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优化护患沟通对提高下肢骨折护理效果的影响评价探讨
1
作者 张鹤龄 《中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生》 2024年第3期0173-0176,共4页
系统总结和科学梳理优化护患沟通,在提升下肢骨折护理效果方面的重大作用。方法 将2021年1月-2022年1月内,我院共诊治100名下肢骨折病人作为研究对象,施用护患沟通的方法举措,评估护理效果。 结果 优化护患沟通方式能够持续提升下肢骨... 系统总结和科学梳理优化护患沟通,在提升下肢骨折护理效果方面的重大作用。方法 将2021年1月-2022年1月内,我院共诊治100名下肢骨折病人作为研究对象,施用护患沟通的方法举措,评估护理效果。 结果 优化护患沟通方式能够持续提升下肢骨折患者主观感受,其中实验组患者的疼痛评分要明显优于对照组患者,数据差异明显,有统计学价值和意义,P<0.05;实验组患者对下肢骨折的认知程度显著提高,P<0.05。结论 护患沟通有助于提高下肢骨折护理水平,帮助缓解疼痛,提高健康认知水平,推荐临床推广。 展开更多
关键词 下肢骨折 健康教育 护患沟通 护理
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抗卷叶病毒（PLRV）转基因马铃薯栽培种及其抗病性研究 被引量：25
2
作者 张鹤龄 李天然 +4 位作者 哈斯阿古拉 额尔敦 张彤 孙燕 庞瑞杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期342-350,共9页
应用本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）中国分离株的外壳蛋白（ＣＰ）基因，通过致瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导，以马铃薯叶园片为转化材料... 应用本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）中国分离株的外壳蛋白（ＣＰ）基因，通过致瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导，以马铃薯叶园片为转化材料，转化了马铃薯Ｄｅｓｉｒｅｅ、Ｆａｖｏｒｉｔａ、虎头和乌盟６０１，并获得了上述四个栽培种的转基因植株，成功地建立了一种简单、快速和效率高的转化体系，卡那霉素抗性、ＰＣＲ扩增目的基因、Ｓｏｕｔｈｅｍ和Ｎｏｒｔｈｅｍｂｌｏｔ分析证明，ＰＬＲＶ外壳蛋白基因已经稳定整合进入转基因马铃薯的染色体组中，并在转录水平上得到表达。窄缝转移分析（Ｓｌｏｔｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓ）表明，每个转化体四倍体基因组中含有１－５个ＣＰ基因拷贝。转基因植物的接种试验证明，转基因工程植株中的ＰＬＲＶ滴度比未转基因的对照植株显著低。蚜虫传播试验证明，转基因植株可减少蚜虫在田间传播ＰＬＲＶ的效率，限制了ＰＬＲＶ的传播，减少田间植物发病的机会。 展开更多
关键词 基因工程 马铃薯 马铃薯卷叶病毒 抗病性
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表达PVY和PLRV双价外壳蛋白基因马铃薯的抗病性研究 被引量：8
3
作者 张鹤龄 彭学贤 +4 位作者 宋艳茹 李天然 孟清 李枞 崔晓江 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1997年第3期236-240,共5页
表达马铃薯Y病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)双价外壳蛋白基因的马铃薯(Solanum tubero-sum L.)栽培品种“Favorita”和“虎头”,经摩擦接种PVY和用桃蚜接种PLRV后,观察症状并用ELISA测定病毒滴度。结果表明,两个品种转双价CP基因的各... 表达马铃薯Y病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)双价外壳蛋白基因的马铃薯(Solanum tubero-sum L.)栽培品种“Favorita”和“虎头”,经摩擦接种PVY和用桃蚜接种PLRV后,观察症状并用ELISA测定病毒滴度。结果表明,两个品种转双价CP基因的各株系,接种病毒后表现无症状或症状轻微,其中PVY和PLRV平均滴度均较不转基因对照植株低。不同品种对PVY和PLRV的抗性比较表明,转双价CP基因的“Favorita”对PVY抗性较明显,而转双价CP基因的“虎头”则对PLRV抗性较对PVY抗性明显。不同转基因株系抗病毒水平不同。“Favorita”9个转双价CP基因株系中有6个株系PVY滴度较未转基因对照降低52.5％～90.0％,而“虎头”7个转双价CP基因株系中有4个株系PLRV含量较对照降低53.0％～98.0％。在抗性株系中还出现一些抗1种病毒或抗2种病毒的抗性较强的单株。 展开更多
关键词 转基因 马铃薯 双价外壳蛋白 基因 马铃薯Y病毒
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表达马铃薯X病毒和Y病毒双价外壳蛋白基因马铃薯植株的抗病性 被引量：12
4
作者 张鹤龄 宋艳茹 +6 位作者 彭学贤 李天然 孟清 崔晓江 侯林林 张莉枝 马庆虎 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期360-366,共7页
表达马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）和马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）双价外壳蛋白（ＣＰ）基因的马铃薯虎头和克新４号，用机械摩擦同时接种ＰＣＸ和ＰＶＹ后，通过症状观察，植株中ＰＶＸ和ＰＶＹ的ＥＬＩＳＡ检测结果表明，转基因虎头和克新４号的... 表达马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）和马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）双价外壳蛋白（ＣＰ）基因的马铃薯虎头和克新４号，用机械摩擦同时接种ＰＣＸ和ＰＶＹ后，通过症状观察，植株中ＰＶＸ和ＰＶＹ的ＥＬＩＳＡ检测结果表明，转基因虎头和克新４号的多数株系的平均病毒含量均明显低于未转基因的对照植株。不同时期病毒测定结果表明，许多株系病毒积累缓慢，延迟麦病。说明转ＰＶＸ、ＰＶＹ双价ＣＰ基因的马铃薯，对ＰＶＸ和ＰＶＹ复合侵染发生不同程度的抗性和保护作用。接种ＰＶＸ和ＰＶＹ后，在转基因株系中出现感病植株，但同时也出现高抗ＰＶＸ或ＰＶＹ，以及同时高抗ＰＶＸ、ＰＶＹ的转基因单株，进一步对这些抗性单株的无性系进行抗病毒鉴定，可望选育出高抗ＰＶＸ和ＰＶＹ两种病毒复合侵染的转基因马铃薯。 展开更多
关键词 转基因马铃薯 马铃薯 X病毒 Y病毒 外壳蛋白
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用生物素标记的cDNA探针检测马铃薯纺锤块茎类病毒 被引量：12
5
作者 张鹤龄 曹先维 +1 位作者 IlseBalbo LuisF.Salazar 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第1期72-76,共5页
用生物素-11-dUTP通过缺口平移将克隆于pST-B5和pST-B14质粒中的马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTV)cDNA进行标记,制备了生物素标记的PSTV-cDNA探针,在硝酸纤维素膜上进行核酸斑点杂交(Nucleic acid spot hybridiz... 用生物素-11-dUTP通过缺口平移将克隆于pST-B5和pST-B14质粒中的马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTV)cDNA进行标记,制备了生物素标记的PSTV-cDNA探针,在硝酸纤维素膜上进行核酸斑点杂交(Nucleic acid spot hybridization,NASH),检测了提纯的PSTV-RNA,带有PSTV全序列的质粒及感染PSTV的马铃薯植株提取液,前两者可检出的最低含量分别为8pg/斑点和0.35pg/斑点。以生物素标记的pST-B14和pST-B5为探针检测感染PSTV的马铃薯植株提取汁液。可测出的最高稀释倍数分别为126和162～243。 展开更多
关键词 马铃薯类病毒 生物素标记 cDNA探测
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马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)复制酶基因结构研究 被引量：2
6
作者 张鹤龄 梁成罡 +2 位作者 张彤 哈斯阿古拉 赵国芬 《中国病毒学》 CAS CSCD 2000年第3期255-263,共9页
用设计合成的两对特异性引物 ,以马铃薯卷叶病毒中国分离株PLRV ChRNA为模板 ,经反转录PCR扩增 ,将复制酶基因 3′端 0 .6kb和 5′端 1.2kb ,克隆于 pUC19中 ,分别构建了重组质粒pLR3和 pLR5,并分五段进行了序列分析。将获得的核苷酸序... 用设计合成的两对特异性引物 ,以马铃薯卷叶病毒中国分离株PLRV ChRNA为模板 ,经反转录PCR扩增 ,将复制酶基因 3′端 0 .6kb和 5′端 1.2kb ,克隆于 pUC19中 ,分别构建了重组质粒pLR3和 pLR5,并分五段进行了序列分析。将获得的核苷酸序列及氨基酸序列与国外报导的四个PLRV分离株的相应区段的序列同源性进行了比较。结果表明具有高度同源性。文中对核苷酸序列中存在的可能移码序列和其下游的茎环结构或假节结构、以及特征性三次重复区及氨基酸序列中复制酶蛋白N端的碱性氨基酸序列以及C端区域中包括GDD在内的 8个特征序列进行了讨论。作者发现移码序列上游的三次重复的核苷酸序列可以形成连续折叠的互补双链区和发夹结构 ,这一结构可能和转译移码有关。此外PLRV复制酶蛋白N端部分氨基酸序列易变 ,而C端氨基酸序列十分保守 ,可能和复制酶功能有更重要关系。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 基因克隆 序列分析 复制酶
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马铃薯卷叶病毒（PLRV）基因组研究进展 被引量：18
7
作者 张鹤龄 《中国病毒学》 CAS CSCD 1996年第1期1-8,共8页
马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）基因组研究进展张鹤龄（内蒙古大学生物系，呼和浩特０１００２１）关键词马铃薯卷叶病毒，基因组ＴｈｅＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＰＬＲＶＧｅｎｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈＺｈａｎｇＨｅｌｉｎｇ（ＩｎｎｅｒＭｏ... 马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）基因组研究进展张鹤龄（内蒙古大学生物系，呼和浩特０１００２１）关键词马铃薯卷叶病毒，基因组ＴｈｅＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＰＬＲＶＧｅｎｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈＺｈａｎｇＨｅｌｉｎｇ（ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，... 展开更多
关键词 植物病毒 马铃薯卷叶病毒 基因组
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马铃薯卷叶病毒的免疫吸附电镜(IBEM)快速诊断 被引量：2
8
作者 张鹤龄 孟清 陈利民 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1990年第2期284-289,共6页
本文应用免疫吸附电镜法,对马铃薯、洋酸浆和曼陀罗植株中的马铃薯叶病毒(PLRV)粒体进行了检侧,其结果为:马铃薯茎、叶、幼芽、休眠块茎在铜网上每标准面积(SA=1000μm^2)中的病毒数量分别为:71364/SA,55909/SA,2273/SA,909/SA,洋酸浆... 本文应用免疫吸附电镜法,对马铃薯、洋酸浆和曼陀罗植株中的马铃薯叶病毒(PLRV)粒体进行了检侧,其结果为:马铃薯茎、叶、幼芽、休眠块茎在铜网上每标准面积(SA=1000μm^2)中的病毒数量分别为:71364/SA,55909/SA,2273/SA,909/SA,洋酸浆茎和叶中的病毒数量分别为:2273/SA,15455/SA,曼陀罗茎中为:3636/SA,同时,当马铃薯茎和叶汁液稀释到1:32和1:8时,仍能明显地检测出PLRV粒体,证明免疫吸附电镜法对检测马铃薯植株中PLRV是一种快速、灵敏、直接、可靠的方法。 展开更多
关键词 马铃薯 卷叶病毒 免疫吸附电镜
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我国马铃薯抗病毒基因工程研究进展 被引量：23
9
作者 张鹤龄 《中国马铃薯》 2000年第1期25-30,共6页
10年来我国已合成克隆了PVX、PVY、PLRV的外壳蛋白基因 ,复制酶基因 ,蛋白酶基因 ,基因调控序列 ,核酶cDNA及其他各种基因并进行了序列分析。建立了完善的致瘤农杆菌介导的马铃薯转化技术。通过外壳蛋白基因介导 ,复制酶基因介导 ,表达... 10年来我国已合成克隆了PVX、PVY、PLRV的外壳蛋白基因 ,复制酶基因 ,蛋白酶基因 ,基因调控序列 ,核酶cDNA及其他各种基因并进行了序列分析。建立了完善的致瘤农杆菌介导的马铃薯转化技术。通过外壳蛋白基因介导 ,复制酶基因介导 ,表达基因调控序列和核酶等基因工程途径 ,获得了一批不同程度上抗PVX、PVY、PVX和PVY ,PVY和PLRV ,PLRY及高抗PSTVd的转基因马铃薯栽培种。这些转基因马铃薯多数已进入田间试验。不久一批抗病毒的优质高产的马铃薯栽培种 ,经过进一步发育 ,必将在生产中推广应用。抗病毒转基因马铃薯培育成功 ,为我国马铃薯病毒病害防治开辟了一条崭新的途径 。 展开更多
关键词 马铃薯 病毒基因克隆 抗病毒基因工程 转基因
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用复制酶基因cDNA探针检测表达病毒外壳蛋白基因马铃薯中的PLRV
10
作者 张鹤龄 梁成罡 冯晓冬 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1997年第2期237-242,共6页
利用马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）复制酶基因３′端长约６００ｂｐ的ｃＤＮＡ，用缺口平移方法进行３２Ｐ同位素标记，制备成ｃＤＮＡ探针，通过核酸斑点杂交，对提纯的马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）、病毒ＲＮＡ、ＰＬＲＶ感染的马铃薯汁... 利用马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）复制酶基因３′端长约６００ｂｐ的ｃＤＮＡ，用缺口平移方法进行３２Ｐ同位素标记，制备成ｃＤＮＡ探针，通过核酸斑点杂交，对提纯的马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）、病毒ＲＮＡ、ＰＬＲＶ感染的马铃薯汁液，表达ＰＬＲＶＣＰ基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测．结果表明，３２Ｐ标记的复制酶基因ｃＤＮＡ探针特异性强、灵敏度高．可测得提纯病毒的最低含量为４０８ｎｇ／ｍｌ，病毒ＲＮＡ最低量为２７．８ｐｇ／ｍｌ，未转ＣＰ基因接种ＰＬＲＶ的马铃薯叶片提取液的最高稀释度为１３７５．接种ＰＬＲＶ的转ＣＰ基因的抗性马铃薯块茎芽和叶片提取液的最高稀释度为０～１／１５．此探针和只转入病毒外壳蛋白基因，不接种ＰＬＲＶ的转基因马铃薯汁液不发生反应．表明，探针只与ＰＬＲＶ基因组ＲＮＡ特异反应，而不与外壳蛋白基因及其ｍＲＮＡ反应，从而为表达ＣＰ基因的转基因马铃薯中ＰＬＲＶ的检测和抗病性鉴定建立了一种可靠的灵敏的分子生物学技术．此项技术已用于转ＣＰ基因马铃薯Ｄｅｓｉｒｅ，Ｆａｖｏｒｉｔａ。 展开更多
关键词 CDNA探针 PLRV 马铃薯病毒 外壳蛋白基因 检测
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番茄ACC合酶反义基因对河套蜜瓜的转化 被引量：14
11
作者 李天然 张治中 +2 位作者 张鹤龄 马庆虎 宋艳茹 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第2期142-145,共4页
河套蜜瓜（CucumismeloLcvHetau）的子叶经预培养。芽诱导和生根培养，获得再生小植株，诱导率达58％。取带有番茄ACC合酶反义基因的双元载体pMQ6／JM109与农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）LBA4404经三亲融合后，与在MS0上萌发5d、并... 河套蜜瓜（CucumismeloLcvHetau）的子叶经预培养。芽诱导和生根培养，获得再生小植株，诱导率达58％。取带有番茄ACC合酶反义基因的双元载体pMQ6／JM109与农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）LBA4404经三亲融合后，与在MS0上萌发5d、并在MS＋1mg／LNAA培养基上预培养3d的子叶共培养48h，然后转入含50mg／L卡那霉素的MS＋6mg／LZT的芽诱导培养基中，1l个月后诱导生芽，待芽长1．5－2cm时转入生根培养基中，1－2周后可诱导产生大量的根，形成完整的转基因小植株。经PCR和分子杂交检测证明，目的基因已整合入河套蜜瓜的基因组中。 展开更多
关键词 河套蜜瓜 子叶 再生小植株 番茄ACC合酶 遗传转化
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用逆转录—聚合酶链反应检测马铃薯卷叶病毒 被引量：25
12
作者 张彤 哈斯阿古拉 +1 位作者 张鹤龄 刘莉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期385-387,共3页
用逆转录—聚合酶链反应检测马铃薯卷叶病毒张彤，哈斯阿古拉，张鹤龄，刘莉（内蒙古大学生物工程中心，呼和浩特，０１００２１）关键词卷叶病毒，反转录－ＰＣＲ，诊断马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｌｖｉｎｉｓ，ＰＬ... 用逆转录—聚合酶链反应检测马铃薯卷叶病毒张彤，哈斯阿古拉，张鹤龄，刘莉（内蒙古大学生物工程中心，呼和浩特，０１００２１）关键词卷叶病毒，反转录－ＰＣＲ，诊断马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｌｖｉｎｉｓ，ＰＬＲＶ）属黄化病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉ... 展开更多
关键词 植物病毒 马铃薯卷叶病毒 逆转录 聚合酶链反应
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马铃薯病毒一步法RT-PCR诊断研究 被引量：11
13
作者 关翠萍 张鹤龄 +3 位作者 门福义 宋艳茹 蒙美莲 陈正华 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期178-185,共8页
运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步... 运用一步法RT-PCR对马铃薯和烟草中的马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒进行了检测,实验表明:对酚-SDS方法提取的病毒核酸进行扩增,一步法RT-PCR检测到的扩增产物的灵敏度较两步法RT-PCR的高100倍左右.两种提取方法对比,用一步法RT-PCR进行扩增,检测到的PEG法扩增产物的灵敏度较酚-SDS法扩增产物的灵敏度高3倍.建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的马铃薯病毒一步法RT-PCR检测技术. 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 马铃薯卷叶病毒 反转录-聚合酶链式反应 诊断
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表达葡萄糖氧化酶基因抗晚疫病马铃薯的培育(英文) 被引量：11
14
作者 张立平 杨静华 +2 位作者 李天然 姚裕琪 张鹤龄 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期59-64,共6页
葡萄糖氧化酶催化分子氧氧化b -D葡萄糖产生葡萄糖酸和H2 O2 。产生H2 O2 和其它活性氧物质是植物对病原体侵入的防御反应。实验证明H2 O2 水平升高不仅可诱发细胞过敏坏死反应 ,而且还能激活抗病基因表达如植物抗毒素及诱导病原相关蛋... 葡萄糖氧化酶催化分子氧氧化b -D葡萄糖产生葡萄糖酸和H2 O2 。产生H2 O2 和其它活性氧物质是植物对病原体侵入的防御反应。实验证明H2 O2 水平升高不仅可诱发细胞过敏坏死反应 ,而且还能激活抗病基因表达如植物抗毒素及诱导病原相关蛋白 (PR)等基因的表达。通过农杆菌介导将来自黑麴霉(Aspergillusniger)的葡萄糖氧化酶基因转入 2个马铃薯重要栽培品种大西洋 (Atlantic)和夏普蒂 (Shepody)中获得 2 3个转基因株系 ,其中 75 %为Kan抗性植株。在 2 3个转基因株系中有 16个株系可用PCR扩增出目的基因。进一步用核酸斑点杂交选出 13个杂交阳性株系。转基因植物总DNA的Southernblot分析表明 ,GO基因已整合到马铃薯四倍体基因组中 ,转基因大西洋植株中目的基因为 2～ 4个拷贝 ,而夏普蒂转基因植株中为 1个拷贝。将转基因植株离体叶片接种呼和浩特地区流行的Phytophthoroinfestans的复合生理小种 1,3,4孢子。结果表明 ,和未转基因对照相比转基因植株病斑出现时间晚 ,病斑扩展速度慢 ,发病程度轻 ,感病叶片少。总体上表现出较明显抗病性。转基因大西洋中抗性株系多于夏普蒂。转基因马铃薯植株体内H2 O2 含量测定表明 ,转基因马铃薯植株的根系和叶片在KI-淀粉培养基上数天后变为蓝色 ,而未转基因对照植株的根系? 展开更多
关键词 葡萄糖氧化酶基因 马铃薯晚疫病 核酸斑点杂交 抗真菌基因工程 抗性 马铃薯
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应用聚合酶链式反应检测犬细小病毒 被引量：10
15
作者 董江丽 李武 +1 位作者 额日贺 张鹤龄 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第3期289-292,共4页
将具有犬细小病毒病典型临床症状的病犬肠溶物经 SDS-酚裂解法提取总 DNA,并以此 DNA为模板 ,通过人工合成的两条 2 0 mer引物进行 PCR扩增 ,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白 VP2 基因中间 1 /3区段 ,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴... 将具有犬细小病毒病典型临床症状的病犬肠溶物经 SDS-酚裂解法提取总 DNA,并以此 DNA为模板 ,通过人工合成的两条 2 0 mer引物进行 PCR扩增 ,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白 VP2 基因中间 1 /3区段 ,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定 .试验结果表明 :用 PCR扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性 ,应用该方法检测的 2 7份病犬肠溶物样品均获得了预计长度的 DNA片段 ( 53 1 bp) ,而健康犬的肠溶物样品 PCR结果为阴性 .该方法的检测灵敏度很高 ,最高可将提取的总 DNA样品稀释 1 0 6倍 ,即可以检测到 1 .3 7pg总 DNA样品中所含的病毒 DNA.由于该方法直接利用病犬肠溶物提取总 DNA,检测方法快速、简便 ,结果可靠 ,可在 2 4 h内获得满意结果 。 展开更多
关键词 犬细小病毒 聚合酶链式反应 肠溶物 检测 CPV
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特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究 被引量：9
16
作者 杨静华 哈斯阿古拉 +1 位作者 梁成罡 张鹤龄 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期158-164,共7页
根据锤头状核酶的作用模式，设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）复制酶基因负链ＲＮＡ的核酶序列。以体外转录的ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负链ＲＮＡ作为底物，与转录的核酶ＲＮＡ共同保温，以检... 根据锤头状核酶的作用模式，设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）复制酶基因负链ＲＮＡ的核酶序列。以体外转录的ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负链ＲＮＡ作为底物，与转录的核酶ＲＮＡ共同保温，以检测核酶对底物的体外切割作用。实验结果表明。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 复制酶基因负链 核酶 体外切割
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犬细小病毒中国内蒙株VP2基因克隆及序列分析 被引量：17
17
作者 董江丽 李淑芬 张鹤龄 《中国病毒学》 CAS CSCD 2000年第4期379-37,共1页
从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒 (CPV)。提取病毒基因组DNA ,并以此DNA为模板 ,采用人工合成的引物进行PCR扩增 ,PCR产物经BamHI、SacI双酶切后 ,克隆于 pUC19质粒的BamHI/SacI位点。重组质粒 pUC... 从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒 (CPV)。提取病毒基因组DNA ,并以此DNA为模板 ,采用人工合成的引物进行PCR扩增 ,PCR产物经BamHI、SacI双酶切后 ,克隆于 pUC19质粒的BamHI/SacI位点。重组质粒 pUCVP2经PCR鉴定、限制酶切分析和序列分析 ,结果表明 :获得了犬细小病毒内蒙株 (CPV IM )VP2基因的全长克隆 ,VP2基因全长 1755nt,与国外报道的美国 1株 (CPV N)、美国 2株 (CPV B)和猫全白细胞减少症病毒(FPLV)的核苷酸序列同源性分别为 99.32 %、98.2 9%、98.52 % ,氨基酸序列同源性分别为98.87%、97.0 9%、97.77%。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2基因 序列分析 中国内蒙株
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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的原核表达及其蛋白产物的Western-blot分析 被引量：5
18
作者 安玉麟 孙瑞芬 +2 位作者 张鹤龄 郭树春 闫素丽 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期84-87,共4页
为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,... 为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,超声波粉碎细菌细胞,SDS-PAGE电泳检测,GOD基因获得了表达,表达的融合蛋白相对分子质量为66.5 kDa。用市售葡萄糖氧化酶免疫家兔获得抗血清,酶联法(ELISA)测定其效价为106,West-ern-blot分析证明表达的融合蛋白与兔抗GOD血清有较强的特异性,为黑曲霉3.758葡萄糖氧化酶(GOD)抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉3.758 葡萄糖氧化酶基因 融合表达 抗血清 ELISA WESTERN-BLOT
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马铃薯卷叶病毒基因间隔区的克隆及序列分析 被引量：11
19
作者 董江丽 哈斯阿古拉 张鹤龄 《中国病毒学》 CAS CSCD 1996年第2期144-148,共5页
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列．设计合成一对特异性引物，以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板，反转录合成ｃＤＮＡ第一条链，经ＰＣＲ扩增后克隆于ｐＵＣ１９质粒中，进一步用ＰＣＲ鉴定、限制酶切... 根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列．设计合成一对特异性引物，以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板，反转录合成ｃＤＮＡ第一条链，经ＰＣＲ扩增后克隆于ｐＵＣ１９质粒中，进一步用ＰＣＲ鉴定、限制酶切分析和序列分析，结果表明：ＰＬＲＶ－Ｃｈ基因间隔区由１９７个核苷酸组成，与国外报道的荷兰ＰＬＲＶ－Ｎ加拿大ＰＬＲＶ－Ｃ，澳大利亚ＰＬＲＶ－Ａ，苏格兰ＰＬＲＶ－Ｓ各株系核苷酸序列具有很高的同源性，同源率依次为９９％、９８％、９３％、９８％。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 植物病毒 基因间隔区 序列分析
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马铃薯卷叶病毒基因间隔区转化的马铃薯抗病性研究 被引量：5
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作者 董江丽 李天然 +1 位作者 哈斯.阿古拉 张鹤龄 《中国病毒学》 CAS CSCD 1999年第1期66-72,共7页
将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒（ＰｏｔａｔｏＬｅａｆｒｏｌＶｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）中国分离株的基因间隔区（ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＩＳ）双链ｃＤＮＡ以正、反向两种方式分别构建于转化载体ｐＲＯＫ２中，通过... 将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒（ＰｏｔａｔｏＬｅａｆｒｏｌＶｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）中国分离株的基因间隔区（ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＩＳ）双链ｃＤＮＡ以正、反向两种方式分别构建于转化载体ｐＲＯＫ２中，通过致瘤农杆菌介导，以马铃薯叶圆片为转化材料，转化马铃薯栽培品种Ｄｅｓｉｒｅ，获得了转基因植株。卡那霉素抗性分析和ＰＣＲ检测目的基因，证明ＰＬＲＶＩＳ双链ｃＤＮＡ已经整合到转基因马铃薯的染色体基因组中。将转基因植株移栽网棚用蚜虫接种ＰＬＲＶ，观察症状并用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）检测转基因植株中ＰＬＲＶ含量。结果表明，表达ＰＬＲＶＩＳ正意和反意ＲＮＡ的转基因植株，接种病毒后表现无症状或症状轻微，ＰＬＲＶ平均滴度均较未转基因对照植株低。表达正意ＲＮＡ的转基因植株ＰＬＲＶ滴度降低４３％～７２％，表达反意ＲＮＡ的转基因植株ＰＬＲＶ滴度降低７２％～８６％，由此可见，表达ＰＬＲＶＩＳ反意ＲＮＡ的转基因马铃薯对ＰＬＲＶ抗性较强。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 基因间隔区 转基因 马铃薯 抗性
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