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影响嵌合抗原受体T细胞治疗疗效的因素及其改进策略的研究进展 被引量：1
1
作者 赵庆 何静 +2 位作者 陈全 徐祥 敖罗权 《中国临床医生杂志》 2023年第11期1293-1297,共5页
近年来嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T细胞)治疗在血液恶性肿瘤的临床治疗中已取得成功,迄今为止,美国食品与药品管理局已批准6种CAR-T细胞疗法用于治疗B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)或CD1... 近年来嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T细胞)治疗在血液恶性肿瘤的临床治疗中已取得成功,迄今为止,美国食品与药品管理局已批准6种CAR-T细胞疗法用于治疗B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)或CD19抗原阳性的血液肿瘤^([1])。大量临床数据显示,基于CAR-T细胞治疗方式对标准治疗无法治愈的B细胞恶性肿瘤患者治愈率达25%~50%^([2-3]),其中靶向CD19的CAR显示出最高的临床缓解率,高达80%~90%^([4])。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体T细胞 细胞持久性 细胞记忆性 耗竭 肿瘤抗原逃逸
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稳定表达CD19的HeLa细胞株的构建及其作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞功能鉴定 被引量：3
2
作者 敖罗权 敖翔 +6 位作者 郭韡 邢伟 胡雪停 李战 姚孟维 吴晓凤 徐祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1095-1101,共7页
目的构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能。方法以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19;酶切回收CD19片段和慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,并行重组反应;... 目的构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能。方法以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19;酶切回收CD19片段和慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,并行重组反应;重组载体pLVX-CD19-IRES-Puro基因测序;载体质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,收集浓缩慢病毒,稀释计数法测定滴度;慢病毒感染HeLa细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达株,实时定量PCR和流式细胞术检测CD19表达;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养,ELISA检测培养上清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果插入重组载体中的CD19序列无误;获得滴度为1×10^(8)转导单位(TU)/mL的CD19过表达慢病毒;在筛选所得的稳定表达株中,CD19的mRNA表达水平和膜蛋白表达水平显著高于对照组HeLa细胞;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养后,IL-2、IFN-γ以及TNF-α分泌显著增加。结论稳定表达CD19的HeLa细胞株构建成功,且能作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞。 展开更多
关键词 CD19 HELA细胞 嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞 慢病毒 实体肿瘤
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靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞的构建与功能鉴定 被引量：3
3
作者 吴斯玮 敖翔 +6 位作者 郭韡 邢伟 安天琛 敖罗权 胡雪停 李战 徐祥 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期748-755,共8页
目的:构建靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并评估其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能。方法:选择偏爱密码子技术改造基因序列,以增强CAR分子表达效率,设计靶向GPC3... 目的:构建靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并评估其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能。方法:选择偏爱密码子技术改造基因序列,以增强CAR分子表达效率,设计靶向GPC3抗原的CAR分子基因并构建携带GPC3-CAR基因的慢病毒表达载体p CDH-GPC3-CAR,感染T细胞;采用Western blotting、流式细胞术、实时细胞监测和ELISA技术分别检测GPC3-CAR分子在CAR-T细胞的表达、慢病毒感染T细胞效率、GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤活性和特异性。结果:双酶切p CDH-GPC3-CAR重组慢病毒质粒可见分子质量和GPC3-CAR分子一致的基因片段,成功构建p CDH-GPC3-CAR慢病毒质粒。约54.38%的GPC3-T细胞表达GPC3-CAR分子,称为GPC3-CAR-T细胞。GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性的肝癌细胞Huh-7比GPC3阴性的肝癌细胞SK-HEP-1具有更高效的杀伤能力[(78.96±4.76)%vs(6.87±3.15)%,P<0.01]。与GPC3阳性Huh-7肝癌细胞共培养的肝癌GPC3-CAR-T细胞分泌IFN-γ水平比Mock组高效[(21 371.4±1 808.3)vs(152.8±12.5)pg/ml,P<0.01],这可能是其高效杀伤肝癌细胞的机制之一。结论:靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞具有高效分泌IFN-γ细胞因子并特异高效杀伤GPC3阳性肝癌细胞的能力,为进一步推进GPC3-CAR-T临床前和临床研究奠定基础。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 嵌合抗原受体T细胞 免疫治疗 肝癌
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人PD-L1真核表达载体的构建及结肠癌细胞稳定表达单克隆株的筛选和鉴定 被引量：2
4
作者 毛成毅 杜娟 +4 位作者 马瑜 李向云 敖罗权 徐祥 肖华亮 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第6期843-847,共5页
目的:构建人程序性死亡配体1(PD-L1)重组质粒载体,筛选稳定高表达人PD-L1的结肠癌单克隆细胞株。方法:提取HCT116细胞总RNA,RT-PCR克隆PD-L1基因片段,将其重组至含有HA标签和Neo真核细胞筛选抗性的pc DNA3质粒载体上,转染HCT116细胞,倍... 目的:构建人程序性死亡配体1(PD-L1)重组质粒载体,筛选稳定高表达人PD-L1的结肠癌单克隆细胞株。方法:提取HCT116细胞总RNA,RT-PCR克隆PD-L1基因片段,将其重组至含有HA标签和Neo真核细胞筛选抗性的pc DNA3质粒载体上,转染HCT116细胞,倍比稀释8个细胞浓度至96孔板,G418筛选两周,挑取单细胞克隆,通过免疫印迹鉴定外源性PD-L1的表达;通过MTS、Transwell和软琼脂细胞克隆形成实验比较PD-L1低表达和高表达单克隆细胞株生长增殖、迁移和细胞克隆形成能力的差别;最后通过在两组细胞中过表达帽依赖性荧光素酶报告基因阐述造成上述表型的可能机制。结果:成功构建人PDL1的真核表达载体,并筛选获得稳定高表达PD-L1的HCT116单克隆细胞株。功能研究初步证明PD-L1可促进细胞克隆形成能力、迁移和生长增殖。过表达PD-L1可使帽依赖性荧光素酶报告基因的表达上调约3~4倍,表明其机制部分为PD-L1可上调帽依赖性蛋白质翻译。结论:获得了PD-L1重组质粒载体及可用于后续功能研究的稳定高表达人PD-L1的HCT116单克隆细胞株。 展开更多
关键词 PD-L1 重组质粒载体 稳定高表达结肠癌单克隆细胞株
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靶向卵巢癌叶酸受体α的CAR-NK-92细胞构建及功能鉴定 被引量：1
5
作者 杨宇 敖翔 +7 位作者 李伟强 郭韡 谭燕 敖罗权 何敏 王证程 徐祥 郭建新 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第1期14-19,共6页
目的卵巢叶酸受体α(αFR)在上皮性卵巢癌中高表达。文章拟构建靶向αFR的嵌合抗原受体(CAR)修饰NK-92细胞(NK-92-αFR-CAR),并验证其对αFR阳性靶细胞的杀伤效能,为卵巢癌的临床治疗提供新策略。方法选择偏爱密码子技术设计人源化抗αF... 目的卵巢叶酸受体α(αFR)在上皮性卵巢癌中高表达。文章拟构建靶向αFR的嵌合抗原受体(CAR)修饰NK-92细胞(NK-92-αFR-CAR),并验证其对αFR阳性靶细胞的杀伤效能,为卵巢癌的临床治疗提供新策略。方法选择偏爱密码子技术设计人源化抗αFR抗原的CAR分子基因;构建慢病毒表达载体pLenti-αFR-CAR;包装慢病毒并感染NK-92细胞;Western blot、qPCR及流式细胞术检测αFR-CAR分子在NK-92细胞中的表达效率。LDH释放实验和ELISA检测NK-92-αFR-CAR细胞对αFR阳性卵巢癌细胞的杀伤活性。结果双酶切pLenti-αFR-CAR重组质粒可见分子质量和αFR-CAR分子一致的基因片段。Western blot和qPCR证明αFR-CAR分子在NK-92细胞中确有表达,并且经嘌呤霉素筛选后,αFR-CAR的表达效率超过90%。NK-92-αFR-CAR细胞对卵巢癌细胞的杀伤效应及细胞因子分泌水平呈抗原依赖性,即肿瘤细胞表面αFR表达水平越高,NK-92-αFR-CAR细胞对其杀伤效应越强。NK-92-αFR-CAR细胞与SK-OV-3细胞或A2780细胞共培养后,其IFN-γ分泌水平(5007.81±180.37、2668.30±180.37)较NK-92细胞(360.80±8.44、285.86±12.39)和NK-92-EV细胞(378.75±21.76、292.10±21.76)表达更高(P<0.01);TNF-α分泌水平(964.27±74.95、585.73±83.53)较NK-92细胞(247.92±5.96、231.03±10.47)和NK-92-EV细胞(230.04±13.66、215.13±7.89)表达更高(P<0.01)。但与A-431细胞共培养,3种细胞中IFN-γ和TNF-α表达差异无统计学意义(P<0.05)。结论NK-92-αFR-CAR细胞具有分泌大量IFN-γ和TNF-α细胞因子并特异杀伤αFR阳性卵巢癌细胞的能力,这为NK-92-αFR-CAR细胞进入后续的临床前和临床研究奠定了基础。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体修饰NK-92细胞 卵巢癌 叶酸受体Α 肿瘤免疫
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人脐带间充质干细胞移植对脓毒症小鼠的保护作用研究 被引量：1
6
作者 宋昱庆 朱明 +8 位作者 何骁 郭韡 邢伟 梁东兰 安天琛 敖罗权 黄宏 蒋东坡 徐祥 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第8期1000-1007,共8页
为了评价人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)移植对脓毒症小鼠的疗效,作者将90只小鼠随机均分为3组:假手术(Sham)组、PBS治疗组和h UC-MSCs治疗组。治疗组小鼠采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation ... 为了评价人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)移植对脓毒症小鼠的疗效,作者将90只小鼠随机均分为3组:假手术(Sham)组、PBS治疗组和h UC-MSCs治疗组。治疗组小鼠采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)方式建立脓毒症模型;假手术组小鼠仅开腹探查盲肠,不行CLP。Sham组和PBS治疗组术后3h经尾静脉注射0.2mL PBS,hUC-MSCs治疗组注射等体积的h UC-MSCs悬液(含细胞7.5×10~5/mL)。术后24 h,流式细胞术检测各组小鼠外周血及腹腔灌洗液(peritoneal lavage fl uid,PLF)中的中性粒细胞数量,ELISA检测血清炎症因子水平,生化检验评价肝肾功,HE(hematoxylin and eosin)染色评估肝、肾、肺组织病理变化。观察术后小鼠一般情况,绘制120 h生存曲线。结果显示,hUC-MSCs可以显著改善脓毒症小鼠一般状况,减少中性粒细胞浸润,降低小鼠体内炎症水平,改善器官功能,减轻组织器官损伤,显著提高小鼠存活率。该研究显示了人脐带间充质干细胞移植对脓毒症小鼠的良好保护作用。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 脓毒症 炎症 保护作用
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