目的可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一种可导致多种癌细胞死亡的强效选择性肿瘤杀伤蛋白质-脂酸复合物。为了使HAMLET应用于肿瘤的治疗并对其杀伤机制进行探讨,我们需...目的可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一种可导致多种癌细胞死亡的强效选择性肿瘤杀伤蛋白质-脂酸复合物。为了使HAMLET应用于肿瘤的治疗并对其杀伤机制进行探讨,我们需要建立和优化简便、快速、规模化制备与纯化HAMLET的方法。方法通过构建人α乳清蛋白分泌型细胞MCF-7的cDNA文库,PCR扩增出编码人α乳清蛋白成熟肽段的全长序列,然后克隆入pET30a(+)表达载体质粒,并转化BL21(DE3)宿主大肠杆菌。经过IPTG诱导,表达细菌的裂解,蛋白体外复性,Ni-NTA亲和层析柱纯化等步骤,获得了高纯度的重组人α乳清蛋白的C端His标签融合蛋白。纯化蛋白经EDTA脱钙后,与油酸(oleic acid,OA)在加热条件下制备HAMLET复合物。同时,对HAMLET的理化特性和生物学活性进行检测。结果通过与经典方法制备的牛α乳清蛋白和OA复合物(BAMLET)进行比较,发现我们制备的HAMLET在紫外吸收光谱、疏水性质特征及肿瘤杀伤活力方面与BAMLET活性相符,并且可引起HeLa肿瘤细胞的凋亡样程序性死亡。结论本研究自主制备的HAMLET成本经济、方法简便且具有较好的规模化放大前景,为日后临床应用奠定基础。展开更多
由于憎水性的存在，硅橡胶绝缘子污秽中的盐分浸出（溶出）过程将比亲水性的无机材料绝缘子的更为复杂，需对硅橡胶绝缘子污秽盐分浸出过程及浸出的盐分量进行研究。为此提出硅橡胶绝缘子的有效等值附盐密度（effective equivalent salt...由于憎水性的存在，硅橡胶绝缘子污秽中的盐分浸出（溶出）过程将比亲水性的无机材料绝缘子的更为复杂，需对硅橡胶绝缘子污秽盐分浸出过程及浸出的盐分量进行研究。为此提出硅橡胶绝缘子的有效等值附盐密度（effective equivalent salt deposit density，EESDD）的概念，用以表征硅橡胶绝缘子不同憎水性污秽层在受潮过程中的实际盐分溶出量，并提出了一种结合憎水性分级测试且便于实际操作的EESDD测量方法。人工污秽层与现场硅橡胶绝缘子污秽层的EESDD测量结果表明：相同憎水性污秽层的有效溶出盐分是等值附盐密度（equivalent salt deposit density，ESDD）所测得盐分的一部分，硅橡胶绝缘子EESDD与ESDD的比值约为50％～90％，且该比值随污秽层憎水性下降而升高，并且同类型污秽灰密与盐密之比较低（〈4）时，其EESDD值相对较高。基于试验结果的分析指出，硅橡胶绝缘子污秽度测量应与其表面憎水性相结合，其爬电距离的配置应参考湿污秽层的有效等值附盐密度来确定。展开更多
文摘目的可致肿瘤细胞死亡的人α乳清蛋白(human alpha-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是一种可导致多种癌细胞死亡的强效选择性肿瘤杀伤蛋白质-脂酸复合物。为了使HAMLET应用于肿瘤的治疗并对其杀伤机制进行探讨,我们需要建立和优化简便、快速、规模化制备与纯化HAMLET的方法。方法通过构建人α乳清蛋白分泌型细胞MCF-7的cDNA文库,PCR扩增出编码人α乳清蛋白成熟肽段的全长序列,然后克隆入pET30a(+)表达载体质粒,并转化BL21(DE3)宿主大肠杆菌。经过IPTG诱导,表达细菌的裂解,蛋白体外复性,Ni-NTA亲和层析柱纯化等步骤,获得了高纯度的重组人α乳清蛋白的C端His标签融合蛋白。纯化蛋白经EDTA脱钙后,与油酸(oleic acid,OA)在加热条件下制备HAMLET复合物。同时,对HAMLET的理化特性和生物学活性进行检测。结果通过与经典方法制备的牛α乳清蛋白和OA复合物(BAMLET)进行比较,发现我们制备的HAMLET在紫外吸收光谱、疏水性质特征及肿瘤杀伤活力方面与BAMLET活性相符,并且可引起HeLa肿瘤细胞的凋亡样程序性死亡。结论本研究自主制备的HAMLET成本经济、方法简便且具有较好的规模化放大前景,为日后临床应用奠定基础。
文摘由于憎水性的存在，硅橡胶绝缘子污秽中的盐分浸出（溶出）过程将比亲水性的无机材料绝缘子的更为复杂，需对硅橡胶绝缘子污秽盐分浸出过程及浸出的盐分量进行研究。为此提出硅橡胶绝缘子的有效等值附盐密度（effective equivalent salt deposit density，EESDD）的概念，用以表征硅橡胶绝缘子不同憎水性污秽层在受潮过程中的实际盐分溶出量，并提出了一种结合憎水性分级测试且便于实际操作的EESDD测量方法。人工污秽层与现场硅橡胶绝缘子污秽层的EESDD测量结果表明：相同憎水性污秽层的有效溶出盐分是等值附盐密度（equivalent salt deposit density，ESDD）所测得盐分的一部分，硅橡胶绝缘子EESDD与ESDD的比值约为50％～90％，且该比值随污秽层憎水性下降而升高，并且同类型污秽灰密与盐密之比较低（〈4）时，其EESDD值相对较高。基于试验结果的分析指出，硅橡胶绝缘子污秽度测量应与其表面憎水性相结合，其爬电距离的配置应参考湿污秽层的有效等值附盐密度来确定。
