靶向PI3K通路抑制同型半胱氨酸诱导的hVSMCs增殖、迁移和表型转化

1

作者 潘泓乐 王秀玉 +3 位作者 曾玥 马星 徐灵博 张鸣号 《宁夏医科大学学报》 2023年第7期660-667,共8页

目的 探究PI3K/Akt/mTOR信号通路在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cells,hVSMCs)增殖、迁移和表型转化中的作用。方法 体外培养hVSMCs,给予100μmol·L-1Hcy刺激48 h,复制高... 目的 探究PI3K/Akt/mTOR信号通路在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cells,hVSMCs)增殖、迁移和表型转化中的作用。方法 体外培养hVSMCs,给予100μmol·L-1Hcy刺激48 h,复制高Hcy血症细胞模型。采用MTT法检测hVSMCs增殖,细胞划痕实验检测hVSMCs迁移;RT-qPCR和Western blot法检测hVSMCs表型标志蛋白α-SMA、SM22α和OPN的mRNA表达和蛋白表达;Western blot法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。给予PI3K信号通路的抑制剂LY294002和激动剂740Y-P刺激hVSMCs,检测对Hcy所致hVSMCs增殖、迁移变化和表型转化的影响。结果 Hcy刺激可以诱导hVSMCs发生增殖、迁移及表型转化,并且hVSMCs中PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K和p-Akt的蛋白表达均升高(P均<0.05);给予PI3K信号通路抑制剂LY294002干预后,与Hcy组比较,hVSMCs增殖降低(P<0.05);hVSMCs划痕面积增大(P<0.05);α-SMA和SM22α mRNA和蛋白表达量均增加(P均<0.05),OPN的mRNA和蛋白表达量均降低(P均<0.05)。给予PI3K信号通路激动剂740Y-P干预后,与Hcy组比较则得到了相反的结果。结论 Hcy通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,诱导hVSMCs增殖、迁移及由收缩表型向合成表型转化,抑制PI3K信号通路对Hcy诱导的hVSMCs增殖、迁移及表型转化起到保护作用。 展开更多

关键词 PI3K/Akt/mTOR信号通路 同型半胱氨酸 人血管平滑肌细胞 表型转化

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FoxO1 DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝细胞凋亡中的作用 被引量：12

2

作者 谢琳 丁宁 +4 位作者 徐灵博 姜怡邓 杨晓玲 马胜超 焦运 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第16期2659-2662,2669,共5页

目的探讨叉头状转录因子O1(Fox O1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内质网应激致肝细胞凋亡中的作用。方法将人肝细胞分为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/LHcy)、干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12),干预细胞48 h后... 目的探讨叉头状转录因子O1(Fox O1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内质网应激致肝细胞凋亡中的作用。方法将人肝细胞分为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/LHcy)、干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12),干预细胞48 h后,流式细胞术检测肝细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(q PCR)检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白-1(XBP-1)及C/EPB同源蛋白(CHOP)的表达水平;q PCR和Western blot分别检测Fox O1m RNA及蛋白的表达水平;巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测Fox O1 DNA甲基化水平。结果与对照组相比,Hcy组肝细胞凋亡水平增加(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP-1、CHOP m RNA水平升高(P<0.001,P<0.01,P<0.001,P<0.001),同时Fox O1 m RNA及蛋白水平升高(P<0.01,P>0.05),而其DNA甲基化水平降低(P<0.05);干预组较Hcy组凋亡水平降低(P<0.05),GRP78、ATF6、XBP-1、CHOP m RNA水平降低(P<0.001,P<0.01,P<0.01,P<0.001),Fox O1 m RNA及蛋白水平降低(P<0.001,P>0.05),而其DNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Fox O1 DNA高甲基化可能在同型半胱氨酸诱导的内质网应激致肝细胞凋亡中发挥重要作用。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 肝细胞凋亡 内质网应激 FOXO1 DNA甲基化

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衰老心肌细胞缺氧后处理中miR-204的作用 被引量：5

3

作者 徐灵博 郝银菊 +6 位作者 丁宁 谢琳 马胜超 车双双 杨晓玲 姜怡邓 张鸣号 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第18期2764-2767,共4页

目的探索miR-204在衰老心肌细胞缺氧后处理中的作用。方法经D-半乳糖诱导心肌细胞衰老后,随机分为对照组(ONC组)、缺氧复氧组(OAR组)、后处理组(OIPO组)。采用ELISA法检测培养基中c Tn-Ι的含量;微板法检测LDH的含量;XTT法检测细胞活性... 目的探索miR-204在衰老心肌细胞缺氧后处理中的作用。方法经D-半乳糖诱导心肌细胞衰老后,随机分为对照组(ONC组)、缺氧复氧组(OAR组)、后处理组(OIPO组)。采用ELISA法检测培养基中c Tn-Ι的含量;微板法检测LDH的含量;XTT法检测细胞活性;荧光定量PCR法检测miR-204的mRNA表达,并确定miR-204与c Tn-Ι、LDH的相关性。结果与ONC组相比,OAR、OIPO组c Tn-Ι、LDH的含量均增加(P<0.05,P<0.01);与OAR组相比,OIPO组c Tn-Ι、LDH的含量无显著性改变。与ONC组相比,OAR、OIPO组miR-204的表达均降低(P<0.01);相关性分析显示miR-204与c Tn-Ι、LDH呈现负相关。结论缺氧后处理对缺氧复氧所致的衰老心肌细胞损伤的保护作用减弱与miR-204有关。 展开更多

关键词 缺氧后处理 衰老 miR-204

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MST1启动子区DNA低甲基化在ApoE^(-/-)小鼠肾损伤中的作用 被引量：1

4

作者 卢冠军 马胜超 +8 位作者 和杨杨 徐灵博 毛彩艳 郭伟 张辉 王艳华 田珏 杨晓玲 姜怡邓 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期1195-1200,共6页

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及其DNA甲基化在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠肾损伤中的作用及意义。方法实验动物分为2组:(1)Apo E-/-组(n=10):雄性Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食;(2)对照组(n=10):雄性C57BL/6J鼠饲以高蛋氨... 目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及其DNA甲基化在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠肾损伤中的作用及意义。方法实验动物分为2组:(1)Apo E-/-组(n=10):雄性Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食;(2)对照组(n=10):雄性C57BL/6J鼠饲以高蛋氨酸饮食。喂养14周后,全自动生物化学分析仪测定小鼠血清肌酐和尿素氮水平;PAS染色及透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织损伤情况;实时定量PCR及Western blot分别检测小鼠肾脏中MST1 mRNA和蛋白表达水平。巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测小鼠肾脏MST1 DNA甲基化水平。结果与对照组比较,Apo E-/-组血清肌酐和尿素氮分别升高了1.1倍和1.6倍(P<0.01);PAS染色和透射电镜结果显示,Apo E-/-组较对照组肾脏明显损伤;Apo E-/-小鼠肾脏MST1表达分别与血清肌酐和尿素氮水平呈正相关(R2=0.7571,P=0.0012;R2=0.7342,P=0.0015);n MS-PCR结果显示,Apo E-/-组肾脏中MST1 DNA甲基化水平较对照组显著降低(P<0.01)。结论 MST1表达上调可能在Apo E-/-小鼠肾损伤中发挥重要作用,而MST1启动子区DNA低甲基化改变可能是MST1表达上调的重要机制。 展开更多

关键词 哺乳动物不育系20样激酶1 肾损伤 DNA甲基化 载脂蛋白E APOE-/-小鼠

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同型半胱氨酸致足细胞凋亡中FoxO1 DNA甲基化水平增高 被引量：5

5

作者 刘昆 谢琳 +6 位作者 曹军 丁宁 徐灵博 马胜超 李桂忠 姜怡邓 卢冠军 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第2期269-273,共5页

背景:同型半胱氨酸增多会引起肾损伤并导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚不清楚。目的:探讨叉头框转录因子O1(forkhead box O,FoxO1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用。方法:体外培养小鼠肾脏足细胞(MPC-5),将其分为... 背景:同型半胱氨酸增多会引起肾损伤并导致足细胞凋亡,但是其具体机制还尚不清楚。目的:探讨叉头框转录因子O1(forkhead box O,FoxO1)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用。方法:体外培养小鼠肾脏足细胞(MPC-5),将其分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)和同型半胱氨酸组(80μmol/L同型半胱氨酸)。干预细胞48 h后,采用免疫荧光技术检验足细胞凋亡相关蛋白Bax、caspase12和Bcl-2的表达情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FoxO1 mRNA水平;采用Western blot检测FoxO1和DNMT1蛋白表达水平;采用巢式降落式特异性PCR(nMS-PCR)测验FoxO1的DNA甲基化水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组足细胞中Bax和caspase12表达明显增高,Bcl-2表达明显降低;②FoxO1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01);③与对照组相比,同型半胱氨酸组FoxO1 DNA甲基化水平明显升高(P<0.01),同型半胱氨酸组足细胞中DNMT1蛋白表达明显增高(P<0.01);④结果表明:FoxO1 DNA高甲基化在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中作用显著,而DNMT1参与同型半胱氨酸诱导的足细胞凋亡过程。 展开更多

关键词 肾 肾小球 肾损伤 同型半胱氨酸 足细胞 凋亡 因子 甲基化

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同型半胱氨酸在心肌细胞凋亡和增殖中的作用及其机制 被引量：2

6

作者 刘达越 董小艳 +6 位作者 徐灵博 张慧萍 全尚琨 马胜超 白永生 杨勇 李桂忠 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期984-991,共8页

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠心肌细胞凋亡、增殖的作用及其可能机制。方法将大鼠心肌细胞分为对照组与Hcy组(用终浓度为3 mmol/L的Hcy刺激24 h),采用Western blotting检测TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-... 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠心肌细胞凋亡、增殖的作用及其可能机制。方法将大鼠心肌细胞分为对照组与Hcy组(用终浓度为3 mmol/L的Hcy刺激24 h),采用Western blotting检测TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB),凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。将TLR4干扰片段转染心肌细胞,采用Western blotting检测TLR4表达情况,对干扰片段进行筛选和验证。将心肌细胞分为干扰片段空载体组(si-NC+Hcy组)与干扰TLR4组(si-TLR4+Hcy组),并加入3 mmol/L的Hcy干预24 h,采用Western blotting检测心肌细胞MyD88、NF-κB、p-NF-κB,凋亡相关蛋白Bax、cleavedcaspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。结果Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达水平升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3的表达水平降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平升高(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,Hcy组细胞凋亡率明显增高(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。EdU染色结果显示,与对照组比较,Hcy组EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组EdU阳性细胞率明显增高(P<0.01)。结论Hcy可诱导大鼠心肌细胞凋亡,抑制心肌细胞增殖,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 TLR4/NF-κB信号通路 心肌细胞 细胞凋亡 增殖

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脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致大鼠心肌细胞焦亡中的作用 被引量：2

7

作者 董小艳 刘达越 +6 位作者 徐灵博 顾铃毓 马胜超 杨安宁 杨勇 刘云 姜怡邓 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期33-38,共6页

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)... 目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法培养大鼠心肌细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy)与Hcy组(3 mmol/L Hcy),采用Western blotting检测各组FABP4、焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况;采用qRT-PCR检测FABP4 mRNA表达变化;采用免疫荧光染色法检测焦亡相关蛋白的表达变化;用FABP4抑制剂(BMS-309403)处理心肌细胞,然后将细胞分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(3 mmol/L Hcy)及Hcy+BMS-309403组(3 mmol/L Hcy和50μmol/L BMS-309403),再次检测焦亡相关蛋白的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显升高(P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组比较,Hcy组FABP4表达水平明显升高(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,与对照组比较,Hcy组NLRP3、caspase-1、IL-1β荧光强度明显增强。加入FABP4抑制剂(BMS-309403)同时给予Hcy干预后,与Hcy组比较,Hcy+BMS-309403组FABP4、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 FABP4可能对Hcy诱导的大鼠心肌细胞焦亡有促进作用。 展开更多

关键词 心肌细胞 焦亡 同型半胱氨酸 脂肪酸结合蛋白4

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长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)促进同型半胱氨酸致肝细胞自噬作用 被引量：2

8

作者 顾铃毓 徐灵博 +3 位作者 杨安宁 焦运 张慧萍 姜怡邓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期240-245,共6页

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携... 目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5)在同型半胱氨酸(Hcy)致肝细胞自噬中的作用。方法体外培养HL7702人肝细胞,分为对照组和Hcy组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的表达水平,转染携带双荧光蛋白和LC3(mRFP-GFP-LC3)基因的腺病毒,激光扫描共聚焦显微镜技术观察细胞内自噬流水平变化,实时荧光定量PCR检测lncGAS5的表达水平。转染lncGAS5小干涉RNA(si-lncGAS5)及阴性对照小干涉RNA(si-NC),并用Hcy处理,再次检测LC3B和P62及自噬体的变化。结果与对照组比较,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值增加,P62蛋白表达降低,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量增加,lncGAS5表达升高。敲低lncGAS5后,LC3BⅡ/LC3BⅠ比值减小,P62蛋白表达升高,细胞内自噬体及自噬溶酶体数量减少。结论 lncGAS5促进Hcy致肝细胞自噬。 展开更多

关键词 长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncGAS5) 同型半胱氨酸(Hcy) 肝细胞 自噬

原文传递

TLR4/NF-κB信号通路对CBS^(+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响 被引量：5

9

作者 熊建团 顾铃毓 +6 位作者 王青青 丁宁 董小艳 刘达越 徐灵博 焦运 姜怡邓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1227-1232,共6页

目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CB^(S+/-))小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CB^(S+/-)小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析... 目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CB^(S+/-))小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CB^(S+/-)小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析仪检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及同型半胱氨酸(Hcy)水平;分离肝脏并计算肝指数(肝重/体重);ELISA法检测小鼠肝脏组织TC及TG含量变化;苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察小鼠肝脏结构和脂质改变;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达;Pearson相关性分析评估小鼠肝脏中TLR4和NF-κB表达与TC和TG含量的相关性。结果:与CBS+/+组小鼠相比较,CB^(S+/-)组小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),肝指数升高(P<0.05),肝组织及血清中TC和TG含量增加(P<0.05或P<0.01);HE和油红O染色结果表明CB^(S+/-)组小鼠肝脏脂肪变性明显;TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);TLR4和NF-κB分别与小鼠肝脏中TC和TG含量呈正相关。结论:TLR4/NF-κB信号通路在CB^(S+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的形成过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 TLR4/NF-κB信号通路 胱硫醚Β-合成酶 同型半胱氨酸

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血清IL-6在人工肝治疗药物性肝损伤预后评估中的价值 被引量：1

10

作者 马万龙 焦运 +8 位作者 张旭 丁向春 张平 欧阳花 王梦甜 张乐 徐灵博 杨安宁 姜怡邓 《宁夏医科大学学报》 2022年第6期622-629,共8页

目的 探讨血清白细胞介素-6(IL-6)评估人工肝支持系统(ALSS)治疗药物性肝损伤(DILI)患者预后的价值。方法 回顾性收集92例宁夏医科大学总医院诊治的DILI患者的临床及检查资料,患者接受血浆置换(PE)、双重血浆分子吸附系统(DPMAS)或DPMA... 目的 探讨血清白细胞介素-6(IL-6)评估人工肝支持系统(ALSS)治疗药物性肝损伤(DILI)患者预后的价值。方法 回顾性收集92例宁夏医科大学总医院诊治的DILI患者的临床及检查资料,患者接受血浆置换(PE)、双重血浆分子吸附系统(DPMAS)或DPMAS联合PE治疗。采用Cox回归分析和Cox回归分析进入法进行单因素和多因素分析,分析在ALSS治疗后影响DILI患者预后的因素;采用Kaplan-Meier法对两组患者(根据IL-6截断值分组)进行生存分析,用受试者工作曲线(ROC)评估IL-6预测30 d和90 d死亡的准确性;采用配对t检验分析ALSS治疗前后DILI患者血清IL-6表达变化情况。结果 本研究共纳入92例DILI患者,其中胆汁淤积型20例、肝细胞损伤型59例和混合型13例,不同类型患者在人口特征学和血清学指标上差异无统计学意义(P>0.05);单因素和多因素分析提示,IL-6、血红蛋白(Hb)、总胆红素和胃肠道出血是ALSS治疗后DILI患者死亡的独立危险因素;ROC曲线结果提示ALSS术后30 d和90 d的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.711和0.704(P<0.001);以血清IL-6中位数(446 pg·mL^(-1))为界分组,生存分析发现高IL-6组DILI患者ALSS术后死亡率高于低IL-6组(P=0.044);DILI患者ALSS术后血清IL-6水平降低(t=2.963,P=0.0019)。结论 血清IL-6可作为ALSS治疗DILI患者死亡率的独立预测因素。 展开更多

关键词 白细胞介素-6 人工肝系统 药物性肝损伤 预后

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枸杞多糖抑制同型半胱氨酸诱导人脐静脉平滑肌细胞表型转化的实验研究 被引量：1

11

作者 李凡 徐灵博 +1 位作者 伍静 张鸣号 《宁夏医科大学学报》 2018年第6期644-648,共5页

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum ploysacharides,LBP)对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的抑制作用。方法使用人脐静脉VSMCs细胞株培养,取4～7代细胞用于实验。实验分为对照组、100μmol·L^... 目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum ploysacharides,LBP)对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的抑制作用。方法使用人脐静脉VSMCs细胞株培养,取4～7代细胞用于实验。实验分为对照组、100μmol·L^(-1)Hcy干预组、Hcy+1g·L^(-1)LBP干预组、Hcy+2g·L^(-1)LBP干预组、Hcy+4g·L^(-1)LBP干预组共5组。划痕实验测各组VSMCs的迁移情况;光学显微镜观察各组VSMCs的细胞形态;实时定量荧光PCR及Western blot检测各组VSMCs中平滑肌肌动蛋白(SM-actin\SMA)、转凝蛋白(SM22a)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,Hcy组人脐静脉VSMCs增殖迁移率增加(P<0.05),细胞形态变圆,SMA和SM22a mRNA及蛋白表达减少(P<0.05),OPN mRNA及蛋白表达增加(P<0.05)。与Hcy组比较,Hcy+1g·L^(-1) LBP干预组、Hcy+2g·L^(-1) LBP干预组人脐静脉VSMCs增殖迁移率减少,细胞形态变的细长,SMA和SM22a mRNA及蛋白表达增加(P<0.05),而OPN表达减少(P<0.05)。结论 LBP可以抑制Hcy诱导的人脐静脉VSMCs由收缩表型去分化为合成表型,但其效应并不随着LBP浓度的增加而增加。 展开更多

关键词 枸杞多糖 同型半胱氨酸 血管平滑肌细胞 表型转换

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miR-5088-5p在同型半胱氨酸致肝细胞焦亡中的保护作用研究

12

作者 董小艳 刘达越 +5 位作者 徐灵博 顾铃毓 姜怡邓 杨安宁 焦运 李桂忠 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1565-1570,共6页

目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平... 目的探讨miR-5088-5p在同型半胱氨酸诱导肝细胞焦亡中的作用。方法培养正常肝细胞,分为Control组、Hcy组、转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic后给予Hcy干预组,采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、caspase 1、IL-1β的表达水平;采用qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达水平;将CBS^(+/-)小鼠和CBS^(+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,采用全自动生化仪检测小鼠血清中Hcy水平;采用免疫荧光检测小鼠肝组织中焦亡相关蛋白的表达水平。结果与Control组相比,Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平增加(P<0.01);miR-5088-5p表达水平降低(P<0.01);转染miR-5088-5p NC与miR-5088-5p mimic并给予Hcy干预后,与Hcy组相比,miR-5088-5p NC+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达无差异,与miR-5088-5p NC+Hcy组相比,miR-5088-5p mimic+Hcy组NLRP3、caspase 1、IL-1β表达水平明显下降(P<0.05);与CBS^(+/+)小鼠相比,全自动生化分析仪结果显示CBS^(+/-)小鼠血清Hcy水平明显升高(P<0.01),免疫荧光染色结果显示CBS^(+/-)组小鼠肝脏中NLRP3、caspase 1、IL-1β荧光强度增高(P<0.01)。结论miR-5088-5p对同型半胱氨酸诱导的肝细胞焦亡具有保护作用。 展开更多

关键词 CBS小鼠 肝细胞 高同型半胱氨酸血症 MIRNA miR-5088-5p 焦亡

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EZH2在Hcy致泡沫细胞胆固醇聚集中的作用

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作者 郝银菊 丁宁 +4 位作者 李淑强 徐灵博 李南 姜怡邓 杨晓玲 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第19期3176-3180,共5页

目的研究Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞胆固醇聚集中的作用。方法将THP-1源性泡沫细胞分为对照组、100μmol/L Hcy组和叶酸组,油红O检测细胞内脂滴聚集;酶法检测细胞内TC和TG含量;Western-blot检测H3K27me... 目的研究Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞胆固醇聚集中的作用。方法将THP-1源性泡沫细胞分为对照组、100μmol/L Hcy组和叶酸组,油红O检测细胞内脂滴聚集;酶法检测细胞内TC和TG含量;Western-blot检测H3K27me3水平;q-PCR和Western-blot检测EZH2表达;分别将EZH2过表达和干扰后检测泡沫细胞H3K27水平及TG和TC含量。结果 Hcy干预后,细胞内TC和TG含量显著增加(P<0.05),H3K27me3水平和EZH2表达也增加(P<0.05);过表达EZH2使H3K27me3水平增加(P<0.05),并使细胞TC和TG含量增多(P<0.05)。结论 EZH2通过调控H3K27me3水平可能是Hcy促进泡沫细胞胆固醇聚集的重要机制。 展开更多

关键词 EZH2 同型半胱氨酸 泡沫细胞 胆固醇

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