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一例比格犬肺炎克雷伯氏菌病的诊断及防控
1
作者 满成 徐士杰 +6 位作者 王馨锐 甄建瑜 赵天祎 李聪 曲雪婷 尹燕博 张灿 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2024年第1期32-38,共7页
为了诊断青岛博隆实验动物养殖基地比格犬病死原因并制定有效防控措施,试验通过临床观察和病理解剖对病犬进行初步诊断;无菌采集病死幼犬肺组织,采用特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)诊断三种常见犬呼吸道病毒,通... 为了诊断青岛博隆实验动物养殖基地比格犬病死原因并制定有效防控措施,试验通过临床观察和病理解剖对病犬进行初步诊断;无菌采集病死幼犬肺组织,采用特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)诊断三种常见犬呼吸道病毒,通过细菌形态学观察、生化试验、基因测序鉴定分离病原菌,并通过小鼠致病性试验和药敏试验分析其致病性和优化用药方案。结果表明:犬发病时主要表现为咳嗽、流鼻涕、食欲不振和轻度腹泻等症状。剖检可见胸腔积液,肺叶淤血和坏死。PCR鉴定犬腺病毒2型(canineadenovirus type 2,CAV 2)、H3N2亚型犬流感病毒(H3N2 subtype canine influenza virus,CIV)和犬副流感病毒(canine parainfluenza virus,CPIV)均为阴性。细菌分离培养显示为该菌革兰氏阴性的粗短杆菌;生化试验和16S rDNA测序鉴定该菌为肺炎克雷伯菌。回归试验结果表明该菌可引起小鼠肺炎症状,具有较强致病力。药敏试验结果显示分离菌株对阿奇霉素、环丙沙星、恩诺沙星敏感,对氨苄西林、头孢他啶、庆大霉素、头孢噻肟、头孢替安、头孢曲松耐药。经犬舍消毒和药物治疗后,该犬养殖场的病情得到有效控制。 展开更多
关键词 犬 肺炎克雷伯氏菌 诊断 药敏试验 防控
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动物源A型产气荚膜梭菌流行情况调查及α毒素基因分析
2
作者 王潘龙 程佳佳 +9 位作者 尹月 刘锡武 王森 栾庆东 原昆鹏 曲雪婷 张晓轩 倪宏波 王建琳 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期47-53,共7页
产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原菌,在一定条件下可引起多种严重疾病。为了调查不同动物A型产气荚膜梭菌流行情况及α毒素基因同源性,本试验从不同地区共采集病料307份,其中鸡133份(包括肉鸡112份、蛋鸡21份)、鸭65份、犬31份、... 产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原菌,在一定条件下可引起多种严重疾病。为了调查不同动物A型产气荚膜梭菌流行情况及α毒素基因同源性,本试验从不同地区共采集病料307份,其中鸡133份(包括肉鸡112份、蛋鸡21份)、鸭65份、犬31份、猪14份、兔子20份、小鼠9份、牛粪便18份、鸵鸟粪便17份。取肠道内容物和粪便进行产气荚膜梭菌分离鉴定和毒素基因分型,并检测cpe、β2毒素基因携带率;从不同地区、不同动物源A型产气荚膜梭菌分离株挑选18株进行α毒素基因扩增,将所得基因序列进行同源性比较。结果显示,307份样品中68份(22.1%)呈产气荚膜梭菌阳性,不同动物源产气荚膜梭菌阳性率介于5.9%~44.4%;68株产气荚膜梭菌分离株α毒素基因阳性率为100%,所有分离株毒素基因分型均为A型,未检测到cpe毒素基因,β2毒素基因总阳性率为63.2%;分离株与NCBI参考菌株α毒素基因相似性介于97.8%~100%。结果表明,不同动物α毒素具有很高的同源性,本调查为研发A型产气荚膜梭菌α毒素通用疫苗提供数据支持。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 基因型 Α毒素 多种动物源
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青岛地区3株犬细小病毒全基因组分析
3
作者 原昆鹏 曲雪婷 +10 位作者 孙军昌 王旭 齐昊南 陈淑贞 王冬冬 尹月 臧立钰 衣玉颖 刘均华 尹燕博 温建新 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期1-6,共6页
为了探明青岛地区免疫过犬细小病毒(CPV)疫苗的犬因犬细小病毒感染死亡的原因,本研究采用全基因序列测定、系统进化树构建、基因分型和氨基酸分析的方法,对从临床发病犬中分离的3株CPV进行分析。结果显示,本实验室于2012年和2015年分离... 为了探明青岛地区免疫过犬细小病毒(CPV)疫苗的犬因犬细小病毒感染死亡的原因,本研究采用全基因序列测定、系统进化树构建、基因分型和氨基酸分析的方法,对从临床发病犬中分离的3株CPV进行分析。结果显示,本实验室于2012年和2015年分离到的2株病毒(CPV-QD12和CPV-QD15)为new CPV-2a型,本研究分离到的1株病毒(CPV-QD20)为CPV-2c型;3株CPV在VP2的第5、267、297、324、370、426、440位氨基酸,NS1的第60、544、545、572、624、630位氨基酸发生了非同义替代。目前广泛使用的进口CPV弱毒活疫苗的基因型为原始的CPV-2型,与CPV流行毒株的基因型存在差异,这可能是造成CPV临床免疫失败的重要原因。因此,为了提升CPV疫苗的保护效率,建议使用CPV流行毒株研发CPV疫苗。 展开更多
关键词 犬 细小病毒 基因型 全基因序列分析 免疫失败
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抗猪流行性腹泻病毒噬菌体单链抗体库的构建及筛选 被引量：2
4
作者 孙举 高倩文 +3 位作者 曲雪婷 仝舟 毕玉海 尹燕博 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期5-9,共5页
构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)噬菌体单链抗体库,筛选鉴定抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体。用猪流行性腹泻疫苗免疫发病耐过的猪,3次免疫后采血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞的总RNA,分别扩增猪IgG重链和轻链可变区,将其组装成scFv基因,连... 构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)噬菌体单链抗体库,筛选鉴定抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体。用猪流行性腹泻疫苗免疫发病耐过的猪,3次免疫后采血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞的总RNA,分别扩增猪IgG重链和轻链可变区,将其组装成scFv基因,连接到噬菌体质粒。进行3轮吸附-洗脱-富集选淘抗猪流行性腹泻病毒的噬菌体单链抗体库。结果构建了库量为9.5×10~9 pfu/mL抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体库,筛选并得到1株亲和活性较好的抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体。成功构建了抗猪流行性腹泻病毒的噬菌体单链抗体库,并获得抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体,可为猪流行性腹泻单克隆抗体的制备提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 单链抗体 噬菌体抗体库
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山东部分地区猫细小病毒、疱疹病毒、杯状病毒流行情况调查 被引量：5
5
作者 曲雪婷 王森 +6 位作者 原昆鹏 崔月瑛 齐昊南 孙强 张本清 陶春霖 尹燕博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期81-84,I0008,共5页
为了解山东省猫细小病毒(FPV)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV)的流行情况,对来自5个不同地区的380份口鼻、粪便拭子进行三重PCR检测,同时对这3种病毒进行分离。结果显示,FPV的PCR检出阳性率为27.9%,FHV为5%,FCV为13.4%。对不... 为了解山东省猫细小病毒(FPV)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV)的流行情况,对来自5个不同地区的380份口鼻、粪便拭子进行三重PCR检测,同时对这3种病毒进行分离。结果显示,FPV的PCR检出阳性率为27.9%,FHV为5%,FCV为13.4%。对不同来源的拭子进行统计发现,来自宠物医院样本的FPV PCR检出阳性率最高,为43.8%;来自养猫户样本的FHV-1 PCR检出阳性率最高,为6.9%;来自流浪猫样本的FCV PCR检出阳性率最高,为44.1%。本调查分离的病毒为诊断试剂及疫苗研究打下了良好的基础。 展开更多
关键词 猫细小病毒 猫疱疹病毒 猫杯状病毒 流行情况调查 病毒分离
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血清1型Ⅰ群禽腺病毒Fiber-2蛋白的表达及其中和作用研究 被引量：1
6
作者 高永娟 栾庆东 +6 位作者 曲雪婷 原昆鹏 王潘龙 赵梓靓 卢艳敬 尹燕博 王建琳 《中国家禽》 北大核心 2022年第8期35-41,共7页
为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免... 为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫SPF鸡制备抗血清,通过鸡LMH细胞研究Fiber-2蛋白抗血清对FAdV-1感染的中和作用。结果显示,FAdV-1 Fiber-2基因扩增产物大小为1 233 bp,构建了pCold-FAdV-1-Fiber-2重组质粒,表达的FAdV-1 Fiber-2蛋白分子量大小为105 ku;FAdV-1 Fiber-2蛋白的抗血清孵育LMH细胞后,与阳性对照组相同第4天细胞出现病变,而阴性对照组细胞均无病变。结果表明,FAdV-1 Fiber-2蛋白抗血清在体外试验中不能中和本血清型病毒的感染,FAdV-1 Fiber-2蛋白作为亚单位疫苗的研究存在风险。 展开更多
关键词 血清1型Ⅰ群禽腺病毒 Fiber-2蛋白 LMH细胞 中和作用
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鸵鸟胚原代组织细胞的培养及鉴定
7
作者 赵梓靓 原昆鹏 +8 位作者 王保俊 栾庆东 曲雪婷 高永娟 王潘龙 赵悦 卢艳敬 尹燕博 王建琳 《中国家禽》 北大核心 2022年第9期39-46,共8页
为研究鸵鸟胚成纤维、肝、肾、脑组织原代细胞的体外分离培养方法,试验选择28胚龄的鸵鸟胚组织,通过胰蛋白酶消化法与组织块贴壁培养法分离培养原代细胞。通过细胞HE染色形态观察、细胞活性与生长曲线测定、RT-qPCR测定细胞基因标志物... 为研究鸵鸟胚成纤维、肝、肾、脑组织原代细胞的体外分离培养方法,试验选择28胚龄的鸵鸟胚组织,通过胰蛋白酶消化法与组织块贴壁培养法分离培养原代细胞。通过细胞HE染色形态观察、细胞活性与生长曲线测定、RT-qPCR测定细胞基因标志物对细胞类型进行鉴定。结果显示:组织块贴壁法培养的细胞12 h后开始生长,胰酶消化法分离培养的细胞,4 h后开始贴壁生长,且采用胰酶消化法获得的细胞传代后状态良好,生长变快;HE染色显示成纤维细胞、肝细胞与肾细胞为多角形或长梭形,脑细胞多呈星状与三角形;RT-qPCR结果显示,与原代细胞相比次代细胞的标志物基因ALB、CD105、CD90、CD73、WT-1、Emx-2、Wnt-4、CD133 mRNA表达水平均明显升高。研究表明,利用胰酶消化法与组织块贴壁培养法均可分离出鸵鸟胚原代细胞,但胰酶消化法分离的细胞更适合后期深入研究细胞功能,为进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸵鸟胚原代细胞 细胞培养 细胞鉴定 相对表达量 生长曲线
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抗Ⅰ型鸭肝炎病毒单链抗体库的构建与筛选 被引量：1
8
作者 韩宜均 孙举 +4 位作者 原昆鹏 曲雪婷 栾庆东 尹燕博 王建琳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期91-96,共6页
为了构建和筛选抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)单链抗体库,试验用Ⅰ型鸭肝炎疫苗免疫樱桃谷鸭,以分离的外周血淋巴细胞总RNA为模板,根据抗体保守区序列设计引物,通过RT-PCR技术扩增出鸭IgG轻链可变区和重链可变区基因,由Linker序列连接,用重... 为了构建和筛选抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)单链抗体库,试验用Ⅰ型鸭肝炎疫苗免疫樱桃谷鸭,以分离的外周血淋巴细胞总RNA为模板,根据抗体保守区序列设计引物,通过RT-PCR技术扩增出鸭IgG轻链可变区和重链可变区基因,由Linker序列连接,用重叠延伸PCR(SOR-PCR)技术将其连接成单链抗体基因,将扩增的单链抗体基因导入pComb3XSS载体中构建抗DHV-Ⅰ噬菌体单链抗体库,并对该噬菌体单链抗体库进行3次吸附-洗脱-富集。结果表明:试验成功构建出库量为8.5×109pfu/mL的抗DHV-Ⅰ噬菌体单链抗体库,筛选出1株亲和力较高的抗DHV-Ⅰ噬菌体单链抗体。说明试验成功构建了鸭源抗DHV-Ⅰ噬菌体单链抗体库,筛选出1株与DHV-Ⅰ亲和力良好的鸭源噬菌体单链抗体。 展开更多
关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ) 噬菌体抗体库 单链抗体(ScFv) 构建 筛选 纯化
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