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克隆乙型肝炎病毒DNA在肝与肾细胞中复制与表达的研究
1
作者 张蕾青 张德强 +2 位作者 姚忻 马张妹 何丽芳 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期585-588,共4页
目的　对比研究在体外细胞培养系统中乙型肝炎病毒（ Ｈ Ｂ Ｖ） 在肝、肾细胞中的复制与表达。方法　用克隆 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ（ｐ１７７ 、ｐ３ ．８ Ⅱ、ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９） 分别转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 与２９３ 细胞系；ｐ１７７ ... 目的　对比研究在体外细胞培养系统中乙型肝炎病毒（ Ｈ Ｂ Ｖ） 在肝、肾细胞中的复制与表达。方法　用克隆 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ（ｐ１７７ 、ｐ３ ．８ Ⅱ、ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９） 分别转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 与２９３ 细胞系；ｐ１７７ 与ｐ３ ．８ Ⅱ还转染了原代人胚肾细胞。培养后收集转染细胞培养上清液，用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法检测 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ ；提取转染细胞的 Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｒ Ｎ Ａ，进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交检测细胞内 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ。结果　转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 均有高水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交显示特异的 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 杂交信号。而转染２９３ 细胞后， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 仅出现很低水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交除ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９ 转染细胞出现明显的 Ｈ Ｂ Ｖ 特异杂交信号外，其他为阴性或微弱阳性。转染原代人胚肾细胞均无 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 表达。结论　 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 在肝细胞中可以复制与表达，在肾细胞中仅有低水平的病毒抗原表达而无复制，只? 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 抗原表达 复制 DNA 克隆
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人类免疫缺陷病毒辅助受体的研究进展
2
作者 张蕾青 《国外医学（微生物学分册）》 1997年第4期12-13,36,共3页
人类免疫缺陷病毒(HIV)进入靶细胞需要CD4受体及辅助受体的参与,不同的 HIV株进入靶细胞需不同的辅助受体。亲T细胞HIV株进入靶细胞需融合因子辅助,而亲巨噬细胞HIV株进入靶细胞则需另一种辅助受体CC-CKR-5。HIV辅助受体的发现,为研究 ... 人类免疫缺陷病毒(HIV)进入靶细胞需要CD4受体及辅助受体的参与,不同的 HIV株进入靶细胞需不同的辅助受体。亲T细胞HIV株进入靶细胞需融合因子辅助,而亲巨噬细胞HIV株进入靶细胞则需另一种辅助受体CC-CKR-5。HIV辅助受体的发现,为研究 HIV的致病机制及艾滋病的治疗提供新的方向。 展开更多
关键词 人类 免疫缺陷病毒 辅助受体 艾滋病 治疗
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细胞培养三种染色法检测沙眼衣原体 被引量：3
3
作者 吴中明 彭理年 +4 位作者 刘祖林 张蕾青 肖瑜 周安 文华 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期278-279,共2页
用细胞培养法对１６０ 例有淫乱史病人标本进行沙眼衣原体培养，后经免疫荧光法，Ｇｉｅｍ ｓａ 染色法和碘染法鉴定，结果表明， 免疫荧光法的敏感度最高 （４８／１６０， ３００％ ）， Ｇｉｅｍ ｓａ法次之 （４３／１６０， ２... 用细胞培养法对１６０ 例有淫乱史病人标本进行沙眼衣原体培养，后经免疫荧光法，Ｇｉｅｍ ｓａ 染色法和碘染法鉴定，结果表明， 免疫荧光法的敏感度最高 （４８／１６０， ３００％ ）， Ｇｉｅｍ ｓａ法次之 （４３／１６０， ２６９％ ）， 碘染色法较低 （３９／１６０， ２４４％ ），但后两者简便快速， 可以节省昂贵的试剂购置费用， 仍是有待发展的检测技术； 沙眼衣原体标本贮存以液氮最佳，在７ 天内，－ ７０°Ｃ是一个临界分离温度。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 细胞培养 免疫荧光法 Giemsa染色法 碘染法 贮存温度
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细胞培养法检测沙眼衣原体的探讨
4
作者 吴中明 彭理年 +2 位作者 刘祖林 张蕾青 肖瑜 《贵州医药》 CAS 1999年第1期14-15,共2页
对细胞培养沙眼衣原体的三种检测方法进行了评价。结果显示单抗免疫荧光法的敏感度最高，Giemsa次之，碘染色法较低但简便快速；沙眼衣原体标本贮存以液氮最佳，－70℃7天内亦可较好地保持沙眼衣原体的活性。
关键词 细胞培养 沙眼衣原体 检测方法 泌尿生殖系感染
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慢性乙型肝炎患者血清及肝组织中乙型肝炎病毒核心基因的研究 被引量：4
5
作者 张蕾青 何丽芳 +2 位作者 李雪萍 胡德昌 闻玉梅 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第2期65-68,共4页
３６例肝穿刺诊断为慢性乙型肝炎患者的肝组织及血清，用ＨＢＶ全基因核酸杂交法及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增了病毒的ＰｒｅＣ／Ｃ区基因片段。发现ＰＣＲ法扩增后再经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印转移及核酸杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）可显著... ３６例肝穿刺诊断为慢性乙型肝炎患者的肝组织及血清，用ＨＢＶ全基因核酸杂交法及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增了病毒的ＰｒｅＣ／Ｃ区基因片段。发现ＰＣＲ法扩增后再经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印转移及核酸杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）可显著提高检出ＨＢＶ基因的敏感性。对５例无任何血清ＨＢＶ标记者证实在其肝内存在ＨＢＶ基因。用ＡｖａⅡ，ｓａｕ３ＡＩ，ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ酶切图谱分析上述病例的ｃ基因，与ｐＡＤＲ－１Ｃ基因比较，有４例（５份标本）有Ｓａｕ３ＡＩ的异常酶切位点，提示ＨＢＶ不仅ＰｒｅＣ区存在变异株，Ｃ基因中亦可有变异。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 核心基因 肝炎
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外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒前S/S基因变异的研究 被引量：11
6
作者 张蕾青 何丽芳 +2 位作者 姚忻 周秋霞 闻玉梅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期148-152,共5页
目的研究外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）包膜抗原基因变异的意义。方法收集１９例慢性乙肝患者的ＰＢＭＣ和配对血清，用ＰＣＲ扩增ＰＢＭＣ及血清中ＨＢＶ包膜基因片段（Ｓ，ｐｒｅＳ１，ｐｒｅＳ２），并对其... 目的研究外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）包膜抗原基因变异的意义。方法收集１９例慢性乙肝患者的ＰＢＭＣ和配对血清，用ＰＣＲ扩增ＰＢＭＣ及血清中ＨＢＶ包膜基因片段（Ｓ，ｐｒｅＳ１，ｐｒｅＳ２），并对其中各５例ＰＢＭＣ及配对血清中的ｐｒｅＳ１和ｐｒｅＳ２基因片段，分别进行核苷酸序列分析。结果Ｓ、ｐｒｅＳ１和ｐｒｅＳ２片段在血清和ＰＢＭＣ中的检出率，分别为１００％、９４７％、１００％和０、２６３％、２６３％。与ＨＢＶＡＤＲ序列比较，１０份标本ＨＢＶＤＮＡ核苷酸序列分析，发现２份ｐｒｅＳ１和３份ｐｒｅＳ２的核苷酸序列，没有发生改变；８份ｐｒｅＳ１和７份ｐｒｅＳ２的核苷酸序列，均发生了一个至多个位点的点突变。结论ＰＢＭＣ中存在的包膜基因不完整，因而不会形成完整的ＨＢＶ病毒颗粒，故不支持ＨＢＶ可潜伏于ＰＢＭＣ并发展成为体内ＨＢＶ再感染的来源。ｐｒｅＳ１点突变编码的氨基酸位点，集中在ａａ２１～４７区域，可能会影响ＨＢＶ的吸附和穿入，及组织亲嗜性的改变。ＨＢＶ亚基因片段在ＰＢＭＣ中，是否会影响细胞的功能，有待进一步研究。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前S/S基因 基因变异 PBMC
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乙型肝炎病毒核心基因的酶切图谱及核苷酸序列分析
7
作者 张蕾青 何丽芳 +2 位作者 卫清 胡德昌 闻玉梅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1994年第1期7-10,共4页
对慢性乙型肝炎患者的２２份肝穿刺活检组织及其中配对的６份血清用ＰＣＲ扩增出乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的ＰｒｅＣ／Ｃ基因，选用ＡｖａⅡ、Ｓａｕ３ＡⅠ、ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ５种限制性内切酶消化后，对Ｃ基因进行酶谱分... 对慢性乙型肝炎患者的２２份肝穿刺活检组织及其中配对的６份血清用ＰＣＲ扩增出乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的ＰｒｅＣ／Ｃ基因，选用ＡｖａⅡ、Ｓａｕ３ＡⅠ、ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ５种限制性内切酶消化后，对Ｃ基因进行酶谱分析。发现有６份肝组织及１份血清出现异常酶谱。对Ｓａｕ３ＡⅠ酶解异常标本进行分子克隆及核苷酸序列分析，发现２例患者因２１３７位核苷酸点突变出现了Ｓａｕ３ＡⅠ的新酶切点。类似变化在肝癌组织的ＨＢＶＣ基因中也曾发现，其意义待进一步研究。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 核心基因 酶切图谱
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乙型肝炎患者外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒前S/S基因片段的检测 被引量：1
8
作者 周霞秋 廖丹 +4 位作者 谢青 张蕾青 何丽芳 姚忻 闻玉梅 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2000年第3期184-184,共1页
关键词 乙型肝炎 HBV S/S基因 外周血单核细胞
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