 2核苷酸的开放读框 ,可编码 334... 对伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB株 )蛋白激酶 (PK)基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与PRVNIA 3株、Ka株以及HSV 1、VZVPK基因的同源性。结果显示 ,在测定全长 1312bp的DNA序列中 ,包括着一个10 0 2核苷酸的开放读框 ,可编码 334个氨基酸组成的多肽。PRV HB株PK与PRV NIA3、PRV Ka、HSV 1、VZVPK基因比较 ,核苷酸的同源性分别为 98 7%、97 5 %、5 0 7%和 42 0 % ;基因编码区氨基酸序列的同源性分别为98 2 %、95 8%、37 7%和 37 2 %。PRVPK具有细胞丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒湖北株 蛋白激酶 核苷酸序列
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隐马尔可夫模型—改进的预测蛋白质二级结构方法 被引量:9
16
作者 石峰 莫忠息 张楚瑜 《生物数学学报》 CSCD 2004年第2期233-237,共5页
引入蛋白质二级结构预测的新方法:隐马尔可夫模型.其中将蛋白质的二级结构分成三类:H(指α-螺旋),E(β-折叠)及O(包括转角,卷曲及其他结构).该方法属于统计方法,但考虑了相邻氨基酸之间的相互作用(体现在状态传输概率).通过模型的改进... 引入蛋白质二级结构预测的新方法:隐马尔可夫模型.其中将蛋白质的二级结构分成三类:H(指α-螺旋),E(β-折叠)及O(包括转角,卷曲及其他结构).该方法属于统计方法,但考虑了相邻氨基酸之间的相互作用(体现在状态传输概率).通过模型的改进及参数的确定后,我们编制了程序HMMPS.用它来预测蛋白质二级结构,具有很高的准确度.其中关于H1E和O的准确率分别达到80.1%,72.0%和63.2%.这表明,我们的方法是较为可靠的. 展开更多
关键词 隐马尔可夫模型 VITERBI算法 二级结构预测
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正链RNA病毒基因组感染性克隆研究进展 被引量:6
17
作者 吴海祥 张楚瑜 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期493-499,共7页
综合叙述了构建正链RNA病毒基因组全长感染性cDNA克隆的基本思路和关键技术 ,并总结了影响基因组全长克隆感染性的因素 还简要介绍了利用正链RNA病毒基因组感染性克隆所取得的一些研究进展 。
关键词 RNA病毒 基因组全长cDNA 感染性克隆 研究进展
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伪狂犬病病毒湖北株糖蛋白gD基因的克隆及序列测定 被引量:2
18
作者 王家富 张楚瑜 +3 位作者 丁建华 周荣 温淑娟 黄镇华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期65-69,共5页
According to the sequence of gD gene of PRV Rice strain, the primers of 22bp were designed.Using PRV genomic DNA of Hubei and Shuangcheng virus strains which infected BHK 21 cell separately as template, the gD... According to the sequence of gD gene of PRV Rice strain, the primers of 22bp were designed.Using PRV genomic DNA of Hubei and Shuangcheng virus strains which infected BHK 21 cell separately as template, the gD gene of PRV was amplified sucessfully by PCR and cloned into pGEM T vector. Restriction enzyme analysis showed that the cloned gD gene at SmaⅠ,SalⅠ,KpnⅠ,PvuⅡ sites was the same as that of PRV Rice strain. The gD gene consisted of 1,263 nucleotides including an open reading frame spanning 1,197 nucleotieds which could encode a protein of 398 amino acids. The ORF didn′t include an amino acid sequence directing N linked glycosylation (NXT or NXS). Comparison of our complete Hubei strain gD gene sequence with the Rice strain gD gene sequence showed that the nucleotide and deduced amino acid homology were about 97% and there was an 12 basepair deletion in 835 846 nucleotide sites that coded Arg Pro Arg Pro. A region of the amino acid sequence and the positions of the cysteine residues of PRV HB gD were homologous to HSV I glycoprotein D. This work laid foundation for PRV gene immunization and studying PRV sub unit vaccine. 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 GD基因 PCR扩增 基因克隆 序列
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伪狂犬病毒蛋白激酶基因的PCR扩增及其克隆鉴定 被引量:7
19
作者 罗满林 丁建华 +1 位作者 王家富 张楚瑜 《中国病毒学》 CSCD 1996年第4期360-364,共5页
以BHK-21细胞单层上增殖的伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),经离心浓缩后,用SDS-蛋白酶K消化法分离纯化PRV基因组DNA。参照PRVKa株和NIA-3株蛋白激酶(PK)基因的DNA序列... 以BHK-21细胞单层上增殖的伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),经离心浓缩后,用SDS-蛋白酶K消化法分离纯化PRV基因组DNA。参照PRVKa株和NIA-3株蛋白激酶(PK)基因的DNA序列,设计并合成了一对长度为26bp和32bp的引物,以纯化的PRV基因组DNA为模板,用PCR技术成功地扩增出我国伪狂犬病毒地方株的PK基因,并将它克隆于pUC19载体。酶切分析结果表明,所获PK基因克隆在PstI、SmaI、XhoI和SalI上的切点与PRVNIA-3株相同。为下一步进行PK基因的体外缺失和重组,以构建减毒的PK缺失疫苗株奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 蛋白激酶基因 扩增 聚合酶链反应
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产朊假丝酵母细胞壁33ku蛋白的功能研究 被引量:5
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作者 张西平 张楚瑜 王鄂生 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第6期543-548,共6页
通过胰蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶对产朊假丝酵母Candidautilis细胞壁的酶解 ,发现一种分子质量为 33ku的酵母细胞壁主要结构蛋白 .研究显示 ,在细胞壁上这种蛋白质与细胞壁绝大多数蛋白质成分不同 ,它不被胰蛋白酶水解 ,但对枯草杆菌蛋白... 通过胰蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶对产朊假丝酵母Candidautilis细胞壁的酶解 ,发现一种分子质量为 33ku的酵母细胞壁主要结构蛋白 .研究显示 ,在细胞壁上这种蛋白质与细胞壁绝大多数蛋白质成分不同 ,它不被胰蛋白酶水解 ,但对枯草杆菌蛋白酶的作用敏感 . 33ku蛋白存在于酵母菌整个对数生长期的细胞壁中 ,特别是在对数早期细胞壁中 ,它是唯一的对胰蛋白酶作用不敏感的蛋白质成分 .实验证明 ,该蛋白质对维系酵母细胞壁骨架成分葡聚糖的相互连接和细胞壁的完整结构 ,具有重要作用 。 展开更多
关键词 产朊假丝酵母 细胞壁 蛋白 功能
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