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抗ENO1抗体联合二甲双胍通过靶向肿瘤干细胞逆转人非小细胞肺癌A549细胞对西妥昔单抗的抵抗 被引量：5
1
作者 张蕙雯 杨婷 +5 位作者 禹卓玥 孙立新 刘军 遇珑 孙力超 冉宇靓 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期239-246,共8页
目的:探究抗烯醇化酶1(enolase 1,ENO1)抗体、二甲双胍(metformin,MET)通过靶向肿瘤干细胞对西妥昔单抗(cetuximab,CTX)耐药型非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和干性的影响及其可能的作用机制。方法:10 mmol/L MET联合40μg/ml抗E... 目的:探究抗烯醇化酶1(enolase 1,ENO1)抗体、二甲双胍(metformin,MET)通过靶向肿瘤干细胞对西妥昔单抗(cetuximab,CTX)耐药型非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和干性的影响及其可能的作用机制。方法:10 mmol/L MET联合40μg/ml抗ENO1抗体处理CTX(35μg/ml)耐药型非小细胞肺癌细胞A549,4 d后通过增殖、克隆形成、迁移、侵袭、甲基纤维素成球实验等检测联合治疗对A549肺癌细胞的影响。同时通过流式细胞术检测CTX、MET和抗ENO1抗体分别以单药及三药联合处理对ALDH+和CD44+两种肺癌干细胞亚群的影响。结果:CTX、MET和抗ENO1抗体联合处理显著抑制A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力及A549细胞的自我更新能力。流式细胞术分析发现MET可显著抑制ALDH+干细胞亚群,而抗ENO1抗体可显著抑制CD44+干细胞亚群,三药联合处理可同时显著抑制ALDH+和CD44+干细胞亚群。结论:MET和抗ENO1抗体分别靶向ALDH+和CD44+肿瘤干细胞亚群,两者联合可有效逆转A549细胞对CTX的抗性,从而更有效地抑制A549细胞的干性、增殖、迁移和复发。 展开更多
关键词 西妥昔单抗 二甲双胍 抗烯醇化酶1抗体 肺癌干细胞 A549细胞 联合治疗
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抗HSP90抗体通过内化eHSP90抑制人胃癌干细胞并提高顺铂的抗癌效果 被引量：1
2
作者 孙新 张蕙雯 +4 位作者 孙立新 刘军 遇珑 孙力超 冉宇靓 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期284-293,共10页
目的:探索抗HSP90单克隆抗体28C10通过靶向肿瘤干细胞促进顺铂(cisplatin,DDP)对人胃癌细胞PAMC82恶性生物学行为的抑制效果及其可能的作用机制。方法:28C10单独或与DDP联合处理人胃癌细胞PAMC82,采用不同实验方法检测该细胞的无血清成... 目的:探索抗HSP90单克隆抗体28C10通过靶向肿瘤干细胞促进顺铂(cisplatin,DDP)对人胃癌细胞PAMC82恶性生物学行为的抑制效果及其可能的作用机制。方法:28C10单独或与DDP联合处理人胃癌细胞PAMC82,采用不同实验方法检测该细胞的无血清成球能力、迁移和侵袭能力与克隆形成能力,CCK-8法检测28C10对PAMC82细胞恶性生物学行为和协同DDP抗癌能力的影响。采用细胞免疫荧光及流式细胞术检测PAMC82细胞中HSP90及eHSP90(extracellular HSP90)的表达、定位、eHSP90^(+)亚群比例,以及28C10处理后对ALDH^(+)、CD44^(+)、eHSP90^(+)细胞亚群的影响。采用WB实验检测28C10作用后PAMC82细胞中HSP90、干性相关蛋白以及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白表达的变化。结果:胃癌细胞PAMC82膜表面表达eHSP90,具有2%~3%的eHSP90^(+)细胞亚群,且eHSP90^(+)细胞多为与ALDH^(+)或CD44^(+)共阳性细胞。28C10处理能显著抑制PAMC82细胞的成球、克隆形成、增殖、耐药、迁移及侵袭能力,而且和DDP联用的效果更明显(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术分析发现28C10处理显著抑制PAMC82细胞的eHSP90^(+)、ALDH^(+)和CD44^(+)亚群数量(均P<0.01)。免疫荧光实验发现28C10作用后eHSP90发生内吞,WB实验结果显示eHSP90、CD44、ALDH和干性相关蛋白OCT4、SOX2表达量均降低(P<0.05或P<0.01)。结论:抗HSP90单克隆抗体28C10可靶向胃癌PAMC82细胞的ALDH^(+)、CD44^(+)肿瘤干细胞相关亚群、内化eHSP90且降低细胞总HSP90的水平、抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而有效地抑制PAMC82细胞的干性、耐药和其他恶性生物学行为,协同DDP显著提高抗癌效果。 展开更多
关键词 胃癌 PAMC82细胞 肿瘤干细胞 eHSP90 28C10 靶向治疗 顺铂
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羧肽酶A4活化STAT3促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭 被引量：1
3
作者 禹卓玥 张蕙雯 +6 位作者 杨婷 牛亚楠 孙立新 刘军 遇珑 冉宇靓 孙力超 《临床检验杂志》 CAS 2021年第3期226-231,共6页
目的探究肿瘤相关基因羧肽酶A4(CPA4)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关分子机制。方法慢病毒载体构建MHCC97L-CPA4过表达细胞系和MHCC97H-shCPA4敲减细胞系,分别以MHCC97L-vector和MHCC97H-shNC细胞系作为对照。采用实时荧光定... 目的探究肿瘤相关基因羧肽酶A4(CPA4)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关分子机制。方法慢病毒载体构建MHCC97L-CPA4过表达细胞系和MHCC97H-shCPA4敲减细胞系,分别以MHCC97L-vector和MHCC97H-shNC细胞系作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和western blot检测各组细胞中CPA4 mRNA和蛋白质的表达;CCK8试验和克隆形成试验检测各组细胞的体外增殖能力;Transwell试验检测细胞的体外迁移、侵袭能力;western blot检测各组细胞STAT3/p-STAT3/c-myc的表达差异。结果与vector组相比,CPA4组MHCC97L细胞的增殖、迁移、侵袭能力均升高(P<0.05);与shNC组相比,shCPA4组MHCC97H细胞的增殖、迁移、侵袭能力均降低(P<0.05)。western blot结果显示,与vector组相比,CPA4组MHCC97L细胞p-STAT3、c-myc蛋白的表达水平升高(P<0.05);与shNC组相比,shCPA4组MHCC97H细胞p-STAT3、c-myc蛋白的表达水平降低(P<0.05)。结论CPA4可能通过激活STAT3信号通路促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 羧肽酶A4 肝癌 增殖 迁移 侵袭 STAT3
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抗肝癌干细胞单抗的体内外功能
4
作者 禹卓玥 牛亚楠 +3 位作者 张蕙雯 孙立新 冉宇靓 孙力超 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期656-660,共5页
目的探讨一株抗肝癌干细胞单抗HC-7B2的体、内外功能,为肝癌的靶向治疗提供候选单抗。方法采用SD9PAGE电泳法检测抗体纯度。采用无血清成球实验和侵袭实验分析体外HC-7B2单抗对肝癌干细胞自我更新和侵袭的影响。采用CCK8法检测HC-7B2单... 目的探讨一株抗肝癌干细胞单抗HC-7B2的体、内外功能,为肝癌的靶向治疗提供候选单抗。方法采用SD9PAGE电泳法检测抗体纯度。采用无血清成球实验和侵袭实验分析体外HC-7B2单抗对肝癌干细胞自我更新和侵袭的影响。采用CCK8法检测HC-7B2单抗联合顺铂对肝癌干细胞增殖能力的影响。裸鼠体内治疗实验研究单抗HC-7B2联合顺铂对肝癌移植瘤生长的抑制作用。结果纯化单抗HC-7B2,鉴定纯度>90%。体外无血清成球实验结果显示,单抗HC-7B2处理组MHCC97-L sphere细胞成球数量为(69±17)个,阴性对照组为(115±20)个,高于抗体处理组,差异有统计学意义t=26.56,P<0.01。侵袭实验结果显示,单抗HC-7B2处理组侵袭细胞数(72±19)低于阴性对照组(156±18),差异有统计学意义t=69.34,P<0.001。CCK-8法结果显示,单抗HC-7B2联合顺铂较单用顺铂可抑制MHCC97-L sphere细胞生长,F=49.42,P<0.001;单独使用顺铂的半数抑制浓度(IC_(50))为0.77μg/L,而顺铂联合高、中、低剂量单抗HC-7B2的IC_(50)分别为0.089,0.193和0.550μg/L。体内治疗实验研究结果显示,单抗HC-7B2(2.5 mg/kg)和HC-7B2(10 mg/kg)联合顺铂较单用顺铂组均可显著抑制移植瘤生长,抑制率分别为82.4%(t=7.401,P<0.05)和92.0%(t=8.690,P<0.001),而单用顺铂组的抑制率为53.0%,t=2.536,P<0.05。结论抗肝癌干细胞单抗HC-7B2体外能显著抑制肝癌干细胞的自我更新、侵袭能力以及增加顺铂敏感性,体内单抗联合顺铂显著抑制移植瘤的生长和延长小鼠存活期,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有潜在应用价值的候选单抗药物。 展开更多
关键词 肝癌 肿瘤干细胞 单克隆抗体 靶向治疗 侵袭 自我更新
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