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兔出血症病毒1、2型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用
1
作者 王冠萱 陈萌萌 +8 位作者 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 葛雷 徐为中 王芳 钱莺娟 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第18期40-44,共5页
兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血... 兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血症病毒1型(GI.1)和兔出血症病毒2型(GI.2)2种基因型均有在我国流行。为了更好地进行流行病学调查、实时监测兔出血症发展趋势和临床诊断,建立了一种检测RHDV1型和RHDV2型病原的快速、简单、特异且敏感的Taq Man实时PCR。结果显示,稀释度为1×10^(8)~1×10^(4) copies/μL标准品建立的标准曲线有良好的线性关系,决定系数r^(2)为0.999;该方法对RHDV1型和RHDV2型具有高度特异性,与兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌等其他病原没有任何交叉反应;检测灵敏度为100~1000 copies/μL;组内和组间变异系数在0.01%~1.61%之间。用该方法对60份临床肝脏样品和52份鼻肛拭子样本进行检测,结果显示,RHDV检出率为70.5%,敏感性显著高于普通RT-PCR方法(51%)。因此,该方法能够同时检测RHDV1型和RHDV2型,可用于鉴别诊断兔出血症病毒。 展开更多
关键词 兔出血症病毒1型 兔出血症病毒2型 双重TaqMan qPCR
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应用微量凝集法检测家兔大肠杆菌抗体水平的试验 被引量：7
2
作者 徐为中 薛家宾 +1 位作者 王启明 诸玉梅 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2002年第1期54-55,共2页
本试验应用兔源致病性大肠杆菌 E1、E2、E7株的培养物经 12 1℃高温处理 2 h,制成含 0 .5 %石炭酸生理盐水的大肠杆菌“O”抗原悬液 ,抗原凝集效果呈现出最佳的检测工作浓度为 12亿细菌 / m l,应用该方法检测免疫过兔大肠杆菌疫苗的家... 本试验应用兔源致病性大肠杆菌 E1、E2、E7株的培养物经 12 1℃高温处理 2 h,制成含 0 .5 %石炭酸生理盐水的大肠杆菌“O”抗原悬液 ,抗原凝集效果呈现出最佳的检测工作浓度为 12亿细菌 / m l,应用该方法检测免疫过兔大肠杆菌疫苗的家兔血清抗体峰值达 1∶ 12 8,而从非免疫兔和免疫过兔瘟、多杀性巴氏杆菌病。 展开更多
关键词 微量凝集法 检测 家兔 大肠杆菌 抗体水平 腹泻病
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固体废物中多环芳烃萃取的前处理技术及测定方法综述 被引量：6
3
作者 徐为中 孙忠岩 +4 位作者 吴迪 张雪英 周俊 郑涛 雍晓雨 《净水技术》 CAS 2015年第2期9-13,共5页
多环芳烃(PAHs)是环境中广泛存在的一类污染物,其存在于水体、大气及土壤介质中,具有种类多及对环境危害大的特点。近年来,PAHs逐渐成为人们研究的重点,虽然国内外已有PAHs的监测技术的分析标准,但是其提取与测定是一个系统的过程,且不... 多环芳烃(PAHs)是环境中广泛存在的一类污染物,其存在于水体、大气及土壤介质中,具有种类多及对环境危害大的特点。近年来,PAHs逐渐成为人们研究的重点,虽然国内外已有PAHs的监测技术的分析标准,但是其提取与测定是一个系统的过程,且不断发展和优化。比较了近年来固体废物(如土壤、污泥等)中PAHs的分析过程中所涉及的萃取、净化及测定方法,总结了各种分析方法的优缺点,介绍了一些新的分析技术。 展开更多
关键词 固体废物 多环芳烃 萃取 前处理 测定
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家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗超纳滤膜浓缩工艺研究 被引量：4
4
作者 徐为中 薛家宾 +4 位作者 诸玉梅 陈兴祥 周永银 杨龙圣 尹秀凤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第5期39-42,共4页
采用超纳滤技术浓缩家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗,建立家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗浓缩工艺。配制家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗,并对其无菌性、安全性和免疫效力进行了检验。结果显示,该工艺可将家兔产气荚膜梭菌(A)型灭活抗原浓缩... 采用超纳滤技术浓缩家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗,建立家兔产气荚膜梭菌(A)型疫苗浓缩工艺。配制家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗,并对其无菌性、安全性和免疫效力进行了检验。结果显示,该工艺可将家兔产气荚膜梭菌(A)型灭活抗原浓缩约7倍,超纳滤膜用NaOH洗后其通量可以恢复;配制的家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗无菌检验合格,安全检验家兔无不良反应,符合动物用生物制品要求;以2 mL/只的剂量免疫家兔,家兔产气荚膜梭菌(A)型超纳滤浓缩疫苗的保护率达100%,传统铝胶疫苗对照组的保护率平均为86.7%,表明超纳滤浓缩疫苗免疫效力优于传统铝胶疫苗。确定了家兔产气荚膜梭菌病(A)型疫苗超纳滤膜膜浓缩的工艺。 展开更多
关键词 家兔 产气荚膜梭菌 膜浓缩 免疫效力
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兔源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定 被引量：5
5
作者 徐为中 王芳 +6 位作者 胡波 范志宇 魏后军 宋艳华 薛家宾 仇汝龙 刘星 《安徽农业科学》 CAS 2015年第33期108-109,145,共3页
从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙... 从送检病死兔肺和肝中分离培养出5株细菌,经过细菌培养、染色镜检、生化试验、PCR鉴定和动物致病性试验对其进行鉴定。鉴定结果表明,分离到的菌株为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强的致病性。药敏试验结果表明,分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、恩诺沙星和磺胺六甲氧嘧啶等药物敏感。 展开更多
关键词 兔 多杀性巴氏杆菌 荚膜血清A型 分离 鉴定
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兔病毒性出血症与多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗生产菌种保存期试验 被引量：1
6
作者 徐为中 薛家宾 +3 位作者 诸玉梅 王启明 陈兴祥 周永银 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第6期334-335,347,共3页
对冻干后-20℃保存3年以上的兔出血症病毒皖阜株、兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C51-17冻干菌种按《中华人民共和国兽用生物制品规程》有关规定进行了冻干毒、菌种存活情况检查和全面系统鉴定。结果表明兔出血症病毒皖阜株3株冻干毒种在-2... 对冻干后-20℃保存3年以上的兔出血症病毒皖阜株、兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C51-17冻干菌种按《中华人民共和国兽用生物制品规程》有关规定进行了冻干毒、菌种存活情况检查和全面系统鉴定。结果表明兔出血症病毒皖阜株3株冻干毒种在-20℃保存3年,血凝性、特异性、最小致死量、免疫原性符合规程要求。兔源荚膜A群多杀性巴氏杆菌C51-17冻干菌种在-20℃保存10年,菌体形态、菌落特征、生化特性、血清学特性、毒力、免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》规定标准。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 多杀性巴氏杆菌 疫苗生产菌种 保存期
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我国家兔危害严重疫病流行现状调查 被引量：2
7
作者 徐为中 薛家宾 +4 位作者 王芳 范志宇 胡波 徐鹏 魏后军 《中国养兔》 2011年第2期27-30,共4页
2008～2010年期间,在我国华东、西南、东北、华南、华北、华中主要家兔养殖地区,调查兔场118个,存栏兔累计约126.56万只,对危害家兔生产严重的兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、支气管败血波氏杆菌病、产气荚膜梭菌病、球虫病、皮肤... 2008～2010年期间,在我国华东、西南、东北、华南、华北、华中主要家兔养殖地区,调查兔场118个,存栏兔累计约126.56万只,对危害家兔生产严重的兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、支气管败血波氏杆菌病、产气荚膜梭菌病、球虫病、皮肤螨虫病、皮肤真菌病等疾病流行现状进行了调查。结果表明:兔病毒性出血症、支气管败血波氏杆菌病、产气荚膜梭菌病、得到了较好的控制,球虫病还存在一定的发病率,多杀性巴氏杆菌病和皮肤真菌病的发病率较高。 展开更多
关键词 家兔 疫病 调查
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兔大肠杆菌结膜炎的诊治 被引量：2
8
作者 徐为中 薛家宾 +1 位作者 王启明 诸玉梅 《中国养兔杂志》 2000年第5期3-3,共1页
关键词 家兔眼病 兔大肠杆菌结膜炎 病原菌 治疗
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兔大肠杆菌病的诊断与防治 被引量：1
9
作者 徐为中 薛家宾 +1 位作者 王启明 董亚芳 《中国养兔杂志》 1999年第3期14-15,共2页
１９９８年底至１９９９年元月，山东枣庄某兔场发生一种疾病，病兔主要表现为吃料减少甚至废绝，精神沉郁，四肢无力，部分病兔发生腹泻，病程短，一般发病后３天内死亡。该场原有４００多只兔，发病一个多月，死亡６０余只，经多种抗... １９９８年底至１９９９年元月，山东枣庄某兔场发生一种疾病，病兔主要表现为吃料减少甚至废绝，精神沉郁，四肢无力，部分病兔发生腹泻，病程短，一般发病后３天内死亡。该场原有４００多只兔，发病一个多月，死亡６０余只，经多种抗生素治疗无效，发病率达１５％，死亡... 展开更多
关键词 兔 大肠杆菌病 诊断 治疗
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兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病(A型)三联浓缩灭活疫苗的研制
10
作者 徐为中 薛家宾 +1 位作者 王启明 诸玉梅 《江苏农业学报》 CSCD 2002年第1期56-59,共4页
通过对抗原的浓缩 ,试制成功兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )三联氢氧化铝浓缩灭活疫苗。将该三联疫苗按每只 1ml的剂量免疫家兔 ,2 1d后效力试验结果表明 ,对兔病毒性出血症的保护率为 10 0 % ;对兔巴氏杆菌... 通过对抗原的浓缩 ,试制成功兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )三联氢氧化铝浓缩灭活疫苗。将该三联疫苗按每只 1ml的剂量免疫家兔 ,2 1d后效力试验结果表明 ,对兔病毒性出血症的保护率为 10 0 % ;对兔巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )的保护率均达 80 %以上 ,且对上述 3种病的免疫期为 180～2 10d(即 6～ 7个月 )。该疫苗 4～ 8℃保存 15 0d(5个月 ) 展开更多
关键词 浓缩灭活疫苗 病毒性出血症 多杀性巴氏杆菌病 产气荚膜梭菌病 三联疫苗 研制
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兔源多杀性巴氏杆菌的发酵培养条件
11
作者 徐为中 薛家宾 +4 位作者 诸玉梅 陈兴祥 周永银 杨龙圣 尹秀凤 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第3期313-314,共2页
关键词 兔源多杀性巴氏杆菌 发酵 培养条件
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兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株ompA基因表达与免疫原性鉴定
12
作者 徐为中 王芳 +6 位作者 胡波 范志宇 魏后军 宋艳华 薛家宾 仇汝龙 刘星 《安徽农业科学》 CAS 2015年第35期227-228,237,共3页
[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-... [目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体p GEX-domp A,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白omp A。[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性。[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 兔多杀性巴氏杆菌 OMPA 原核表达
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獭兔变形杆菌、大肠杆菌混合感染的诊治
13
作者 徐为中 薛家宾 +1 位作者 诸玉梅 周永银 《上海实验动物科学》 CAS 2002年第3期177-177,共1页
关键词 诊断 治疗 獭兔 变形杆菌 大肠杆菌 混合感染
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獭兔变形杆菌、大肠杆菌混合感染的诊治
14
作者 徐为中 薛家宾 +2 位作者 诸玉梅 周永银 王启民 《中国养兔》 2002年第3期9-10,共2页
关键词 獭兔 变形杆菌 大肠杆菌 混合感染 诊断 治疗
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集约化兔场腹泻病的发生与防治
15
作者 徐为中 薛家宾 王启明 《中国养兔杂志》 1997年第4期9-10,共2页
集约化兔场腹泻病的发生与防治徐为中薛家宾王启明（江苏省农科院畜牧兽医研究所，南京２１００１４）某兔场从１９９６年８月初到１２月底，有２５１只家兔发生了腹泻，其中死亡１７８只。病兔临床表现为：精神萎顿，拱背坐于笼子的一... 集约化兔场腹泻病的发生与防治徐为中薛家宾王启明（江苏省农科院畜牧兽医研究所，南京２１００１４）某兔场从１９９６年８月初到１２月底，有２５１只家兔发生了腹泻，其中死亡１７８只。病兔临床表现为：精神萎顿，拱背坐于笼子的一侧，体温下降，部分患兔消瘦、被毛粗... 展开更多
关键词 养兔场 集约化兔场 腹泻病 防治
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十四株兔致病性大肠杆菌的生物学特性
16
作者 徐为中 王启明 +1 位作者 董亚芳 薛家宾 《中国养兔杂志》 1998年第6期23-26,共4页
从不同地区养殖场的病死兔送检病料中分离出１４株大肠埃希氏杆菌，均对小白鼠有强的致病性，对其培养的菌落形态特征、生化特性、致病性、抗生素药物敏感性进行了细菌生物学特性研究，血清型有待以后测定。
关键词 兔 大肠埃希氏杆菌 菌落 致病性 药物敏感性
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兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果 被引量：26
17
作者 王芳 胡波 +5 位作者 任雪枫 范志宇 杨龙圣 徐为中 张则斌 何孔旺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1382-1387,共6页
用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因，通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60，用此质粒转染Sf9昆虫细胞，得到重组病毒rAcV—Bac—VP60，经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定，结果显... 用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因，通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60，用此质粒转染Sf9昆虫细胞，得到重组病毒rAcV—Bac—VP60，经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定，结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下，用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔，结果显示，免疫后21天，兔体内可产生抗RHDV抗体，抗体血凝抑制效价为2^6～2^7，该抗体可以抵抗血凝效价为2^10致死剂量RHDV强毒的攻击，本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 重组杆状病毒 表达 免疫
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中药成分复方对兔外周血淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-10的mRNA表达以及兔出血症疫苗免疫效果的影响 被引量：13
18
作者 杨龙圣 胡元亮 +3 位作者 薛家宾 王芳 王德云 徐为中 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期3809-3815,共7页
【目的】研究两个中药成分复方(cCHMIs)的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10mRNA的表达影... 【目的】研究两个中药成分复方(cCHMIs)的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63d测定免疫器官指数和攻毒保护率。【结果】两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-γ、IL-10mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价,促进体内淋巴细胞增殖,显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育,有较高的攻毒保护效果。【结论】两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。 展开更多
关键词 中药成分复方 兔出血症 淋巴细胞增殖 MRNA表达 抗体效价 免疫器官指数
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兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用 被引量：15
19
作者 胡波 魏后军 +5 位作者 王芳 范志宇 徐鹏 徐为中 薛家宾 何孔旺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1442-1446,共5页
本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法... 本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40ng·μL-1,敏感性为血凝试验(HA)的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测,结果显示,阳性样品为22份,阳性率为13.09%。试验表明:RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV,提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象,该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 RT-PCR 鼻拭子 病毒携带
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兔出血症发病概况及疫苗研究进展 被引量：16
20
作者 杨龙圣 薛家宾 +4 位作者 王芳 徐为中 王德云 胡元亮 闻发全 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第2期144-147,共4页
兔病毒性出血症(RHD)是由兔出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病。该病严重危害养兔业,因而引起国际兽医界的高度重视,1989年,国际兽疫局(O IE)将该病正式列为“国际动物保健编目”B类传染病。本文主要对20年来RHD的发病... 兔病毒性出血症(RHD)是由兔出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病。该病严重危害养兔业,因而引起国际兽医界的高度重视,1989年,国际兽疫局(O IE)将该病正式列为“国际动物保健编目”B类传染病。本文主要对20年来RHD的发病、佐剂灭活疫苗、细胞培养疫苗、基因工程疫苗的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 兔病毒性出血症 疫苗 佐剂 细胞培养 基因工程
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